上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 构建上皮膜蛋白1（EMP1）基因真核表达载体pEGFP-N1-EMP1,探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用逆转录聚合酶链式反应（PCR）扩增EMP1基因,双酶切法连接至真核表达载体pEGFP-N1双酶切产物大片段,构建pEGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导法将pEGFP-N1-EMP1重组质粒和pEGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞,荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 成功克隆EMP1全长基因,经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体pEGFP-N1,转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示,pEGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组,Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于pEGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示,EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论 成功构建了EMP1真核表达载体,并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。     

牙髓组织工程支架材料研究进展

牙髓坏死可导致牙齿脆性增加,易折裂,并阻碍年轻恒牙牙根持续发育。因此牙髓再生治疗具有重要的临床意义。由于牙髓组织具有复杂、多变的解剖结构且包含神经、血管等多种组织成分,牙髓再生面临诸多挑战。回顾近年来应用组织工程方法探索牙髓组织构建与移植的基础研究和临床应用研究文献,重点讨论适宜支架材料的选择与牙髓组织构建方法。文中述...     

地塞米松对人牙髓细胞增殖分化影响的研究

目的观察地塞米松对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响。方法收集拔除的无龋坏、无牙周疾病的健康前磨牙及第三磨牙,获得牙髓,酶消化联合组织块法体外培养人牙髓细胞(Human dental pulp cells,hDPCs),扩增后取第4代生长状态良好的细胞用于实验。分为两组,实验组hDPCs在含2%胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的αMEM培养基中加入10-8mol/L地塞米松(Dexamethasone,Dex)培养,对照组单纯使用含2%FBS的αMEM培养基培养。在细胞培养第1、3、5天检测细胞增殖情况;细胞培养的第1、5、10天分别进行ALP染色及ALP定量分析检测细胞分化情况;细胞培养第10天进行茜素红染色观察钙化结节形成情况。结果细胞增殖活性检测显示,实验组培养第3天及第5天可见hDPCs增殖活性得到显著抑制,与对照组相比有统计学差异;ALP染色及定量测定:培养10 d后,地塞米松实验组ALP活性明显高于对照组;茜素红染色结果:培养10 d后两组细胞茜素红染色均为阳性,表明实验组与对照组均有钙化结节形成,但是实验组钙化结节形成数量较多。结论酶消化联合组织块法可以成功体外培养hDPCs。10-8mol/L地塞米松可显著抑制hDPCs的增殖活性,提高hDPCs的ALP活性及矿化能力。     

中药双黄补对人牙周膜细胞总蛋白含量和超微结构的影响

目的:探讨中药双黄补对人牙周膜细胞总蛋白含量和超微结构的影响。方法:采用组织块法体外培养人牙周膜细胞,取第5代培养细胞随机分为实验组和对照组,实验组加不同浓度的双黄补,对照组只加培养液。通过考马斯亮蓝法测定牙周膜细胞总蛋白含量,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果:不同浓度的中药双黄补对人牙周膜细胞的总蛋白含量均有提高作用,其中尤以100μg/ml效果最佳。电子显微镜下可见胞质内粗面内质网、线粒体等细胞器数量增多。结论:中药双黄补可促进人牙周膜细胞的蛋白质合成,使细胞代谢更旺盛,功能更活跃。     

基于聚集诱导发光的多肽荧光探针的制备及其在早期龋齿检测中的应用

目的:制备基于聚集诱导发光的多肽荧光探针,并对其在早期龋齿检测中的应用进行探讨。方法:将8个天冬氨酸-丝氨酸-丝氨酸(DSS)与聚集诱导发光材料结合制备多肽荧光探针,体外建立人工脱矿模型,将样本浸泡于多肽荧光探针溶液中1 min,应用荧光成像系统对牙齿样本进行检测并收集图像和荧光数据。同时应用扫描电镜观察牙齿的表型,电子显微镜检测牙齿釉质表面钙磷比,偏光显微镜观察牙齿釉质区域。结果:多肽荧光探针处理区域明显可以观察到脱矿牙齿的荧光强度低于正常牙齿,且差异有统计学意义( P<0.05)。扫描电镜显示脱矿组的牙釉质表面可见较多不规则孔隙;未脱矿组的牙釉质表面较为表面平坦,可见一些不规则的片状物堆积。偏振光显微镜结果显示正常牙齿的釉质区域可以观察到明显的双折射,而脱矿牙齿的釉质区域可以观察到一道黑色区域,或是双折射效应消失,可见部分黑色暗影。 结论:制备了一种基于聚集诱导发光的多肽荧光探针,其能够精准定位牙釉质,在早期龋齿检测中具有一定的应用价值。     

3种根管封闭剂根管充填的术后反应观察

对180 颗患慢性根尖周炎单根管前牙进行根管治疗,在根管充填时分别采用氧化锌丁香油糊剂,Cortisomol糊剂,AH Plus糊剂加牙胶进行冷侧压法充填,观察根管充填后24 h～1 周的反应,为临床使用根管封闭剂提供依据.