NT4-p53(N15)-Ant重组慢病毒的构建及其对肝癌细胞的杀伤效应

目的 构建编码融合基因NT4-p53(N15)-Ant的重组慢病毒表达载体,观察其对肝癌细胞的杀伤作用.方法 利用PCR体系延伸互为模板的引物,通过T载体克隆法获得p53(N15)-Ant基因克隆,酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N15)-Ant亚克隆至慢病毒的表达质粒内,与辅助质粒共同转染HEK-293细胞,通过同源重组,获得融合基因重组慢病毒LV.NT4-p53(N15)-Ant.收集病毒上清,大量扩增并测定其滴度,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测目的 基因在HepG2细胞中的表达情况.用LV.NT4-p53(N15)-Ant处理HepG2肝癌细胞,通过光镜、电镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色试验、乳酸脱氢酶(LDH)释放法和Annexin V-PI双染实验,研究LV.NT4-p53(N15)-Ant在体外对HepG2细胞生长的影响.结果 克隆出p53(N15)-Ant基因,经酶切及测序证实结果正确.得到高滴度(1×10~(11)pfu/ml)的重组慢病毒表达载体.RT-PCR证实,感染LV.NT4-p53(N15)-Ant的HepG2细胞中有目的 基因的表达.在感染后24、48、72 h,LV.NT4-053(N15)-Ant处理组的细胞存活率分别为83.4%、46.9%和33.9%,与LV.EGFP组比较,差异有统计学意义(P<0.01).LV.NT4-053(N15)-Ant处理组细胞在感染48、72、96 h后,LDH含量分别为682、815和979IU/L,与LV.EGFP组比较,差异有统计学意义(P<0.01),可能与肿瘤细胞膜的破坏有关.结论 通过分子克隆体外重组技术,成功制备了NT4-p53(N15)-Ant复制缺陷型重组慢病毒.LV.NT4-p53(N15)-Ant对肝癌细胞具有杀伤能力,为今后的肿瘤基因治疗提供了新的可能性.     

维生素E对尾部悬吊大鼠雄性生殖损伤的防护作用

目的 研究维生素E（VE）对尾部悬吊大鼠雄性生殖损伤的防护作用。方法 选用性成熟期健康SD雄性大鼠30只，随机分为对照组、尾吊组、VE＋尾吊组3组。14d后观察各组大鼠的睾丸重量、形态，精子数量和质量以及血清激素含量。结果 与对照组相比，尾吊组大鼠睾丸重量、精子数量和质量以及血清睾酮含量均显著下降（P〈0．0．5）。VE可以显著改善这些指标（P〈0．05）。另外，尾吊组大鼠睾丸生精小管萎缩，间质水肿。生精上皮层数减少，细胞排列松散，生精小管腔内的精子数明显减少。VE＋尾吊组大鼠睾丸形态结构部分恢复正常，生精小管腔内的精子数量增多。结论 VE对尾部悬吊造成的大鼠雄性生殖损伤有防护作用。     

对组胚实习课教学的思考

从教师队伍、教学方法、教学手段及双语教学等几个方面 ,对新形势下作为形态学科的组织胚胎学教学进行了一些探索。     

雄激素受体基因CAG多态性对男性生殖系统疾病的影响

众所周知，雄激素通过和雄激素受体的结合来调控雄性的发育分化及维持正常的性功能。在雄激素受体的N端，也就是转录活性区域存在着多聚谷氨酰胺【(Gln)n】和多聚甘氨酸【(Gly)n】片段，两者分别由AR基因第一外显子中多态性微卫星序列(CAG)n和(GGC)n编码。(CAG)n重复序列在正常人群中一般为8～35，高于或者低于此范围会引发雄激素受体基因的异常表达，从而诱发脊髓延髓肌萎缩症、Huntington舞蹈病、脊髓共济失调、纯痉挛性截瘫、脆性X染色体综合征、前列腺癌、特发性少(无)精子症等多种疾病。     

男性不育相关基因的研究进展

随着男科学研究的飞速发展，发现相当部分男性不育都可能与基因异常有关。且由于人类基因组计划的开展，近年对男性不育相关基因的研究日益增多，概括为以下2个方面：性染色体上生精基因的缺失与突变，常染色体上基因的缺失与突变。其中，X染色体和常染色体已逐渐成为目前的研究热点。现就这些不育基因的结构特点与功能，及其对临床男性不育检测的指导意义作一综述。     

雄激素与骨质疏松

雄激素除了诱导男性性分化、促进性器官的生长发育和性成熟、维持第二性征及男性生殖系统的功能（如精子发生）外，还影响其他靶器官，如肌肉组织、心血管、中枢神经、免疫系统和骨骼，但对于雄激素的这种性外作用了解甚少。早在1940年，Albright及Reifenstein就首先提出了雄激素具有同化代谢和抗骨质疏松特性。近年来，男性骨质疏松的发病率呈上升趋势，     

己烯雌酚摄入对大鼠生精细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究青春期己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)摄入对SD(Sprague-Dawley)大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法30只35d龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/kg·d~(-1)4个实验组和1个对照组(编码为BDa、BDb、BDc、BDd和BC组,每组n=6)。于青春期[出生后第36天(postnatal day 36,PND 36)至49d(PND 49)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在生精细胞中的表达。结果与对照组相比,BDa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,BDb、BDc和BDd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有增加趋势。BC、BDa组生精细胞Bax相对弱表达而Bcl-2强表达,伴随DES摄入剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bcl-2表达逐渐减弱,BDd组Bax强表达而Bcl-2弱表达。结论青春期较大剂量DES摄入可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与青春期DES摄入所致的生精细胞凋亡过程。     

性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾显微和超微结构的影响

目的 探讨性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张(EVC)附睾显微和超微结构的改变及其在不育中的作用。方法 部分结扎左肾静脉建立大鼠EVC模型，常规制作附睾各段光镜及电镜标本。结果 EVC大鼠附睾各段均出现程度不同且有区段特异性的损害。光镜下主要表现有间质血管充血扩张，淋巴细胞浸润、积聚，间质内出现精子肉芽肿。附睾管萎缩，上皮细胞变性，甚至出现空泡化，上皮内晕、亮细胞数明显增多；管腔内出现大量未成熟生精细胞、畸形精子等。电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大，残余小体增加，细胞器(内质网、线粒体、高尔基复合体等)受损，部分主细胞内出现大空泡。晕细胞、亮细胞内溶酶体也增大、增多，亮细胞常膨大，游离面突入管腔。上皮细胞游离面微绒毛稀少，可见局灶性断裂和破坏。上皮基膜增厚。结论 性成熟期大鼠EVC可致附睾管上皮显微及超微结构明显改变，这可能是精索静脉曲张相关不育的一个主要原因。     

生殖细胞核因子（GCNF）在大鼠附睾中的表达和定位研究

目的：检测生殖细胞核因子(GCNF)在成年和青春期大鼠附睾中的表达和细胞定位情况，以探讨GCNF在附睾中可能参与的生理功能。方法：Western-blot，免疫组织化学和胶体金免疫电镜法。结果：Western-blot显示在成年和青春期大鼠附睾全蛋白抽提物中检测到GCNF编码的蛋白条带，     

复发性流产与精液常规参数、精子畸形率和DNA完整性的相关性

目的 探讨复发性流产与丈夫精液常规参数、精子畸形率以及DNA完整性的相关性.方法 ①按纳入标准将研究对象分成复发性流产患者丈夫组(流产组,n=49)、孕前常规检查组(孕检组,n=60)和正常生育男性组(生育组,n=39),对精液进行常规分析,采用改良巴氏染色法,按照严格Kruger标准检测研究对象精子畸形率.②对上述流产组和生育组部分标本通过上游法进行优选,并采用精子染色质结构分析对优选前后的标本分别检测精子DNA完整性.结果 ①3组间两两比较,流产组总畸形率和头部畸形率与孕检组及牛育组比较差异均有统计学意义(P<0.01),流产组精子密度、活动率、前向运动率与孕检组及生育组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);孕检组精子密度、头部畸形率和总畸形率与牛育组比较,差异有统计学意义(P<0.05),精子活动率和前向运动率与生育组比较,差异无统计学意义(P>0.05).②流产组精子DNA完整性指标(cells outside the main population,COMP)在上游法优选前[(16.57 4±6.32)%]与生育组[(12.56±5.00)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05);优选后流产组COMP为(13.46±3.51)%,与生育组相比,差异无统计学意义(P>0.05).③COMP与精子密度、活动率、前向运动率、a级百分率、b级百分率、c级百分率、总畸形率和头部畸形率呈中度相关性(r值分别为-0.421、-0.652、-0.569、-0.457、-0.511、-0.453、0.474、0.513,P<0.01).结论 复发性流产与丈夫精子质量存在相关性.