浙江省HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

目的 利用脱氧核糖核酸(DNA)序列分析浙江省境内艾滋病病毒1型(HIV-1)流行毒株的亚型，为艾滋病预防控制工作提供参考。方法 采取14份浙江省HIV-1抗体阳性者的全血，提取前病毒DNA作为扩增模板，设计引物对enz，基因的C2-V3区进行聚合酶链反应(PCR)扩增并测定其序列。所得序列用Wisconsin公司的GCG软件包进行分析，确定亚型。结果 14份标本中有9份扩增阳性并得到相应序列，扩增率为64．3％。经过离散率计算和系统树分析后证实：4份标本为E亚型的A／1三流行重组模式，3份标本为B亚型，1份标本为C亚型的B／C流行重组模式，1份标本为G亚型。结论 目前浙江省境内有多种亚型的HIV-1毒株存在，流行形势严峻。迫切需要深入调查研究，并在高危人群中开展行为干预措施。     

HIV耐药对低病毒载量的AIDS病人治疗预后的影响

目的探索艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)病毒载量<1 000拷贝/mL的病人的耐药情况,以及耐药对后期治疗效果的影响。方法从安徽、河南等7个地区选取97例病毒载量大于检测限,同时<1 000拷贝/mL的血浆样本,采用实验室自制(in house)方法扩增pol区的蛋白酶和反转录酶基因区,片段长度1.3kb,测得序列并经编辑后,提交至Stanford HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.Stanford.edu),分析耐药位点与耐药程度。结果在耐药毒株出现的初期,非核苷类反转录酶抑制剂是主要耐药药物,特别是对其中奈韦拉平(Nevirapine,NVP)的耐药是导致病人耐药的主要因素。在病毒载量>150拷贝/mL<1 000拷贝/mL的病人中,随着治疗时间延长,其耐药位点增加,耐药谱扩大(耐受药物种类与>1 000拷贝/mL的治疗失败病人相似)。结论在条件允许的情况下,应关注病毒反弹早期还处于低病毒载量的病人,其耐药检测结果可以有效预测后期的治疗失败和耐药发生。     

我国维、汉族CCR532、CCR2-64I、CX3CR1-V249I和CX3CR1-T280M多态性分析及其对HIV感染的影响

本研究选择了该区维族和汉族两个主要民族,分析了上述三个基因4个突变体在这些民族的分布及其分布的差异。并与HIV感染者相比较,观察了上述变异体对HIV感染的影响。来自新疆维汉HIV未感染者150人(维族100人、汉族50人),维族HIV感染者样品58人和来自北京的HIV感染者50人中所有未感染人群均经ELISA初筛为阴性结果,而所有阳性样品均经过ELISA初筛、WB确认、核酸测定确认。外周血采集后24h内分离单个核细胞并提取基因组DNA,-20℃冷冻备用。样品经PCR扩增后,利用PCR/RFLP技术检测CX3CR1和CCR2基因型,根据CCR5缺失位点设计引…     

四川省HIV- 1 流行毒株的基因序列测定和亚型分析

使用PCR对 9份采集于 1996年中旬的四川省经血液途径感染的HIV - 1阳性感染者外周血单个核细胞 (PBMCs)样品进行扩增 ,获得HIV - 1膜蛋白 (env)基因的核酸片段 ,并对其C2-V3及邻区 350～ 4 50个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明 ,9份样品中存在B和C两种亚型的HIV - 1毒株序列 ,其中B亚型 5份 ,彼此间的基因离散率为 1.4 % ;C亚型 4份 ,在不包括sc3号样品的情况下彼此间的基因离散率为 2 .6% ,而sc3号样品与其它 3份样品在核苷酸序列上的差异却达 11.5%。与A～E参考亚型及部分B和C亚型代表株序列相比较 ,属四川B亚型的 5个毒株与包括泰国、缅甸及中国云南德宏在内的B亚型毒株序列十分接近 ,基因离散率在 3.6%～4 .3%的范围内 ;属四川C亚型的 4个毒株除sc3外则与代表印度毒株的C亚型共享序列及德宏C亚型毒株序列十分相似 ,其基因离散率均为 3.1% ,与非洲C亚型毒株nof的基因离散率为13.1% ,而sc3号序列与印度、中国德宏和非洲C亚型HIV - 1的基因离散率却在 10 .1%～ 17.2 %的范围内。提示 ,HIV - 1在四川的流行时间不长 ,且其B和除sc3之外的C亚型毒株的传入与流行在云南德宏州的相同亚型HIV - 1毒株密切相关 ,而由sc3所代表的C亚型毒株则存在目前还尚不了解的其它传入来源。     

HIV-1感染者外周血Ⅰ型干扰素产生细胞水平变化的研究

目的 探讨我国HIV感染者外周血Ⅰ型干扰素产生细胞(IPC)水平及其与疾病进展的关系.方法 应用流式细胞术以全血染色、全白细胞设门对92例HIV-1感染者和59例健康对照进行IPC水平的测定,并分析外周血IPC变化与CD4+ T细胞计数和HIV血浆病毒载量的关系.结果 HIV感染者外周血CD4+ T细胞及IPC绝对计数的均数分别为342.000个/μl和3.431个/μl,显著低于正常对照(965.000个/μl和5.995个/μl,P均<0.001);HIV感染者IPC细胞数量与CD4+ T细胞计数成正比(r = 0.430,P<0.001),与HIV血浆病毒载量成反比(r =-0.483,P< 0.001);CD4+ T淋巴细胞计数<200个/μl的感染者IPC水平明显低于CD4+ T淋巴细胞计数>200个/μl者(P<0.005).HIV慢性感染者的IPC水平显著高于艾滋病患者(P<0.001),新发感染者的IPC水平(5.080个/μl)明显低于正常对照(P=0.038),但新发感染与慢性进展者的IPC水平间的差异无统计学意义.结论 HIV感染可显著降低机体的IPC水平,IPC水平变化与HIV疾病进展密切相关.     

中国艾滋病病毒1型流行毒株V3环序列变异性的研究

目的 研究中国艾滋病病毒1型(HIV-1)毒株V3环序列的变异性。方法 对中国1996～2000年491例HIV-1感染者env基因C2-V3区经聚合酶链反应(PCR)扩增并测序,测得的序列经DNA软件编辑后,用Wisconsin公司GCG软件包进行分析。结果 从核酸序列可以看出,V3环的核苷酸存在着点突变和基因的漂移。各亚型流行株V3顶端的四肽特征主要为:GPGQ 72.6％,GPGR 13％,GPGK 7.6％,其它形式6.7％。在V3环氨基酸序列11、25位点未同时出现带正电荷的氨基酸。基因离散率的分析表明呈现逐年递增趋势。结论 中国V3环顶端四肽序列主要为GPGQ,从1990的10％、1993年的29％上升到2000年的72.6％。而GPGR则从1990年的80％、1993年的57％下降到2000年的13％。更加证明了在中国存在着HIV-1毒株V3区顶端四肽由GPGR向GPGQ漂移的现象。从V3环序列的高度变异性分析表明中国正处于HIV快速流行期。     

HIV-1感染者CD4+T细胞受体基因多样性特点及其与病毒载量的相关性

目的 分析HIV-1感染者CD4+T细胞受体(TCR)基因的多样性特征及其与病毒载量的相关性.方法 应用抗CD4单克隆抗体从25份HIV-1感染者和10份HIV-1阴性对照样本外周血单个核细胞(PBMC)中分离CD4+T细胞,提取细胞总RNA,然后通过逆转录及巢式多聚酶链反应(nestedPCR)对TCR 22个Vβ基因家族的互补决定区3(CDR3)进行扩增,利用ABI3700测序仪对扩增的PCR产物进行扫描,定最分析HIV-1感染者TCRCDR3区多样性变化特征及其与病毒载量的相关性.结果 HIV-1感染者CD4+T细胞TCR CDR3区平均D(distance)值显著高于正常对照组(P＜0 05),TCR Vβ基因各家族CDR3长度谱型成寡克隆分布,TCR CDR3区的紊乱与病毒载量呈正相关(r=0 494,P＜0 05);HIV-1感染引起TCR多样性的改变不仅表现在不同Vβ基因家族上,而且也表现在CDR3长度上,其中感染者Vβ8、Vβ22、Vβ23基因家族的变化与正常人差异有统计学意义.结论 HIV-1感染能引起CD4+T细胞TCR基因多样性的减少及高斯(Gaussian)分布的破坏,TCR CDR3区的紊乱与病毒载量呈正相关.

Abstract：

Objective To assess the impact of the virus on the complementary determining region 3 (CDR3) length diversity of T cell receptor(TCR) Vβ repertoires of CD4+ T lymphocytes and to explore its association with viral load in individuals with HIV-1 infection. Methods The TCR repertoire was examined using spectratyping of CDR3 length diversity within CD4+ T cells in HIV infected and healthy adults. Separation of CD4+ T cells from peripheral blood mononuclear cells ( PBMCs) was carried out by using immunomagnetic beads coated with anti-CD4 antibody. Total RNAs from the purified CD4 + T lymphocytes were isolated and used to perform nested-PCR amplifications in CDR3 of 22 TCR gene families. CDR3 diversity and its association with viral load in individuals with HIV-1 infection were analyzed. Results An average diversity for all CDR3 profiles in CD4+ T cells from 25 HIV-infected individuals was significantly different as compared to 10 age-matched healthy donors (P＜0.05) with the HIV-infected individuals losing diversity in the CDR3 profiles. There was positive correlation between changes in TCR CDR3 diversity and viral load (r = 0. 494, P ＜ 0. 05). The changes in CDR3 length diversity of Vβ families in HIV-infected individuals, particular in Vβ8, Vβ22, Vβ23 were statistically different from the healthy controls. Conclusion HIV-1 infection might induce the loss of TCR Vp repertoire diversity and disrupt the CDR3 Gaussian distributions within CD4 + T cells. There should be positive correlation between changes in TCR CDR3 diversity and the viral load in HIV-1 infected patients.     

我国 HIV-1 B''''亚型感染长期存活者病毒分离及体外复制的研究

目的从HIV-1B’亚型感染的长期存活者分离HIV-1病毒,观察HIV-1病毒分离与CD4淋巴细胞水平和病毒载量的相关性。方法采用外周血单核细胞共培养法,从感染者外周血分离HIV-1毒株,测定其复制动力学,并比较HIV分离率与CD4细胞计数和病毒载量的关系。结果从190例HIV感染者中分离到101株HIV-1病毒,平均病毒分离率为53%;载量为<103、103～104、104～105和>105拷贝/ml时,病毒分离率分别为3.7%、36%、68%和73%;CD4细胞计数为<200、200～500和≥500个/μl时,病毒分离率分别为66%、59%和28%。结论HIV病毒培养阳性率与CD4细胞计数呈负相关,与病毒载量呈正相关;HIV体外复制力与病毒载量呈正相关关系。     

我国维、汉族CCR5△32、CCR2-64I、CX3CR1-V249I和CX3CR1-T280M多态性分析及其对HIV感染的影响

本研究选择了该区维族和汉族两个主要民族,分析了上述三个基因4个突变体在这些民族的分布及其分布的差异.并与HIV感染者相比较,观察了上述变异体对HIV感染的影响。     

云南省陇川县HIV-1流行毒株膜蛋白基因C2-V3区序列测定和分析

使用ＰＣＲ对２１份采集于１９９５年中的云南陇川县ＨＩＶ－１阳性静脉吸毒者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增，从１７份样品中获得了ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段，并对其Ｃ２－Ｖ３及邻区４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。研究结果表明，１７份陇川样品中存在Ｂ和Ｃ两种亚型的ＨＩＶ－１毒株序列，各亚型内的基因离散率分别为４．７％和３．３％。与Ａ～Ｅ参考亚型及部分Ｂ和Ｃ亚型代表株序列相比较，属陇川Ｂ亚型的１４个毒株与包括泰国、缅甸及云南瑞丽在内的Ｂ亚型毒株序列十分接近，基因离散率在３．９％～４．５％的范围内；属陇川Ｃ亚型的３个毒株则与代表印度毒株的Ｃ亚型共享序列及瑞丽Ｃ亚型毒株序列十分相似，其基因离散率均为２．５％。以上数据提示，ＨＩＶ－１在陇川的流行时间不长，且Ｂ和Ｃ亚型毒株的传入时间相差１年左右。对Ｂ亚型毒株Ｖ３环序列的分析还发现，位于Ｖ３环顶端的四肽序列中ＧＰＧＱ占６４．３％，ＧＰＧＲ则仅占２８．６％，且编码其精氨酸（Ｒ）的密码子均为ＣＧＡ而不是ＡＧＡ。此结果与作者根据早期瑞丽ＨＩＶ－１毒株序列研究结果得出的推测相吻合。