离子硅对成骨细胞NF-kappa B核内转录因子活性的影响

目的　研究离子硅对体外培养的成骨细胞NF-kappa B核转录因子活性的影响。 方法　分别用终浓度为1 mmol/L和2 mmol/L离子硅（SiO32-）处理MC3T3-E1成骨细胞,处理时间分别为6、12、24和48 h,设置对照组（不加处理因素）;采用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞的增殖指数;Western blotting方法检测NF-kappa B信号通路的相关蛋白表达量及其变化。 结果　流式细胞术结果显示,与对照组相比,1 mmol/L浓度的离子硅处理24 h组和48 h组,MC3T3-E1细胞增殖明显;Western blot结果显示,1 mmol/L浓度的离子硅促进成骨细胞增殖与p-NF-kappa B表达上升密切相关。 结论　骨材料中释放的微量的硅不会引起成骨细胞损伤,相反,微量的硅酸盐可能通过激活NF-kappa B诱导成骨细胞增殖。     

COPD患者焦虑抑郁症状与糖皮质激素相关性研究

目的探讨糖皮质激素对COPD患者焦虑和抑郁症状的影响。方法选取82例COPD患者,随机分为激素治疗组（41例）和对照组（41例）。经过不同的治疗方案后,对两组患者的焦虑和抑郁症状进行评分比较。结果应用激素的患者在治疗后其抑郁和焦虑症状评分较之治疗前均有显著增加（P〈0.05）。差异有统计学意义（P〈0.01）。结论糖皮质激素类药物很可能有加重COPD患者焦虑与抑郁症状的副作用。     

冠心病患者线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因片段的重排

采用玻璃粉微量吸附法获取DNA直接作为PCR反应的模板,利用巢式PCR技术,检测冠心病患者血细胞内编码细胞色素C氧化酶亚基II的线粒体DNA扩增片段多态性,探讨线粒体DNA的片段缺失与动脉粥样硬化发生发展的关系。研究发现在全部冠心病患者编码细胞色素C氧化酶亚基II的基因中出现了大约100bp的缺失片段,其中1例冠心病患者中还出现了大约450bp核基因组和600bp的线粒体DNA扩增片段,而在正常对照老人中没有出现片状的重排现象,表明冠心病患者中存在该基因片段的缺失和模板量减少的现象,该基因可能参与了冠状动脉弱样硬化的形成与发展,编码呼吸链复合物一些亚基线粒体DNA片段的重排可能是动脉粥样硬化进行性发展的恶化因素。     

成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响

目的：观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响，探讨两者之间的协同作用，为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法：取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经，运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞，纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基：A组：成纤维细胞 DMEM／F12;组：成纤维细胞 雪旺细胞 DMEM／F12；c组：DMEM／F12(对照组)。将A，B，C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中，MTT检测雪旺细胞增殖情况，S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果：B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用；A组次之：C组最差(P＜O．001)。结论：成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。     

灵长类细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的进化分析

目的:利用玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段,对灵长类氧化酶亚基Ⅱ基因进行分子系统学分析。方法:实验于2003-03/2004-10在南方医科大学解剖教研室完成。①玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段。②通过Genbank数据库,采用“Blast”的方法进行相似性数据搜寻,选择合适的16种灵长类生物氧化酶亚基Ⅱ基因的686碱基序列片段;采用PAUP4.0DNA序列分析软件进行分析。结果:①利用玻璃粉吸附法成功扩增出了人的氧化酶亚基Ⅱ全基因片段,并对扩增片段进行了序列分析。②根据序列测定结果,结合生物信息学技术研究16种灵长类动物之间的分子进化关系,建立了新的分子进化树,其中一致性指数为0.5608,相似性指数为0.4392。结论:线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段可以作为进化分析的分子指标。     

失神经萎缩肌组织成分对成肌细胞性能影响的实验研究

目的：探讨长期失神经萎缩骨骼肌组织成分对体外培养成肌细胞的性能影响。方法：①获取长期失神经支配肌萎缩模型大鼠的腓肠肌，无菌条件下清洗、剪碎、匀浆、过滤，收集上清液；②收集Schwann细胞的体外培养基；③体外培养C2C12成肌细胞系，扩增传代并分组：A．对照组，常规培养，无任何处理因素；B．添加Schwann细胞培养基；C．添加萎缩肌匀浆液。倒置显微镜观察3组细胞的形态特征，免疫荧光检测C2C12细胞MyoD和Myogenin的差异表达。结果：倒置显微镜下，各组细胞贴壁良好，A、C组形态无差异，未见分化肌管；B组于培养48h后细胞变纤细，可见肌管形成。荧光染色证实，培养24h后，3组均出现MyoD阳性细胞，C组阳性细胞数量明显多于A、B组；72h时，3组均可见Myogenin阳性细胞，B组阳性细胞数量明显多于A组，C组阳性细胞数量稀少。结论：长期失神经萎缩肌组织成分能够促进成肌细胞的增殖与活化，但抑制活化成肌细胞的进一步分化成熟。     

猪源性骨支架材料的制备及性能研究

目的:制备猪源性骨支架材料,并与人源性骨支架材料对比检测其理化性能和组织相容性。方法:经低温深冻、超声清洗、H2O2、酒精浸泡、冻干、辐照制备猪源性骨支架材料和人源性骨支架材料。扫描电镜观察,测定材料孔隙率、蛋白质含量、钙磷含量及弹性模量。2种材料的浸提液与脂肪源间充质干细胞复合培养,观察细胞一般形态,流式细胞仪PI法检测细胞生命周期。皮下植入2种材料,在植入4、8、12、16周取材做病理切片观察和扫描电镜观察。结果:2种材料均具有骨本身的天然网状三维支架系统。猪源性骨支架材料的孔隙率高于人源性骨支架材料,蛋白含量低于人源性骨支架材料,弹性模量分别为无显著差异。材料浸提液组及空白对照组的细胞生长状态良好。流式细胞仪PI法检测细胞周期见G1期、G2期细胞百分率接近。皮下植入试验表明,随着植入时间的延长,炎症反应逐步减轻,材料降解增加,新生软骨样结构逐渐增多。结论:猪源性异种骨支架材料在理化性能和材料毒性等方面与同种异体骨支架材料接近,具有良好的应用前景。     

PGE2 和 NF-κB信号途径在骨再生中的相互作用

目的　本研究旨在利用MC3T3-E1 成骨细胞株与大鼠骨折模型来研究骨折愈合过程中PGE2和NF-κB信号途径的相互作用。 方法　利用PGE2与NF-κB 抑制剂 BAY 11-7082处理MC3T3-E1成骨细胞和大鼠骨折模型,采用碱性磷酸酶活性测定、Western blot 分析、EMSA分析以及ELISA测定等研究手段,研究PGE2、NF-κB、BMP-7、 Id2以及SOD2在骨再生中的作用。 结果　利用10 μmol/l PGE2处理MC3T3-E1细胞10 min, 30 min 和2h后,能够显著地促进成骨细胞增殖与分化,当细胞用5 μmol/L BAY 11-7082处理后,PGE2诱导作用受到抑制,表明 PGE2 增加ALP的表达是通过NF-κB 途径来介导。局部注射NF-κB 抑制剂后 PGE2 的生物合成明显减少;此外,抑制骨折部位ALP的活性,在骨折的损伤修复过程中,NF-κB、BMP-7以及SOD2 的表达均明显上升,而Id2的表达明显下降;加入NF-κB活性抑制剂后,BMP-7与Id2的表达恢复到正常水平,而SOD2的表达没有改变。　结论 　PGE2能够同时通过抑制Id2细胞因子和激活NF-κB信号途径诱导成骨细胞分化。     

Nix和miR-520h对神经胶质瘤发生的影响及相互作用

目的　通过综合分析肿瘤标本中基因和蛋白表达,及体外生物学作用的检测,来评价胶质瘤中Nix蛋白的作用以及Nix蛋白与miR-520h的关系。 方法　选取46例胶质瘤标本,RT-PCR检测miR-520h基因的表达,Western blotting检测Nix 蛋白的表达;培养U251胶质瘤细胞,Western blotting检测Nix蛋白的表达;构建靶向Nix基因的shRNA敲除U251细胞中Nix基因（Nix-kn）, Western blotting检测Nix, IKKα, i-κBα和p-NF-κB/p65 等蛋白的表达水平; has-miR-520h抑制剂转染U251细胞,Western blotting检测Nix, IKKα, i-κBα和p-NF-κB/p65 等蛋白的表达水平。 结果　胶质瘤标本的基因和蛋白检测表明,miR-520h的高表达伴随着Nix蛋白的高表达;体外实验结果表明,与正常培养的U251相比,缺氧培养的U251细胞Nix表达较高;与Nix-kn组相比,Nix-wt组胶质瘤细胞Nix和p-NF-κB/p65表达均明显增高,而NF-κB活性抑制剂蛋白i-κBα表达降低;200 nmol/L的has-miR-520h抑制剂处理细胞后,与正常对照组比较, Nix蛋白表达显著减少,而p-NF-kappaB/p65蛋白表达显著增加。 结论　在神经胶质瘤的发生发展中miR-520h与Nix蛋白的表达相关;miR-520h可能通过促进Nix合成,从而成为一个强大的肿瘤激活剂。     

不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性

目的 筛选能提高硅酮橡胶弹性体(Sylgard184)与C2C12相容性的理想基质材料. 方法Sylgard184双组分以10:1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组(A组);固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理:I型胶原包被(B组)、层黏连蛋白包被(C组)、多聚赖氨酸包被(D组);未经包被(E组),每组共6个样本.在不同基质材料修饰的Sylgard 184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术(FCM)检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达.结果 Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Syhgard 184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组(P<0.05). 结论 经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达.