全人源性肝癌单链抗体的表达、纯化及功能鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人源性肝癌单链抗体(scFv),并分析他的结合活性。方法:应用噬菌体表面呈现技术获得人源性肝癌scFv,利用重叠延伸PCR将VL和VH基因以(Gly4ser)3linker连接成单链,插入表达载体pET28a( ),诱导目的蛋白表达,对包涵体进行溶解、复性、纯化,得到可溶性目的蛋白,应用非竞争细胞ELISA检测与肝癌细胞结合的特异性及结合能力。结果:在A600为0.8时开始诱导,持续6h,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的26%,包涵体经过复性纯化后,得到纯度达到95%的重组scFv,其亲和常数为:3.6×107mol/L。结论:实现了人源性肝癌scFv的蛋白表达,抗体蛋白与肝癌细胞具有较强的特异性结合能力,为今后进行免疫学检测和开发肿瘤靶向治疗提供了研究手段。     

肝癌生长、转移中的微血管生成机制

目的　研究微血管生成在肝癌、肝硬化、正常肝间的差异及其与肝癌生长、转移、病理特点的关系 .方法　用 因子抗体和 APA试剂盒对 45例肝癌、2 1例肝硬化和 8例正常肝的标本行免疫组织化学染色 ,然后在 2 0 0 (× )显微镜下计数每一视野下的微血管数目 .结果　肝癌、肝硬化、正常肝组织的微血管数目分别是 6 7.4± 2 3.8,14.4± 5 .8和 3.5±2 .0 ,经统计学分析 ,三者相差显著 (P<0 .0 1) ,微血管数与肝癌的转移、包膜形成相关 ,而与肝癌的大小、分级无关 .结论　微血管生成在肝癌的转移、包膜形成中具有重要的作用     

肝血管瘤中VEGF的表达及其与AgNOR定量的关系

本文用肝血管瘤石蜡切片作血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）链霉亲和素－生物素－过氧化物酶免疫组织化学染色（妈ＳＡＢＣ法）和核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）计数方法，研究ＶＥＧＦ在肝血管瘤成因中的地位。结果显示：４８例肝血管瘤标本中，ＶＥＧＦ阳性表达率为７５．０％，其中（＋）者９例，（＋＋）者１１例（＋＋＋）者１６例，且ＶＥＧＦ表达强度在不同的组别间ＡｇＮＯＲ计数差异显著（Ｐ〈０．０１）。提示ＶＥＧＦ     

T4DNA连接酶对电转化效率的影响

目的 探讨T4 DNA连接酶影响电转化效率的机制并寻找提高电转化效率的方法.方法 将1μg噬粒pDAN5加入到连接反应体系中并进行沉淀、热灭活以及酚氯仿抽提等各种处理后进行电转化.结果 热灭活、酚氯仿抽提、热灭活后沉淀及热灭活后酚氯仿抽提处理后的转化效率最高(4.6×108～5.3×108),其次是沉淀处理(4.8×107),未处理的转化效率最低(4.4×106).结论 T4 DNA连接酶的活性是导致电转化效率降低的主要原因,任何可以灭活该酶活性的方法均可显著地提高转化效率.