siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的: 构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒,将成功构建的pGRIM-19-si-survivin质粒转染人前列腺癌DU145细胞株,应用半定量RT-PCR方法检测细胞内survivin和GRIM-19 mRNA表达水平,应用MTT法观察其对细胞增殖能力的影响。结果:(1)应用酶切及质粒测序法鉴定,证明成功构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒。(2)与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19及pGRIM-19-si-survivin组survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.05、0.62±0.08和0.35±0.05,差异显著(P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P<0.05);psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin组GRIM-19表达增强,分别为mock组的1.93±0.14、2.57±0.20 和4.12±0.21(P<0.01),与pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin增强GRIM-19表达作用更明显(P<0.05)。(3)转染48 h后,与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin 3组细胞增殖率分别为58.0%±7.2%、62.1%±6.1%和50.2%±4.8%,差异显著(P<0.05);转染72 h后,与mock组比较,3组细胞增殖率分别为43.4%±4.3%、51.3%±6.7%和26.8%±7.1%,差异明显(P<0.05,P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-survivin和GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin;该质粒抑制survivin表达并增强GRIM-19表达,对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。     

人乳头瘤病毒16型L1基因真核表达载体的构建及表达

目的从感染人乳头瘤病毒（HPV）的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长，构建表达载体，并验证目的蛋白的表达。方法根据基因全长设计一对特异引物，用PCR的方法从宫颈癌组织DNA，中获得L1基因，以pMD18T为克隆载体，构建重组质粒进行亚克隆，再以pcDNA3．1（＋）为载体构建表达质粒，转染至人肝细胞系H7702，提取蛋白，采用Western Blot方法检测HPV16-L1蛋白的表达。结果从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV16型L1蛋白编码序列与Genebank报道序列高度同源，其真核表达产物与特异性抗体能够特异性结合。结论成功构建重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-HPV16-L1，为进一步研制HPV预防性疫苗创造基础条件。     

前列腺偶发癌22例临床分析

目的:探讨前列腺偶发癌的临床和病理特征。方法:回顾1982年～1998年经耻骨上前列腺摘除术及经尿道电切术治疗的良性前列腺增生726例资料。结果:术后病理检出前列腺癌为22例,检出率为3.3%。其中A1期6例,A2期16例。高中分化腺癌占77.2%。病理学特征为在增生组织中存在单个或多个腺癌病灶。癌灶与增生组织分界不清,多数可见不典型增生。治疗:16例行双侧睾丸切除术。3年存活率为90%(20/22)。结论:偶发癌检出率低于国内其他报道。通过病理资料观察,提示前列腺癌发生发展变化的过程。提高早期前列腺癌的诊断,可以使其治疗达到满意的效果。     

利用siRNA技术沉默膀胱肿瘤STAT3基因及促进凋亡的机制探讨

目的沉默人膀胱移行细胞癌细胞T24的STAT3基因，并探讨其对T24细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法利用含有STAT3 mRNA的siRNA的pSilencer 3．1-siRNA-STAT3重组质粒转染T24细胞；采用Western印迹、RT-PCR等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响；用WTT法观察重组质粒对T24细胞的体外生长抑制作用；用流式细胞术（FCM）及吖啶橙染色检测重组质粒的诱导凋亡作用。结果重组质粒成功转染T24细胞；Western印迹、RT-PCR证实重组质粒在蛋白及mRNA水平都显著抑制STAT3基因的表达水平，抑制率为59％～72％；MTT及FCM证实重组质粒可显著抑制T24细胞的体外生长并诱导细胞凋亡，抑制率及凋亡率分别为53％和17．3％。结论pSilencer 3．1-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人膀胱肿瘤细胞的表达，抑制肿瘤细胞的生长，促进其凋亡。     

经直肠超声前列腺癌声像特征及前列腺内腺PSA密度在前列腺癌诊断中的作用

目的通过经直肠超声分析前列腺癌声像特征并测量前列腺内腺、外腺与总体积，参考PSA探讨前列腺内腺PSA密度(IPSAD)在前列腺癌与前列腺增生鉴别诊断中的意义。方法回顾分析经直肠超声前列腺癌声像特征及经超声引导下6点活检病理诊断的49例前列腺癌、96例前列腺增生的临床资料。结果(1)前列腺癌声像特征以低回声为主，晚期可见被膜浸润及不规则。(2)前列腺内腺体积增生与癌有显著性差别。(3)PSA、PSA密度(PSAD)、IPSAD在增生与前列腺癌中的比较，均有显著性差异。(4)IPSAD在前列腺癌诊断的特异度为75．5％，敏感度为93．3％，优于PSAD。结论前列腺癌声像特征及IPSAD是鉴别前列腺癌与增生的重要指标。     

Survivin-siRNA对裸鼠前列腺癌生长的影响

目的研究survivin-siRNA对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的作用，探讨survivin与前列腺癌发生、发展的关系。方法人前列腺癌细胞PC-3M荷瘤裸鼠18只随机分为3组：mock组（n=6），psi-scrambled组（n=6）和pSi-sur2组（n=6）。通过电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内，20d后处死动物，计算抑瘤率。利用Western blot检测survivin蛋白表达水平，免疫组化SP法检测增殖指数变化；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果体内实验表明，pSi-sur2组与其他两对照组比较裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P〈0．01），肿瘤组织survivin蛋白表达及肿瘤增殖指数显著降低（P〈0．01），而肿瘤凋亡显著增加（P〈0．01）。结论通过RNA干扰技术抑制survivin的表达，在裸鼠体内可显著抑制前列腺癌生长。     

聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用

目的：观察聚肌胞对小鼠前列腺癌的抑制作用。方法：将16只C₅₇BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重采用区组随机分组方法分为对照组和聚肌胞组,每组8只,每隔2日分别瘤内注射生理盐水和聚肌胞,第7次后切除瘤灶,称瘤重,计算瘤重抑制率,绘制前列腺癌生长曲线及荷瘤鼠生存曲线。前列腺癌组织HE染色观察形态学变化。结果：对照组和聚肌胞组瘤重分别为（4.14±1.56）和（1.58±0.67）g,两组瘤重比较差异具有显著性（P<0.05）;聚肌胞组瘤重抑制率为67.85%;前列腺癌生长曲线显示,聚肌胞组小鼠前列腺癌生长较慢;聚肌胞组荷瘤小鼠的生存时间较对照组长(P<0.05);病理显示对照组较聚肌胞组前列腺癌细胞增殖活跃。结论：聚肌胞可以减慢小鼠前列腺癌的生长,延长荷瘤小鼠生存时间。     

人参二醇皂苷对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肺组织一氧化氮含量的影响

目的探讨失血性休克复合内毒素二次打击大鼠肺组织一氧化氮（NO）含量的变化及人参二醇皂苷（PDS）对其影响。方法利用失血性休克对Wistar大鼠制造首次打击，给予地塞米松（Dex）或PDS预治疗，之后腹腔注入脂多糖（LPS）进行第二次打击，二次打击6h后处死大鼠，取肺脏组织进行一氧化氮合酶（NOS）、诱导型NOS（iNOS）活力和NO代谢产物NO2^-／NO3^-含量的测定。结果二次打击的大鼠肺脏组织NOS、iNOS活力水平及N02-／N03-均明显高于假手术对照组（P〈0．05），而经过Dex或PDS处理的大鼠肺脏组织NOS、iNOS活力水平及NO2^／NO3^-与二次打击大鼠相比均明显降低（P〈0．05）。结论失血-内毒素二次打击时，NO产生过多可能参与了急性肺损伤的发生，PDS可通过抑制NO的产生从而达到保护肺脏的作用。     

输精管结扎大鼠前列腺雄激素受体及血清LH、睾酮的变化

21只雄性Wistar大鼠,随机分为输精管结扎组(VG)10只及假手术组(SOG)11只。术后10个月检测前列腺胞液雌激素受体浓度及血清LH、睾酮水平。结果是,前列腺胞液雄激素受体浓度,VG为7.44±3.09fmol/mg pro.,SOG为8.27±3.38fmol/mg pro.,两组比较无显著差异(P>0.05)。血清LH的结果,VG为2.20±0.38mIU/ml,SOG为2.26±0.16mIU/ml;血清睾酮为2.01±1.07nmol/L(VG)和2.86±0.92nmol/L(SOG),经t检验,均无统计学意义。本实验结果显示,输精管结扎对血中LH、睾酮水平及前列腺雄激素受体均无明显影响。