医学检验专业开展系科结合模式教学的体会

医学检验技术随着科技的发展而日益飞速发展,而当前医学检验教学却严重滞后于临床实践。通过开展系科结合教学模式,充分整合利用全校检验学科的人才、设备、技术等资源,并采取科学的运行机制,使附属医院检验科与检验系的人才、设备、技术等资源形成一体化,从而提升医学检验专业教学质量。     

体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究

目的体外分析CD4 CD25 Treg(regulatory T cells)细胞对CD8 CTL(cytotoxic Tlym-phocytes)细胞杀伤MNK45胃癌细胞株活性的影响及机制。方法通过T细胞纯化柱分选小鼠脾细胞悬液T淋巴细胞,以MACS单阳性和双阳性分选法分别富集CD4 CD25 Treg细胞和CD8 CTL;通过不同浓度CD8 CTL与MNK45胃癌细胞混合培养,筛选有效杀瘤体外培养体系。通过Trans Well分隔培养和混合培养的方式向CTL与MNK45胃癌细胞株组成的体外抗肿瘤培养体系中加入CD4 CD25 Treg细胞,以瑞氏染色显微计数的方法观察Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响,结合ELISA法检测各体系穿孔素浓度,分析影响活性的细胞及免疫学机制。结果质量浓度为2.0×105/ml的CTL与1.0×105/ml MNK45胃癌细胞混合培养,CTL能对MNK45胃癌细胞形成明显的杀伤作用(P<0.01);在此培养体系中以混合培养的方式加入质量浓度为5.0×104/ml CD4 CD25 Treg细胞即可明显抑制培养体系中CTL对肿瘤细胞的杀伤作用;如以Trans Well分隔培养的方式将CD4 CD25 Treg细胞与抗肿瘤培养体系分隔培养,达到同样抑制效能(实验组死亡肿瘤细胞百分率与对照组比较,P<0.05)的CD4 CD25 Treg细胞浓度须≥2.0×105/ml。结论CD4 CD25 Treg细胞能够对CTL杀伤MNK45胃癌细胞株的活性形成明显抑制,在Treg细胞与CTL作用的相应细胞和免疫学机制中,细胞接触机制占主导地位。     

供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞对B淋巴细胞反应的影响

目的 研究供体抗原特异性CD4 CD25 调节性T细胞对受体B细胞反应的影响.方法 用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Lewis大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4 CD25 Treg细胞,然后将分离纯化的Lewis大鼠Treg细胞负载F344大鼠抗原,以RT-PCR检测分选细胞中Foxp3基因表达水平.然后以MTT法证实获得对供体抗原的特异性.将受体Treg细胞与B淋巴细胞组成共培养反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA发检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平.结果 负载供体抗原后,CD4 CD25 调节性T细胞对供体抗原的抑制率(IR)为80.5%.Treg与B细胞共培养组与阳性对照组相比较,上清中的IgG和IgA水平明显降低(P＜0.01),分别达到了(2.4±0.7)μg/ml和(6.0±1.0)μg/ml.在体系中加入Anti-TGF-β1后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.3±0.5)μg/ml和(7.1±0.9)μg/ml;加入Anti-CTLA4后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.4±0.5)μg/ml和(7.3±0.9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.7±0.6)μg/ml和(7.5±0.7)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P＜0.05),但仍明显低于阳性对照组的水平((P＜0.05).结论 负载供体抗原的CD4 CD25 Treg能够有效抑制供体抗原刺激下的B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用.     

院系互动式教学模式在临床检验学教学中的可行性分析

临床医学检验技术随着当代科技的发展而日益迅速地发展着,临床医学检验已成为医学领域中快速发展的学科之一.然而当前临床检验学的现实授课和临床严重脱钩[1].急需变革以应对飞速发展的医学检验.造成此现象的主要原因有客观和主观两个方面.     

严重烫伤小鼠脾脏T淋巴细胞功能受抑的胞内信号转导机制研究

目的探讨严重烧伤后小鼠脾脏T淋巴细胞功能受抑的胞内信号转导分子机制,并分析导致该改变的信号流"瓶颈".方法检测伤后早期(2～168 h)T细胞胞浆蛋白酪氨酸激酶(PTK)、蛋白激酶C(PKC)、肌醇磷脂特异性磷脂酶C(PI-PLC)的活性改变和胞浆游离钙浓度变化,观察伤后T淋巴细胞增殖转化功能及白细胞介素(IL)-2、IL-10分泌活性,分析各信号转导分子活性改变在导致伤后T细胞功能受抑中的作用.结果胞浆PI-PLC活性伤后12 h明显受抑(13.89±0.12)μmol·mg-1·min-1,对照组(16.52±0.48)μmol·mg-1·min一,差异有显著性(P＜0.05),伤后168 h恢复(15.26±0.12)μmol·mg-1·min-1;胞浆Ca2+伤后12 h明显降低(P＜0.05),显著降低持续到伤后168 h;胞浆PTK活性升高,但仅伤后12 h升高显著(34.32±4.22)pmol·mg-1·min-1(P＜0.05);PKC活性呈现先升高(2～12 h)后降低(24～168 h)的双向改变.结论PI-PLC活性受抑,胞浆游离Ca2+降低是伤后T细胞功能受抑的重要原因,胞浆PTK、PKC活性升高可能是对伤后T细胞胞外活化信号内流衰减的补偿.     

树突状细胞在移植免疫耐受诱导中的作用

移植排斥是异体/种组织和器官移植中长期存在而尚未克服的医学难题.目前临床应用的免疫抑制剂虽能使移植排斥反应得到有效控制,但由于其对受者免疫系统非选择性的广泛抑制而常引起感染、肿瘤发生等诸多并发症.因此诱导供者特异性免疫耐受被认为是最终克服移植排斥的有效途径.树突状细胞(dendriticcell,DC)由于来源、发育阶段不同而存在的功能异质性,使其成为诱导移植免疫耐受的重要靶细胞.     

大鼠树突状细胞的体外分离、纯化、扩增及鉴定

目的 探讨诱导及纯化大鼠树突状细胞（Dendritic cells,DC）的方法，为进一步研究树突状细胞的功能、特性及临床应用提供技术方法。方法 应用重组大鼠rGM-CSF、IL－4在体外培养大鼠骨髓前体细胞获得大量DCs，经标抗大鼠OX62单抗免疫磁株分离纯化后的DCs经形态学观察、表型检测、功能学实验鉴定。结果 大鼠骨髓来源的DC在体外培养12－14d后完全成熟，99．36％培养纯化后DC表达大鼠特异性表面标志OX62；典型的成熟大鼠DC形态上类似于小鼠和人类的DC，表型为MHCⅡ＋＋，OX62＋＋，FcγR（CD32）＋／－，CD80＋／－，CD86＋＋，体外功能分析显示该DC能够强烈刺激MLR并有效递呈可溶性抗原OVA刺激初始型T细胞的增殖。结论 成功地建立了体外大量扩增大鼠骨髓DC的方法，为研究其在异种移植及诱导免疫耐受的作用打下基础。     

人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的 用双向电泳技术分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之间的差异表达谱。方法 从人脾脏分选CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞，用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异。结果 分选细胞纯度分别为CD4^ CD25^ T细胞82.3%,CD4^ CD25^-T细胞96.5%，双向电泳分析发现有4个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^ T细胞检测到表达，有9个蛋白点明显仅于CD4^ CD25^-T细胞检测到表达。结论 CD4^ CD25^-T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组有明显差异。     

MRL/lpr小鼠中CD4~+CD25~+调节性T细胞对B细胞影响的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。