毛细管电泳检测nm23-H1基因在乳腺癌组织中的表达

目的:检测nm23-H1基因在乳腺癌中的表达与突变,寻找它们与淋巴结转移的关系。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达,毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CPAGE)行单链构象多态性分析(SSCP)检测DNA突变。结果:应用CPAGE可在30min内分离出nm23-H1基因RT-PCR产物的单链及双链峰。nm23-H1表达、突变在腋淋巴结有、无转移组均有差异;mRNA在有远处转移组呈现低表达;DNA突变率在肿瘤≤5cm和>5cm组间有差异。结论:nm23-H1表达和突变可以做为评估乳腺癌转移危险的指标;CPAGE技术用于肿瘤组织的PCR-SSCP分析具有快速灵敏、准确、重复性好的特点。     

大鼠小肠移植排斥反应中细胞黏附分子的动态观察

目的：研究细胞间黏附分子（ICAM－1）与大鼠小肠移植排斥反应的关系。以及雷帕霉素（RAPA）对其作用,方法：以SD大鼠为假移植组作对照,采用Wistar→SD大鼠异位小肠移植模,以根据不同处理分为排斥组,雷帕霉素2mg/kg组和雷帕霉素4mg/kg组,术后1、3、5、7天获取移植肠组织行病理学检查和ICAM－1免疫组化检测。结果：术后1、3天,各组未发现排斥反应,术后5、7天,2组分别出现Ⅰ度和Ⅱ度排斥,3组于术后7天仅有不同典型的排斥迹象,4组未见排斥证据。ICAM－1在对照组仅在血管内皮细胞和粘膜固有层有少量表达,在排斥组术后3天在上述部位表达增加,于第5天到达高峰。淋巴细胞和间质细胞表达明显增高,与对照组相比有显著性差异。RAPA4mg/kg组能显著抑制移植后ICAM－的表达,结论：ICAM－1参与了小肠移植后排斥反应过程,雷帕霉素既能抑制移植排斥反应,又可抑制CAM－1的表达。     

白细胞介素-17参与固有免疫应答的研究进展

白细胞介素(IL)-17是一类重要的细胞因子,通常认为IL-17主要由Th17细胞分泌,参与机体的适应性免疫应答.近年来大量研究表明,在肺、胃肠黏膜及皮肤等屏障组织中存在多种固有免疫细胞可以分泌IL-17,作为的机体免疫系统第一道防线的重要成员,一方面通过模式识别受体迅速感知外来抗原的刺激,趋化募集到损伤部位,不经克隆扩增即可发挥清除病原,参与炎症、应激或者超敏反应的作用.另一方面,分泌IL-17的固有免疫细胞能够与慢性炎症的记忆细胞相互作用,启动适应性免疫应答,发挥调节机体免疫稳态的功能.     

大鼠小肠移植术后浸润移植小肠的T细胞动态研究

以远交系大鼠制作异位小肠移植模型，利用图像分析技术对浸润移植小肠的T淋巴细胞亚群进行连续定量测定，并与终期组织病理检查做比较，分析T淋巴细胞在排斥反应中的作用。结果表明未使用免疫抑制治疗的大鼠在术后其移植物均出现OX8＋细胞浸润增多，而使用环孢素A的大鼠其OX8＋和W3／13＋细胞浸润逐渐减少；术后7～10天各组大鼠小肠移植物W3／25＋细胞均呈上升趋势。本研究说明OX8＋细胞亚群在排斥反应中起重要作用，其浸润增多与移植物局部免疫损伤的形成有密切关系。     

大鼠小肠移植后外周血CD45RC+细胞和CD45RC-细胞比值的变化及意义

目的探讨可用于诊断小肠移植后排斥反应的指标.方法采用F334大鼠建立同系全小肠移植模型,以近交系F334大鼠和BN大鼠建立同种全小肠移植模型,术后采用流式细胞仪连续测定外周血CD4+、CD8+细胞中CD45+亚群以及CD45RC+细胞与CD45RC-细胞比值(CD45RC+/CD45RC-)的变化,同期进行移植肠组织病理学检查.结果同系移植组受者术后均获长期存活(＞28 d);同种移植组受者术后存活(12.0±1.3)d,出现中、重度排斥反应.术后外周血CD4+CD45+和CD8+CD45+细胞的变化,两组间的差异无统计学意义;同系移植组CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC―及CD8+CD45RC+/CD8+CD45RC―在术后3 d升高,然后迅速降至手术当天的水平,同种移植组上述指标术后均维持较高水平.结论动态观察CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC-较适于监视排斥反应的发展过程,而CD8+CD45RC+/CD8+CD45RC-更适于排斥反应的早期诊断.     

输注转染FasL基因的供者树突状细胞减轻小鼠心脏移植排斥反应

目的 探讨转染FasL基因的供者树突状细胞(DC)对小鼠心脏移植排斥反应的影响.方法 分离并培养C57BL/6小鼠骨髓DC,然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC.以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,将其分为转染组(n=12)、未转染组(n=12)及移植对照组(n=12).转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个转染FasL基因的供者DC;未转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个未转染的供者DC;移植对照组仅行心脏移植,不接受供者DC输注.供心均移植于受者腹腔内.各组中,6只小鼠用于观察移植心脏存活时间,另6只于术后7 d处死,取移植心脏,进行组织学观察及移植心脏排斥反应病理分级.结果 转染组、未转染组和移植对照组小鼠移植心脏存活时间的中位数分别为20 d、8.5 d和9 d,转染组移植心脏的存活时间明显长于未转染组和移植对照组(P＜0.01).转染组中,2只排斥反应的病理分级为0级,4只为1级;未转染组中,2只为2级,4只为3级;移植对照组中,1只为2级,5只为3级.转染组排斥反应的病理分级明显低于移植对照组(P＜0.01).结论 受者于心脏移植前输注转染FasL基因的供者DC,可有效延长移植心脏的存活时间,并减轻排斥反应的程度.     

大鼠肠系膜血管吻合式小肠移植模型建立及其意义

报告采用大鼠系膜血管吻合式小肠移植模型的制作方法,依此法共施小肠移植手术96只,模型稳定后的51只手术成功率达87.4%。该方法所建立大鼠自体移植模型不仅为利用远交系大鼠研究小肠移植免疫反应提供可靠的阴性对照,而且可做为移植小肠保存、缺血后再灌注损伤等多方面研究的较好模型。     

癌胚抗原启动子正调控白细胞介素-15表达质粒载体的构建及其在肿瘤细胞中的靶向表达

目的 构建癌胚抗原(CEA)启动子正调控人白细胞介素-15(IL-15)真核表达质粒载体,观察其在肿瘤细胞内的靶向性表达.方法 基因克隆技术构建巨细胞病毒(CMV)启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CMV-TAT和CEA启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CEA-TAT;再以IL-2信号肽(SP)置换IL-15SP构建质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT;阳离子脂质体介导法体外转染CEA阳性结肠癌SW480细胞和CEA阴性乳腺癌MCF-7细胞,酶联免疫吸附方法(ELISA)检测转染后48h细胞培养上清液中IL-15表达.结果 质粒均成功构建.ELISA检测结果:(1)以IL-2SP置换IL-15SP可提高转染细胞的IL-15表达4.8～5.9倍(P＜0.01);(2)转染SW480细胞后,CEA启动子正调控的两质粒(pHi2-IL-15-CEA-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT)与相对应的CMV启动子正调控质粒(pHi2-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT)之间的IL-15表达无统计学意义(P＞0.05),其效应等同于CMV启动子正调控质粒;(3)转染MCF-7细胞后,CEA启动子正调控的两质粒IL-15表达显著低于CMV启动子正调控质粒(P＜0.01).结论 CEA启动子正调控IL-15质粒,尤其是质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT在CEA阳性细胞中高表达IL-15,CEA阴性细胞中低表达IL-15,实现了IL-15基因高效、靶向性表达.     

以细胞动力学评估结直肠癌的切除范围

目的 评估结直肠癌的切除范围。方法 采用单克隆抗体识别的流式细胞分析技术对 30例结直肠癌标本的肿瘤组织 (T)、癌旁 2 cm(P2)、癌旁 5 cm(P5)及远癌切端正常组织 (N)进行 4点检测，分析各点间 DNA指数 (DI)、增殖期细胞百分比 (SPF)及增殖指数 (PI)的差异性。结果 T组织异倍体率显著高于 P2、 P5及 N组织， P2与 P5组织间异倍体率差异无显著性，而 P2、 P5组织异倍体率显著高于 N组织； T组织的 SPF及 PI值明显高于 P2、 P5及 N组织，而 P2、 P5及 N各点间检测结果差异无显著性。结论 癌旁 5 cm处组织细胞已出现了潜在的恶变倾向，从而对癌旁 5 cm作为切除范围的标准已属安全的观点提出了质疑。     

纳米载体组氨酸接枝聚介导的 shRNA 对大鼠肝脏 MyD88基因表达的干扰作用

目的：研究应用纳米载体组氨酸接枝聚（β-氨基酯）（HGPAEs）介导的RNA干扰技术对大鼠肝脏髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）基因表达的抑制作用。方法构建HGPAEs及针对大鼠MyD88基因的shRNA（ small hairpin RNA）质粒,并将二者耦合成pMyD88-HGPAEs载体,分别设置生理盐水组、HGPAEs 组、pHK-HGPAEs 阴性对照组、shRNA 组和pMyD88-HGPAEs干预组,通过门静脉注射方法体内转染大鼠肝脏,分别采用荧光定量PCR技术和蛋白印迹法（ Western blot ）检测转染后的MyD88转录水平及蛋白表达水平。结果成功构建载shRNA质粒的HGPAEs载体,体内转染大鼠肝脏后,shRNA组及pMyD88-HGPAEs干预组MyD88基因表达水平差异具有统计学意义（P＜0．05）。与其他4组相比,pMyD88-HGPAEs干预组MyD88基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下降（ P＜0．01）,而生理盐水组、单纯HGPAEs组、pHK-HGPAEs阴性对照组转染后MyD88基因mRNA转录水平及蛋白表达水平差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论 HGPAEs是一种较为理想的基因转运载体,应用针对大鼠MyD88基因的载shRNA质粒的HGPAEs载体,经门静脉注射方法转染大鼠肝脏可显著性抑制MyD88基因表达,本实验成果的取得为下一步动物实验提供一定的资料。