基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ的酶学特性研究

目的研究重组蛇毒纤溶因子的酶学特性。方法通过SDS-PAGE分析其分子量、纯度,用SDSPAGE方法检测其对纤维蛋白原的水解能力,用分光光度法检测其水解azocasein的能力和PMSF及EDTA对蛇毒纤溶因子的作用。结果蛇毒重组纤溶因子rFII是一个分子量在28000的蛋白酶。它呈时间和浓度依赖性水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基,EDTA和PMSF均可以抑制该因子水解azocasein的能力。结论rFII是一种纤维蛋白原酶,它的酶活性可同时被EDTA和PMSF所抑制。     

头孢曲松钠过敏2例临床报告

例1 患者女,28岁,因咽痛、咳嗽3d,于2008—07—06来我院就诊,既往否认有药物过敏史。体格检查：体温36．7℃,脉搏76次／分,呼吸18次分,血压110～80mmHg。双侧扁桃体Ⅱ°肿大,无分泌物和伪膜,咽部充血,颈软,无抵抗。气管居中甲状腺不大,双肺呼吸音粗,未闻及干湿性哕音,心率76次分,心律齐,各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音,腹软,     

ZHD5401型X线电视的几例特殊故障检修

本论文主要介绍了 ZHD5401型 X 线电视几种常见的视放板故障,包括视放电路板电阻开路、视放器二级放大管性能损坏引起的电视故障及预放器板和行扫描电路的几种特殊故障.     

C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响

【目的】研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响。【方法】通过SOEing PCR方法构建删除C端序列的突变体，突变体和rFⅡ分别在P．pastoris中诱导表达。表达和纯化的蛋白用SDS—PAGE和Westeren blot进行鉴定。之后分析其生化特性。【结果】rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westeren blot得到证实。生化分析揭示：①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat／Km)是rFⅡ的1．9倍；②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点，可是在随后的裂解中开始展现差异：③突变体显示了更高的纤(原)活性；④热处理表明突变体相较rFⅡ对温度的增加更敏感；⑤通过圆二色谱测量，突变体的螺旋比例有所增加。【结论】删除的序列参与rFⅡ的特异性、活性和热敏感性。该序列可作为下一步优化的候选序列。     

荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280

[目的]研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异，克隆出与脑缺血相关的基因。[方法]应用荧光差异显示PCR(FDD PCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段，经反向Northern blot杂交，将杂交阳性的片段且经RT—PCR反复验证，选取差异明显的片段进行克隆测序：经生物信息学分析处理，选取同源性低的EST片段R6，利用cDNA5′端快速扩增PCR(5′RACE法)进行基因全长的克隆。[结果]利用5′RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区，扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF)，RT—PCR及Northern blot印迹结果证实了克隆的结果，同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源，同源性96％，编码166个氯基酸，为结构及功能未明确蛋白质，该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q．13)。[结论]应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KAA0280相似的基因，其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调，该蛋白质结构及功能均未见报道及研究，其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。     

孕甾烷-3β,5α,6β-三醇抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡

观察孕烷氧化物孕甾烷 3β ,5α ,6β 三醇 (PTO)对低钾 (5mmol·L- 1)诱导的小脑颗粒神经元凋亡的影响 ,并对其机理进行初步探讨 .采用二乙酸荧光素 (FDA)和Hoechst 332 5 8DNA染色法观察神经元存活率及形态学特征 ;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征 .低钾引起小脑颗粒神经元凋亡 ,表现为染色体固缩 ,DNA凝胶电泳表现出由大小不一的断裂DNA片段形成的“梯形”条带 .PTO(0 .62 5～15 μmol·L- 1)呈时间和剂量依赖性地抑制上述现象的出现 .蛋白质合成抑制剂环己米特不能改变由不同温育时间造成的PTO对神经元不同保护效果的差异 .结果显示 ,PTO抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡 ,PTO的这一作用可能属于一非基因效应 .     

高钾可诱导培养的小脑颗粒神经元凋亡

采用四唑盐比色、琼脂糖凝胶电泳、乙二酸荧光素染色和Hoechst332 58染色等方法研究高钾对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元的毒性作用及其机制。结果发现 :①高钾诱导神经元死亡呈剂量 ( 50～ 10 0mmol/L)和时间依赖性 ;②神经元死亡呈现明显的凋亡特征 :胞体缩小 ,染色质浓缩 ,DNA“梯形”条带形成和蛋白质合成抑制剂 (cycloheximide ,1.0mg/L)可阻断其毒性等 ;③MK 80 1( 2 μmol/L)、尼莫地平 ( 10 μmol/L)、硫酸镁 ( 2 0mmol/L)可阻断高钾的大部分毒性作用。结果提示 :高钾可能通过刺激内源性谷氨酸释放从而诱导小脑颗粒神经元凋亡     

胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系(英文)

用凝胶电泳和 fura- 2荧光技术测定 [Ca2 + ]i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与 [Ca2 + ]i 升高之间的关系 .将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾 ( 2 5mmol· L-1KCl)培养基中转移到低钾 ( 5mmol· L-1KCl)培养基中 ,神经元发生凋亡 .但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因 ( 5- 2 0 mmol· L-1)浓度依赖性地保护 ,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定 ( ryanodine) -敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林 ( dantrolene)的影响 ;也不被 L-型钙通道阻断剂硝苯地平 ,尼莫地平 ,维拉帕米和 NMDA受体阻断剂地佐环平抑制 .结果说明 [Ca2 + ]i 的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的 .     

血栓通注射液对LPS诱导的兔弥散性血管内凝血的拮抗作用

 目的：研究血栓通注射液对脂多糖（LPS）诱导的兔弥散性血管内凝血（DIC）的影响。方法：对兔耳缘静脉持续滴注LPS以建立兔DIC模型,记录各组动物在24 h后的生存率;全自动血浆分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血尿素氮(BUN);用全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶原时间（PT）;用凝固法测定纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;发色底物法测定蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性;ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。结果：持续从兔耳缘静脉滴注LPS后,DIC模型组动物大量死亡,ALT和BUN显著升高,APTT和PT显著延长,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低,血小板计数明显减少,血浆中TNF-α的含量显著升高。注射血栓通注射液后,动物的死亡率明显下降,ALT和BUN明显下降,APTT和PT明显缩短,血小板计数明显上升,纤维蛋白原含量显著提高,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性明显提升;血浆TNF-α的含量明显降低。结论：血栓通注射液对LPS所诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。     

3β，5α，6β-三羟基胆甾烷诱导恶性胶质瘤细胞的凋亡

 目的：研究3β,5α,6β-三羟基胆甾烷(Triol)诱导恶性胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法：以不同浓度的Triol作用于C6细胞和A172细胞不同时间。采用MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色和TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测caspase活性变化,蛋白免疫印记方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2家族蛋白的变化。结果：Triol可呈剂量和时间依赖性降低C6细胞和A172细胞的存活率;Triol处理细胞48 h,C6细胞和A172细胞的IC50值分别为（17.8±0.6)μmol/L和(20.6±0.2)μmol/L。Hoechst 33342染色、TUNEL检测和凋亡执行酶caspase-3活性检测结果显示,给药组中2种细胞都出现明显凋亡核象、TUNEL阳性细胞数增多和caspase-3的激活。Triol作用于C6细胞12 h、24 h和48 h后,在凋亡外通路中激活的caspase-8和在凋亡内通路中激活的caspase-9活性均随时间升高,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达量随时间降低,而促凋亡蛋白Bak的表达量随时间升高。结论：Triol通过激活内、外凋亡通路引起恶性胶质瘤细胞的凋亡,且 Bcl-2家族蛋白在此过程中起重要的调控作用。