Id2从核迁移到细胞质后通过调节凋亡诱导因子表达促进骨骼肌细胞分化

P>Objective To explore the functional role of Id2 in skeletal muscle regeneration. Methods Id2 expression vectors were transferred into C2C12 cells. The transferred and un-transferred C2C12 skeletal muscle cells were exposed to 50μmol/L H2O2 and 2% horse serum for 12 hours without fetal bovine serum(FBS). Expression of Id2 gene in transferred and untransferred C2C12 cells was observed by RT-PCR. Expression of various myogenesis related proteins in the transferred and untransferred C2C12 cells were observed by Western blotting. Expression of Id2 and AIF proteins in the normal, fiber-damaged and denervated skeletal muscles were observed by immunofluorescence.Results Compared with un-transferred cells, the Id2 transferred cells exhibited higher differentiation. Immunofluorescence staining revealed that 50μmol/L H2O2 treatment increased the expression of nucleic Id2.Under the oxidative stress, Id2 repressed both MyoD repressors and myogenin activator. Two percents of the horse serum, which usually was used to induce myoblasts differentiation, caused most of Id2 proteins translocation from nucleus to cytoplasm. Translocation of Id2 protein from nucleus to cytoplasm inhibited the ROS-induced expression of mitochondrial apoptosis inducing factor(AIF). Immunofluorescence analysis implied that the denervated skeletal muscle showed more increased Id2 and AIF proteins in the nucleus.Conclusion Id2 translocation from nucleus to cytoplasm can accelerate differentiation of skeletal muscle cells. The functional role of Id2 during the skeletal muscle regene     

灵长类细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的进化分析

目的：利用玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段，对灵长类氧化酶亚基Ⅱ基因进行分子系统学分析。方法：实验于2003-03／2004-10在南方医科大学解剖教研室完成。①玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段。②通过Genbank数据库，采用“Blast”的方法进行相似性数据搜寻，选择合适的16种灵长类生物氧化酶亚基Ⅱ基因的686碱基序列片段；采用PAUP4．0 DNA序列分析软件进行分析。结果：①利用玻璃粉吸附法成功扩增出了人的氧化酶亚基Ⅱ全基因片段，并对扩增片段进行了序列分析。②根据序列测定结果，结合生物信息学技术研究16种灵长类动物之间的分子进化关系，建立了新的分子进化树，其中一致性指数为0．5608，相似性指数为0．4392。结论：线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段可以作为进化分析的分子指标。     

白介素-1β在自体神经匀浆激活的巨噬细胞上的表达

目的探讨IL-1β在体外培养的自体神经匀浆激活的巨噬细胞表面的表达及与外周神经损伤的关系。方法将1个月龄SD幼鼠坐骨神经远端切断，预溃变2d后，制成神经匀浆液，回注自体腹腔3d后，抽取腹腔液体培养巨噬细胞，培养3d后收集培养基，即得自体神经匀浆激活的巨噬细胞的条件培养基。不损伤坐骨神经而直接腹腔注射培养基培养3d后的巨噬细胞的上清即为未激活的巨噬细胞条件培养基。将上述两种巨噬细胞条件培养基分别设为C组和B组，把含15％小牛血清的DMEM／F12培养液注射于SD幼鼠腹腔5min后培养的巨噬细胞条件培养基设为A组即对照组．将A、B、C3组分别在倒置显微镜和透射电镜下观察巨噬细胞形态变化，应用ELISA法检测3组巨噬细胞上清液中的IL-1β的含量。结果自体神经匀浆激活的巨噬细胞胞内超微结构发生改变较明显，B组与A组比较IL-1β的含量差异无统计学意义，C组与A、B组之问IL-1β的含量差异均有统计学意义。结论吞噬自体神经匀浆颗粒后的巨噬细胞被诱导激活，从而高表达IL-1β，将可能对外周神经损伤后功能的恢复有较大的促进作用。     

炎性因子对C2C12细胞、MC-3T3-E1细胞成骨、成肌相关基因表达的影响

目的：探讨炎性因子对成肌和成骨细胞成肌、成骨相关基因表达的影响。方法：小鼠腹腔巨噬细胞上清液及白介素（IL）1β处理C2C12细胞及MC-3T3-E1细胞，观察炎性因子对两种细胞成骨、成肌相关基因的表达的影响。结果：小鼠腹腔巨噬细胞上清液促进C2C12细胞MyoD、Myogenin的表达，差别均有统计学意义（P〈0．001）；促进MC-3T3-E1细胞碱性磷酸酶（ALP）的表达，吸光度比值上升为原来的3倍多，差别有统计学意义（P〈0．001）。IL-1β单独对C2C12细胞和MC-3T3-E1细胞的成肌、成骨因子的表达影响无统计学意义（P〉0．05）。结论：巨噬细胞上清液可上调MC-3T3-E1细胞的成骨相关基因表达；上调C2C12细胞的成肌相关基因表达。IL-1β单独不能对C2C12细胞和MC-3T3-E1细胞的成肌、成骨基因的表达产生影响。     

大鼠海马突起坍塌蛋白Sema3A及其受体neuropilin-1 mRNA的表达

目的探讨大鼠海马Sema3A及其受体neuropilin—1（NP-1）mRNA在发育过程中表达的规律。方法采用RT—PCR方法检测大鼠海马发育不同阶段Sema3A及其受体NP-1mRNA的表达。结果Sema3A电泳条带灰度呈下降趋势,在胚胎期、新生期有较高的表达,幼年期、成年期和老年期表达较弱。NP-1电泳条带在大鼠海马发育的各个时期均有较高的表达,以胚胎期最高,新生期表达相对其他时期弱,但在幼年期、成年期和老年维持较高表达水平。结论大鼠海马在胚胎期和新生期是非目的性突起坍塌的活跃期,幼年、成年和老年期处于相对休眠期;NP-1始终处于高表达状态,可能参与神经退行性疾病的发生。     

颞骨可视化模型的初步研究

目的：建立颞骨可视化模型，初步探索该模型的功能。方法：采用中国数字人数据在个人计算机上用3d-doctor软件重建颞骨及其内部部分结构；在模型中测量内耳门后唇中点到总骨脚根以及颈静脉球顶的距离。结果：所建模型能清楚地显示颞骨、颈内动脉岩内段、下颌髁突、面神经主干、前庭蜗神经主干、内耳道、骨迷路、鼓室和部分咽鼓管、外耳道、乙状窦和颈静脉球；通过模型测量内耳道后唇中点到总骨脚根以及颈静脉球顶的距离分别是7．0mm，10．3mm。结论：可以通过虚拟人数据实现骨迷路、面神经主干、前庭蜗神经主干等精细结构的可视化。此模型在相关结构间距离测量上具有优势。     

肛神经阻滞麻醉的解剖学基础研究

目的:为肛神经阻滞麻醉提供解剖学基础。方法:15例(30侧)成人尸体标本,置俯卧位,解剖坐骨肛门窝,观测肛神经走向肛门的长度、角度,肛神经毗邻关系及定位标志。结果:肛后缘与尾骨尖的距离为(4.56±0.62)cm(3.80～5.80cm),尾骨尖与坐骨结节最凸点的距离为(6.01±0.86)cm(4.50～8.00cm),肛后缘与坐骨结节最凸点距离为(6.05±0.65)cm(4.50～7.50cm)。肛门3点钟和9点钟位距肛神经主干为(4.93±0.91)cm(3.80～7.10cm),肛门3点钟和9点钟位向肛神经主干外偏角度为(35.6±3.3)°(30～40°)。肛神经主干位于坐骨结节与尾骨尖的联线上,距坐骨结节(2.21±0.28)cm(1.50～2.70cm),距坐骨结节或骶结节韧带平面前(1.36±0.13)cm(1.10～1.60cm)。结论:(1)肛神经位置恒定,其主干位于坐骨结节与尾骨尖联线上,坐骨结节内侧2.21cm,约相当于联线的外、中1/3相接处,这个距离约相当于肛后缘至尾骨尖的1/2距离。(2)肛门手术时,平坐骨结节最凸点(相当于平骶结节韧带)前1.36cm,将麻醉剂从此点注入,会有很好的麻醉效果。     

白介素-1β诱导和激活许旺细胞的实验研究

目的研究白介素-1β对许旺细胞的诱导和激活及其最佳作用浓度。方法取3～4dSD乳鼠坐骨神经，纯化培养许旺细胞，A组加入含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基，B组加入自体神经匀浆激活的巨噬细胞条件培养基；C组加入细胞培养级生物制剂白介素-1β(2．0ng/ml)，分别培养许旺细胞6d倒置显微镜观察许旺细胞的形态，抗S—100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞，MTT法筛选出白介素-1β促许旺细胞分裂增殖作用的最佳浓度，methyl-^3H掺入法检测A、B、C组对许旺细胞的促增殖情况，ELISA法检测A、B、C组对许旺细胞NGF分泌量影响。结果B、C组均比A组更能促进许旺细胞发生分裂增殖并高表达NGF，但以C组的作用最强。结论许旺细胞自身能够表达NGF，而2．0ng/ml白介素-1β能更好的促进许旺细胞的分裂增殖促进对NGF的高表达.     

分化抑制因子Id2在骨骼肌再生中的作用研究进展

目的综述分化抑制因子2（inhibitor of differentiation 2，Id2）在骨骼肌再生中的作用研究进展。方法广泛查阅近年来Id2生物学特性及其在骨骼肌再生中的作用相关文献，并综合分析。结果Id2通过结合E蛋白形成异二聚体，阻止生肌调节因子（myogenic regulatory factors，MRFs）与E蛋白结合而抑制MRFs的转录活性，抑制骨骼肌细胞分化。结论Id2在骨骼肌再生中起着重要作用。