淫羊藿对体外培养破骨细胞的影响

目的 观察淫羊藿提取物对体外培养破骨细胞的影响。方法 以出生２ｄ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠长骨为来源,培养已成熟生长的破骨细胞;以出生７￣９周的雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨髓为来源,在１．２５－（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３作用下,培养出骨髓诱导而产生的破骨细胞。两种细胞培养过程中均分别加入２００μｇ／Ｌ的淫羊藿提取物。结果 皮质骨内层可培养出多核,体积大,抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色阳性的破骨细胞,淫羊藿提取物对     

膝关节镜下半月板切除72例临床分析

1991年7月～1997年7月,我院行膝关节镜下半月板切除术72例,取得良好效果.现将结果报告如下. 1 临床资料 1.1 一般资料 本组72例,男42例,女30例;年龄23～55岁,平均35岁.其中右膝关节42例,左膝30例;外侧半月板破裂45例,内侧破裂27例;半月板后角损伤25例,体部损伤38例,前角损伤9例;纵裂22例,边缘破裂4例,桶柄样裂10例,不规则破裂25例,磨损退化11例;外侧盘状半月板10例.     

转基因逆转椎间盘退变重组腺病毒载体Ad/CMV-hTGFβ1的构建

目的：构建一个高效的重组腺病毒载体Ad／CMV—hTGFβl，用于进一步的基因转移逆转椎间盘退变的实验研究。方法：应用一种新的重组腺病毒构建系统来构建腺病毒载体。首先将hTGFβ1的cD—NA亚克隆到穿梭质粒pShuttle—CMV上。重组穿梭质粒PShutte—CMV—hTGFβ经PmeI酶切线性化后，与超螺旋的病毒质粒pAdEasy—1共转染大肠杆菌BJ5183。两种质粒在BJ5183中进行同源重组，重组病毒质粒pAd／CMV—hTGFβl经卡那霉素平板筛选获得。经酶切分析鉴定后，重组病毒质粒用PacI酶切线化。线化的病毒质粒经脂质体转染293细胞(包装细胞系)，于2周内收集重组病毒。结果:重组腺病毒质粒经BamHI，PacI酶切鉴定，在0．8％的琼脂糖凝胶电泳中出现了诊断性片段；感染的293细胞出现了明显的细胞病变效应(CPE)；PCR产物电泳证实了重组病毒的存在；免疫组织化学染色证实了hTGF—β1在293细胞中的表达。结论：重组腺病毒载体Ad／CMV—hTGFβl的获得以及目的基因表达的验证使下一步的逆转椎间盘退变的实验研究成为可能。     

腰椎间盘中Ⅴ型和Ⅺ型胶原的定位及分布研究

椎间盘中Ⅴ型和Ⅺ型胶原 ,各约占椎间盘胶原总量的 3 % [1] ,其确切作用以及分布情况还不清楚。我们通过免疫组化方法 ,对胎儿、正常不同年龄成人以及退变椎间盘中Ⅴ型及Ⅺ型胶原的定位和分布规律进行了研究 ,报告如下。1.材料与方法 :(1)胎儿组 :胎儿椎间盘 36个 ,取自 13个保胎失败胎儿的腰3～ 4 、腰4～ 5、腰5～骶1节段 ,胎龄 3.5～8.5个月 ,平均 6个月。 (2 )正常组 :成人椎间盘 17个 ,取自 6例年龄为 2 0～ 36岁(平均 2 8岁 )意外死亡者的腰3～ 4 、腰4～ 5、腰5～骶1节段 ;死亡 2 4ｈ内 ,无菌条件下纵行切开椎间盘 ,根据改良的Ｔｈｏ…     

PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞及其表达产物的测定

目的：测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞的表达产物hTGF-β1，为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础。方法：用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定：用VIDAS数据分析系统对实验数据进行定量分析。结果：原代纤维环细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3．49—3．56倍，为未转染组的3．43～3．55倍；原代髓核细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3．46-3．69倍，为未转染组的3．33．3．63倍。结论：真核表达载体PCI-hTGF-β1可以成功转染体外培养的成人退变椎问盘细胞，并可获得hTGF-β1基因产物的高表达。     

PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞及其表达产物的测定

背景:人转化生长因子β1基因可用于椎间盘退变的基因治疗,但有效载体的构建是实验的关键。目的:测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞可否表达产物人转化生长因子β1,为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础。设计:单一样本实验。单位:山东省创伤骨科研究所,一所市立医院骨科。材料:实验于1999-10/2001-01在山东省创伤骨科研究所实验室进行。椎间盘标本均为椎间盘突出症患者手术中取材(获患者知情同意)。标本1为30岁女性的L45/椎间盘,标本2为38岁女性的L5/S1椎间盘。方法:①培养成人退变椎间盘细胞:标本离体30min内取回实验室,收集原代培养的纤维环细胞和髓核细胞。②转染:将细胞置于24孔培养板中,每孔细胞数目在5.5×105个,应用构建的PCI-hTGF-β1真核表达载体对其进行转染,并设立转染PCI组和未转染组。③用免疫组织化学方法对转染48h后的细胞进行表达产物测定。主要观察指标:两个标本中,各组原代纤维环细胞和髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值比较。结果:①标本1:原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3.49,3.69倍,为未转染组的3.55倍。②标本2:原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3.56,3.46倍,为未转染组的3.43,3.33倍。结论:PCI-hTGF-β1是人转化生长因子β1基因在体外培养退变椎间盘细胞转染中有效的真核表达载体,可以成功转染体外培养的成人退变椎间盘细胞,并可获得人转化生长因子β1基因产物的高表达。     

软骨生长因子的提取、纯化及生物活性测定

目的：通过从鸡软骨中提取具有生物活性的软骨生长因子（CDGF）,为进一步进行体内研究成罗效应及临床应用打下基础,方法：采用氯化钠抽提法分离,制备软骨粗提取物;用肝素－琼脂糖亲合色谱反复层析提纯软骨生长因子;以聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色分析软骨生长因子;采用MTT法对CDGF在培养的软骨细胞上进行活性测定。结果：软骨生长因子能与肝素－琼脂糖紧密结合,亲合层析中,在1．4－1．8mol/LNaCl缓冲液中洗脱出。通过SDS－PAGE凝胶电泳和银染色检测,得到分子量为18500的单一条带,高度纯化的CDGF,其生物活性约1－2ng/ml。结论：肝素－琼脂糖亲合色谱复层析,可以从鸡软骨中得到活性较高,电泳显示单一条带的CDGF。