重庆地区69例丙型肝炎病毒感染基因分型研究

目的：探讨重庆地区HCV流行的主要基因型。方法：提取69份血清标本的HCV RNA，通过逆转录套式PCR（RTnested-PCR)扩增5'端非编码区（5'NCR)，以4种限制性内切酶BstUⅠ，NciⅠ，HaeⅢ,RsaⅠ对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP），依据不同的酶切电泳图谱确定HCV基因型。结果：69份HCV感染者血清标本有60份可以通过上述方法进行基因分型，其中主要基因型是1b,2a分别占36．24％和31．88％。结论：HCV－1b,2a仍然是重庆地区主要的基因型，但其所占比例不如中国其它地区高，说明HCV的分布呈地域依赖性。     

自身抗体在乙型病毒性肝炎和自身免疫性肝炎中的特点分析

目的 分析自身抗体在乙型病毒性肝炎及自身免疫性肝炎中的特点.方法 将血清样本分为3组:乙型病毒性肝炎组(HBV) 306例、自身免疫性肝炎组(AIH)235例和健康对照组150例,采用间接免疫荧光法和欧蒙印迹法检测血清中抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)抗体和抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体等肝病相关自身抗体.结果 (1) HBV组和AIH组ANA检出率分别为9.1％、80.42％,明显高于健康对照组;AIH组ANA阳性率显著高于HBV组(P＜0.05).(2)HBV组ANA滴度1:100、1:320、1:1 000阳性率分别为6.2％、2.6％、0.3％,以低滴度(1:100)为主,AIH组1:100、1:320、1:1 000滴度阳性率分别为22.98％、41.28％、14.47％,以高滴度(≥1:320)为主.(3)HBV组AMA、ASMA、抗LKM-1及抗SLA/LP抗体的阳性率分别是0.3％、0.9％、0.3％和0％,AIH组的阳性率分别为36.6％、25.1％、23％和2.55％,明显高于HBV组.(4)AIH组荧光模型以核均质型和核仁型为主;HBV患者以颗粒型为主.(5)采用1999年诊断积分系统评估,28例自身抗体阳性乙肝患者中有1例评分超过16分,达到自身免疫性肝炎确诊标准(≥16分).结论 自身免疫性肝炎患者具有高滴度的自身抗体;乙型病毒性肝炎患者血清中低滴度的自身抗体不构成自身免疫性肝炎,高滴度的自身抗体要结合临床资料排除自身免疫性肝炎.     

丙型肝炎病毒1b型5′端5223 bp半基因组扩增

目的:扩增丙型肝炎病毒(HCV) 1b型5′端5223 bp半基因组. 方法:取5份HCV 1b血清标本,采用3种RNA提取方法,比较几种逆转录酶及逆转录条件,选取不同Taq酶进行长链RT-Nested PCR反应体系及循环条件的筛选和优化,利用最佳的模板提取方法及优化的RT-PCR反应条件扩增出5′端长度为5223 bp(5223 bp)半基因组. 结果:Trizol法可以获得完整的RNA模板,适合长链的扩增;应用ReverTra Ace-a-TM酶和SuperScriptTMⅡ,反应条件为42℃ 10 min后,42℃ 2 min,48℃ 2 min,30个循环,然后75℃,10 min;可获得完整的cDNA模板;TaKaLa LA TaqTM和Platinum Taq DNA polymerase High Fidelity采用两种扩增条件:①94℃变性2 min,94℃ 30 s,62℃ 30 s,72℃ 4.5 min,扩增30个循环;②94℃变性2 min,94℃ 15 s,68℃ 5 min,扩增5个循环,然后94℃ 15 s,68℃ 5 min(每个循环延长10 s), 扩增20个循环,最后72℃延伸10 min,均可获得HCV 1b型5′端5223 bp半基因组的阳性结果,TaKaLa LA TaqTM扩增效果最好;PCR产物经核苷酸序列测定证实为HCV 1b型. 结论:通过各种条件的优化,成功地实现了5′端半基因组的扩增,为下一步全长质粒及复制子的构建打下了基础.     

人肝脏星形细胞培养激活及其c-fos,c-jun的表达

目的观察体外培养过程中人肝脏星形细胞(HSCs)表型及其c-fos和c-jun表达的改变.方法将分离的正常人HSCs进行原代及传代培养,倒置显微镜下动态观察培养细胞形态改变,对原代及传代培养细胞铺展片进行PCNA、Ⅰ型前胶原、α-SMA,c-fos及c-jun免疫细胞化学染色.结果正常人HSCs在含100 mL/L小牛血清中培养时,其表型由原代培养初期的静息型转变为原代培养后期及传代后的激活型.激活的人HSCs呈现典型的成纤维细胞形态特征,其表达PCNA、Ⅰ型前胶原及α-SMA明显阳性.刚分离的正常人HSCs在不含血清的培养液中培养24 h后,其c-fos及c-jun表达均为阴性,而在含100 mL/L小牛血清的培养液中继续培养24 h后,c-fos及c-jun表达为阳性.原代培养d10及传代培养d 3的HSCs其c-fos及c-jun表达持续阳性.结论在含小牛血清的DMEM培养液中培养时,人HSCs自发地激活,这种激活可能与c-fos及c-jun表达增加有关.     

探索1例依非韦伦相关药物性肝损伤的遗传代谢因素

目的 探索1例依非韦伦(EFV)相关药物性肝损伤的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者在停药2个月后仍进展为重度肝炎的遗传代谢因素。方法 回顾性分析该院收治的1例已接受2个月EFV治疗(600 mg/d,口服)且停药后仍进展为重度肝炎的AIDS患者资料,对其细胞色素氧化酶P450亚型CYP2B6基因的外显子进行一代测序。结果 患者CYP2B6基因存在c.516G>T的杂合变异。结论 CYP2B6基因c.516G>T的杂合变异患者高剂量服用EFV可进展为重度肝炎,临床需重视患者基因型并个性化给药。     

核苷类似物干预下乙型肝炎病毒前S抗原消长与DNA复制水平的关系

目的 监测核苷类似物干预下HBV前S1抗原(PreS1)、前S2抗原(PreS2)的动态变化,探讨PreS1、PreS2与HBV DNA复制水平的相关性.方法 选取拉米夫定治疗有效应答后出现病毒学反跳的慢性乙型肝炎患者12例,以及持续5年阿德福韦酯抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者20例,动态监测PreS1、PreS2及其他HBV标志物.根据不同资料分别选择t检验、X2检验、线性相关与回归分析或方差分析.结果 12例拉米夫定治疗的患者,在HBV DNA发生剧烈变化的4个时间点,均未观察到PreS1、PreS2滴度随HBV DNA复制水平的一致变化;20例阿德福韦酯治疗的患者中,仅1例患者PreS1、PreS2随HBV DNA和HBeAg一起阴转,其余均无显著变化;采用不等距重复测量设计方差分析绘制变化趋势轮廓图,未观察到PreS1、PreS2滴度随HBV DNA水平一致的变化趋势.结论 在核苷类似物干预下PreS1、PreS2滴度不能反映HBV DNA复制水平以及HBeAg的血清学转换.     

干扰素提高低水平HBsAg慢性乙型肝炎患者临床治愈率的分析

目的 明确干扰素(interferon,IFN)治疗低水平HBsAg慢性乙型肝炎患者的临床治愈率、影响因素及最适疗程.方法 回顾性分析了2012年1月至2014年8月间在我院感染科门诊接受聚乙二醇干扰素(Peg-IFN)或普通干扰素治疗疗程≥24周、HBsAg＜3 000 IU/mL的慢性乙型肝炎患者74例,获得HBsAg和HBeAg清除定义为应答,治疗第24、48、72周依次分析疗效影响因素,采用非参数检验、x2检验、Logistic回归模型分析应答组与未应答组患者的一般情况、HBV标志物以及治疗过程中各指标变化对HBsAg清除的影响.结果 74例患者治疗至停药时,25例(33.8％)发生应答,应答组中位基线HBsAg水平较不应答组低(70.70 IU/mL vs 440.71 IU/mL,P=0.041);Peg-IFN的HBsAg清除率高于普通IFN(41.9％ vs 22.6％,P=0.084).第12周HBsAg下降百分数可预测24周疗效(OR=1.058,P=0.010),ROC曲线下面积为0.860,Cut-off值为78.9,敏感性为0.889,特异性为0.815.基线HBV DNA水平和第24周HBsAg下降百分数可预测48周疗效(OR =9.116,P=0.033;OR=1.089,P=0.006),第24周HBsAg下降百分数ROC曲线下面积0.870,最佳的Cut-off值为69.7,敏感性为1,特异性为0.722.48周内清除率与治疗时间呈线性正相关,至48周时HBsAg清除21例,占总应答例数的84.0％ (21/25).结论 IFN治疗基线HBsAg＜3 000 IU/mL病例的临床治愈率明显高于基线水平高者,Peg-IFN略优于普通IFN,疗程建议为48周,治疗12周后可根据当前时间点的HBsAg下降程度评估后续疗效.     

ICU护士职业倦怠及其与离职意愿的相关性调查

目的探讨ICU护士职业倦怠及其与离职意愿之间的关系。方法采用Maslach职业倦怠量表、离职意愿量表对长沙市四所省级综合性三甲医院207名ICU护士进行问卷调查。结果 ICU护士职业倦怠中情绪衰竭维度得分为（23.20±9.71）分、去人格化维度得分为（6.43±5.81）分,均属于中度倦怠;个人成绩感得分为（32.34±9.40）分,属于高度倦怠。76.3%（158名）的ICU护士存在离职意愿,其中17.4%（36名）的ICU护士离职意愿强烈。情绪衰竭和去人格化与离职意愿呈正相关（r=0.531,r=0.384,P〈0.05）,而个人成就感与离职意愿呈负相关（r=-0.310,P〈0.05）。结论 ICU护士职业倦怠较严重,离职意愿率较高。应注意降低ICU护士的职业倦怠感,从而减弱离职意愿,以便有效预防ICU护士离职行为的发生。     

快速康复外科理念在肝癌肝切除围手术期应用的Meta分析

[目的]系统评价快速康复外科(fast track surgery,FTS)理念在肝癌切除术围手术期应用的安全性及有效性.[方法]检索各数据库中有关肝癌切除术应用FTS理念对比传统方式的随机对照试验文献,检索时间截止至2015年11月.进行试验筛选、资料提取、质量评价和Meta分析.[结果]共纳入8个研究的848例患者,根据文献将其分为观察组(FTS组,n=416)和对照组(CS组,n=432).FTS组相比CS组能显著减少住院时间(MD=-3.24,95％ CI=-5.27～-1.21,P＜0.01),缩短术后住院时间(MD=-1.46,95％CI=-2.28～-0.63,P＜0.01),缩短术后首次排气时间(SMD=-3.55,95％ CI=-4.91～-2.18,P＜0.01),缩短术后首次排便时间(SMD=-1.97,95％ CI=-3.39～-0.54,P＜0.01),减少住院费用(MD=-0.54,95％ CI=-0.92～-0.16,P＜0.01),术后d1血清C反应蛋白水平明显降低(SMD=-4.87,95％ CI=-8.42～-1.32,P＜0.01),而且FTS组并发症的发生率与CS组比较无统计差异.[结论]应用FTS理念能明显加快肝癌切除术后患者的康复速度,值得进一步深入研究和临床推广.     

4例同种异体全肝原位移植术后感染的预防及控制

报告4例同种异体全肝原位移植术后患者在无层流设备的隔离病室内,采取严密的预防及控制感染措施,不仅顺利度过感染、排斥期,而且还减少了术后并发症的发生,缩短了住院时间,取得了满意的效果.