系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Toll样受体2和4表达的研究

Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是天然免疫中新发现的一类模式识别受体,通过信号传导途径,参与炎症过程;TLRs也可以通过细胞因子、趋化因子、黏附因子的释放,为天然免疫和适应性免疫建起了桥梁.本实验应用流式细胞技术测定TLR2和TLR4在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中的表达状况,探讨两者与SLE的联系.     

最大静脉回流量在深静脉血栓监测的意义

下肢深静脉血栓形成（deep vein thrombosis，DVT）是外科常见疾病，也是其他多种疾患的严重并发症，DVT是血管外科医生不断探索的重要课题。笔者通过对DVT患者不同时间的最大静脉回流量（maximum venous outflow，MVO）的测量．探讨以无创血管检查技术进行血流状态和血管再通情况监测的临床诊断意义。     

甲状腺乳头状癌N-ras基因突变及癌细胞DNA含量检测

为了探讨甲状腺乳头状癌的发生机制、寻找反映其生物学行为的肿瘤标志物。采用多聚酶链式反应－单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ），检测２０例甲状腺乳头状癌及１０例正常甲状腺组织Ｎ－ｒａｓ基因第６１位密码子突变。以流式细胞技术定量分析肿瘤细胞ＤＮＡ含量...     

小鼠一大鼠异种异位心脏移植模型的建立

异种移植是移植外科的热点和发展方向,有望为临床移植提供充足的供体来源,但是异种移植后会发生严重的超级性排斥反应[1],制约了其在临床的应用.本文采用Heron颈部套袖法加以改进建立小鼠-大鼠异种异位心脏移植模型[2],为异种移植的深入研究提供参考. 1 材料和方法 1.1 实验动物供体为昆明小鼠,雄性,体重30～40g,受体为雄性Wistar大鼠,体重200～250g,由天津市药物研究所提供.     

小鼠-大鼠异种异位心脏移植模型的建立

异种移植是移植外科的热点和发展方向 ,有望为临床移植提供充足的供体来源 ,但是异种移植后会发生严重的超级性排斥反应 ［１］,制约了其在临床的应用。本文采用Ｈｅｒｏｎ颈部套袖法加以改进建立小鼠 -大鼠异种异位心脏移植模型 ［２］,为异种移植的深入研究提供参考。１材料和方法１．１实验动物供体为昆明小鼠 ,雄性 ,体重３０～４０ｇ,受体为雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重２００～２５０ｇ,由天津市药物研究所提供。１．２实验器材包括德国蔡司双人双目显微镜 ,显微手术器械。血管套管为Ｖｅｎｆｌｏｎ静脉留置针导管 ,连接颈外静脉的套管…     

转染FasL基因树突状细胞诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的研究

目的 制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞(dendritic cell,DC)并探讨其诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的机理.方法 采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC,脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC,实时定量PCR检测转染前后FasL mRNA的表达,流式细胞仪和免疫蛋白印迹检测转染前后FasL蛋白的表达.异系小鼠静脉分别输注未转染DC、转染空质粒DC和转染FasL的DC,7 d后TdT介导的原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪检测脾脏中T淋巴细胞凋亡.结果 体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC,转染FasL基因的DC较未转染DC FasL mRNA和FasL蛋白表达明显升高.对脾脏中T淋巴细胞凋亡的检测发现,转染FasL的DC组凋亡指数(11.67±1.53)明显高于未转染DC组(2.67±0.58)和转染空质粒组(3.33±0.58),P＜0.01.结论 培养基选择法可收获大量骨髓源DC,脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC,可以使DC高表达FasL蛋白.转染FasL的DC输注能明显诱导异系小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡.     

复方丹参对异种移植物的保护作用

目的：研究复方丹参在异种移植中对移植物的保护作用。方法：采用颈部套袖法建立豚鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前24h按0.5mg／妇腹腔注射中华眼镜蛇蛇毒(CCV)，术中以复方丹参注射液灌注供心并静注复方丹参。研究对照组、CCV组和CCV 丹参组供心存活时间、复跳时间的改变。结果：复方丹参注射液缩短异种移植心脏复跳时间，合用CCV可使供心存活时间进一步延长。结论：在异种移植中应用复方丹参可减少供心缺血损伤，并改善微循环，与CCV合用能抑制异种移植的超急性排斥反应。     

大肠癌C—myc蛋白阳性细胞亚群细胞动力学研究及临床意义

目的：探讨大肠癌及癌旁组织C－myc蛋白阳性细胞亚群细胞亚群细胞动力学的异常及其临床意义。方法：采用单克隆抗体识别的流式细胞分析技术,对30例大肠癌标本的癌组织、癌旁2cm、癌旁5cm组织及远癌切端正常结肠组织、分别进行细胞倍体性及活性测定。结果：癌组织细胞异倍体率高于癌旁2cm、5cm及正常结肠组织。癌旁2cm组织异倍体率也高于正常结肠组织、而癌旁5cm组织细胞异倍体率与正常结肠组织之间无显著差异。癌组织SPF、PI高于癌旁2cm、5cm及正常结肠组织、而癌旁2cm、5cm及正常结肠组织之间SPF、PI无显著性差异。癌组织细胞异倍体率与Dukes分期及大肠癌恶性度间无显著相关。结论：癌旁2cm组织存在恶性转化的可能,癌旁2cm不能做为手术切除的最低界限。     

白细胞介素-15对小鼠胃癌的治疗作用

目的 建立小鼠胃癌模型,检测荷瘤状态对小鼠免疫细胞的影响,同时给予白细胞介素-15(IL-15)免疫基因治疗,以检测IL-15对胃癌的预防及治疗效果.方法 采用多因素联合攻击法诱导小鼠胃癌,同时采用IL-15表达质粒载体进行免疫基因治疗.20周后取胃标本行病理学检查,并取血及脾细胞检测T细胞亚群及CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg).同时进行自然杀伤(NK)细胞的细胞毒性试验,通过统计学方法分析结果.结果 多因素联合攻击法诱导胃癌发生率为37.5％.诱癌组小鼠血清IL-15水平(9.20±2.92) ng/L明显降低(P＜0.05),且其脾NK细胞杀伤活性(216.91±117.80) U/L明显降低(P＜0.05).诱癌组小鼠外周血Treg水平(8.07±6.62)％明显升高(P＜0.05),而对照组小鼠脾细胞Treg水平(4.40±3.34)％明显降低(P＜0.05).各组小鼠之间外周血T细胞亚群变化差异无统计学意义(P＞0.05).诱癌组小鼠脾细胞CD3+T细胞水平(78.31±29.79)％明显升高(P＜0.05),而CD4+T细胞(19.98±5.77)％及CD8+T细胞水平(10.15±1.72)％明显降低(P＜0.05).结论 多因素联合攻击法为小鼠胃癌模型建立提供了良好的模型.小鼠荷瘤状态下免疫功能下降,通过IL-15免疫基因治疗可提高机免疫功能,起到抗肿瘤的效果.     

FasL转染小鼠树突状细胞诱导异系T淋巴细胞凋亡的研究

目的:制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞(DC)并探讨其体外诱导异系T淋巴细胞凋亡的机制。方法:采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC,脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC,流式细胞仪检测转染前后FasL蛋白的表达。混合淋巴细胞培养,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DC对异系T淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪检测诱导异系T淋巴细胞凋亡的能力。结果:体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC,转染FasL基因的DC较未转染DCFasL蛋白表达明显升高,混合淋巴细胞培养结果显示,FasL转染后DC对异系T淋巴细胞刺激指数明显下降(P<0.01),且诱导T淋巴细胞凋亡的能力明显增加(P<0.01)。结论:培养基选择法可收获大量骨髓源DC,具有典型形态,高表达MHCⅡ和共刺激分子,所获骨髓源DC能激活初始型T细胞免疫应答。脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC,可以使DC高表达FasL蛋白。转染FasL的DC体外刺激异系T淋巴细胞增殖的能力下降,且能明显诱导T淋巴细胞凋亡。