透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立

将1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化后的透明质酸(HA)与牛血清白蛋白(BSA)共价偶联制备完全抗原BSA-HA,纯化后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备HA特异性单克隆抗体,考察单抗的生物学特性,并建立HA定量免疫分析方法——间接竞争ELISA法。研究表明,完全抗原BSA-HA免疫BALB/c小鼠后,能诱导HA特异性抗体的分泌;经细胞融合、选择性培养、筛选和亚克隆,获得一株稳定分泌HA特异性抗体的杂交瘤细胞8B6,其腹水抗体效价达1∶256 000以上,亲和常数为6.71×10⁹ mol^-1,独特型为IgG1;以10.0 ng/mL HA包被酶标板,1.0% BSA为封闭剂,建立HA间接竞争ELISA法,其线性范围介于0.01~10.0 μg/mL,特异性好、灵敏度高。     

经尿道前列腺钬激光剜除术与经尿道前列腺等离子电切术治疗良性前列腺增生症疗效比较

目的比较经尿道前列腺钬激光剜除术与经尿道前列腺等离子电切术治疗良性前列腺增生症的应用效果。方法选取2016年8月至2018年8月江苏省灌云县人民医院收治的良性前列腺增生症患者188例,按随机数字表法分为经尿道前列腺钬激光剜除术组和经尿道前列腺等离子电切术组各94例。比较两组患者围手术期相关指标,术前、术后6个月统计两组患者的最大尿流率、残余尿量、前列腺特异性抗原、国际前列腺症状评分及生活质量量表评分等,统计两组患者术后并发症。结果经尿道前列腺钬激光剜除术组患者手术前后血红蛋白差值、术中出血量、留置导尿管时间、膀胱冲洗时间及住院时间显著低于经尿道前列腺等离子电切术组,且经尿道前列腺钬激光剜除术组手术时间及术中切除的前列腺重量明显高于经尿道前列腺等离子电切术组,差异有显著性(P<0.05)。经尿道前列腺钬激光剜除术组并发症发生率(6.38%)显著低于经尿道前列腺等离子电切术组(17.02%),差异有显著性(P<0.05)。与术前相比,术后6个月两组患者最大尿流率显著升高,残余尿量、前列腺特异性抗原、前列腺体积、国际前列腺症状评分及生活质量量表评分评分均显著下降,差异有显著性(P<0.05);术后6个月,经尿道前列腺钬激光剜除术组前列腺特异性抗原、前列腺体积显著低于经尿道前列腺等离子电切术组,差异有显著性(P<0.01)。结论经尿道前列腺钬激光剜除术具有腺体残留率低、术后出血少及术后并发症发生率低等优势。     

住院期间老年泌尿系统感染患者的病原菌分布及其耐药性特征分析

目的 分析老年泌尿系统感染住院患者的病原菌分布特点和耐药情况,为老年性泌尿系统感染的诊疗提供参考依据.方法 选取2018年1月-2018年12月期间在复旦大学附属华东医院接受治疗、年龄≥60岁、且尿培养阳性的住院患者465例,对泌尿系统感染病原体的分布特点和耐药性进行分析.结果 465例中段尿培养阳性的老年住院患者共检...     

对一种新的厌氧菌培养皿--OxyplateTM的评估

目的探讨新的厌氧菌培养皿--自动氧净厌氧培养皿(OxyplateTM)分离培养厌氧菌的效果.方法比较OxyplateTM与厌氧袋培养法对100例临床厌氧菌标本的分离情况,并观察多株已知厌氧菌菌株在2种平板上的生长情况.结果OxyplateTM从100例临床标本中分离出68株厌氧菌,阳性分离率为62%;厌氧袋培养法分离出62株厌氧菌,阳性分离率为58%.大多数已知厌氧菌在OxyplateTM上形成的菌落较在厌氧袋内培养的厌氧血平板上稍大.结论OxyplateTM中含有的Oxyrase酶可以快速去除Oxyplate平板内的氧气,迅速产生无氧环境,有利于厌氧菌的生长、繁殖,其厌氧菌的阳性分离率较简易厌氧袋培养法高.     

临床常见产AmpC β-内酰胺酶菌株中染色质ampC共同序列的研究

目的分析临床常见AmpC β-内酰胺酶（简称AmpC酶）产酶菌株中染色质ampC的基因序列,从而为AmpC酶的分子生物学检测以及其调控机制研究提供理论依据。方法 57株临床常见AmpC酶产酶菌株分离自医院感染患者样本,抽提细菌染色质DNA,聚合酶链反应（PCR）扩增ampC基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后比对同种细菌之间和不同种细菌之间染色质ampC基因的同源性和共同序列。根据共同序列设计引物,进一步利用该引物检测染色质ampC。结果 57株细菌的基因组中,使用PCR扩增出染色质ampC基因41株,并成功测定了其ampC基因的序列。比对后发现大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌和产气肠杆菌的染色质ampC菌种内有很高的同源性,但细菌之间的同源性较低。根据共同序列设计出菌种特异性PCR引物,能够有效的鉴定出染色质ampC基因。结论大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌和产气肠杆菌各自染色质ampC具有高度同源性,其菌种特异性的ampC引物可用来检测其染色质ampC的存在。     

连接酶反应技术检测冠心病三个相关基因的单核苷酸多态性

目的 利用聚合酶链反应-连接酶反应（polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR）技术检测瘦素受体基因Lys109Arg （A/G）、Gln223Arg （A/G）,脂联素基因G276T、T45G,护骨素基因T950C、G1181C六个多态性位点的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）.方法 参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成一对引物及3条探针,先通过PCR反应获得含有待检测突变位点的基因片段,再进行LDR,根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片段长度来判断基因型别.结果 采用PCR技术成功扩增出包含瘦素受体基因（110 bp,130 bp）、脂联素基因（400 bp）、护骨素基因（118 bp,163 bp）多态性位点的基因片段.根据LDR产物片段长度不同进行基因分型,纯合子只有一种片段长度,杂合子包含两种纯合子的片段长度,如瘦素受体基因SNP Lys109Arg （A/G）的PCR产物长度为110 bp,LDR产物片段的长度为110 bp时则判断为AA基因型,112 bp则判断为GG基因型,AG基因型则具有110 bp、112 bp两种片段长度.PCR-LDR基因分型结果与DNA测序技术的检测结果一致（Kappa=1,P=0.00）.结论 PCR-LDR技术简单、快速、准确、成本低,适用于大批量SNP检测.     

灵芝多糖GLPL1免疫原优化及其单克隆抗体制备

目的:优化灵芝多糖GLPL1免疫原,用于制备GLPL1单克隆抗体,为GLPL1免疫分析法建立提供物质基础。方法:GLPL1经1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化后与牛血清白蛋白(BSA)共价偶联,制备系列拟糖蛋白GLPL1-BSA并考察其免疫原性;选择其免疫性强者免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备GLPL1特异性单抗。结果:共获得取代度(GLPL1/BSA摩尔比)分别为≈1、≈3、≈6三种拟糖蛋白GLPL1-BSA,其免疫小鼠后诱导产生强烈的抗GLPL1的IgM初次应答和IgG回忆应答,且GLPL1诱导小鼠主要分泌IgG2a独特型抗体;经细胞融合、筛选和亚克隆,获得一株分泌GLPL1特异性抗体杂交瘤细胞6G7,其抗体独特型为IgM。结论:成功优化、制备了灵芝多糖GLPL1的免疫用抗原和GLPL1特异性单克隆抗体。     

强迫游泳应激大鼠行为和血清皮质酮的变化

目的探讨强迫游泳不同应激阶段和应激强度对大鼠行为和内分泌的影响,并分析这些改变的精神病理学意义。方法建立强迫游泳模型,将大鼠随机分为对照组、单次应激组、2周应激组和4周应激组。采用旷场试验评定应激后大鼠的行为反应,酶联免疫吸附实验检测血清皮质酮水平。结果随着应激次数增加,大鼠的主动性运动逐渐减少,而被动性运动逐步增加。单次应激组的直立和修饰[(7.50±2.04)次,(8.33±1.88)次]明显高于对照组[(1.84±0.35)次,(5.05±0.88)次]、2周应激组[(2.54±0.66)次,(4.21±0.37)次]和4周应激组[(2.83±0.75)次,(3.61±0.46)次]。2周应激组和4周应激组血清皮质酮水平[(1001.35±202.91)ng.ml-1,(728.67±250.87)ng.ml-1]明显高于对照组[(626.52±349.89)ng.ml-1]和单次应激组[(359.09±164.32)ng.ml-1]。血清皮质酮水平与应激强度呈正相关(r=0.488,P<0.05)。应激适应组修饰、直立的次数[(6.11±5.04)次,(5.67±4.92)次]明显高于非适应组[(3.64±1.96)次,(1.64±1.06)次]而其皮质酮水平[(580.43±383.52)ng.ml-1]明显低于非适应组[(812.32±157.80)ng.ml-1]。结论(1)单次应激组大鼠表现焦虑样行为增多,慢性应激可导致大鼠行为的明显抑制;(2)在强迫游泳实验中存在主动性与被动性行为个体差异,具有不同的精神病理学意义。