静脉移植骨髓间充质干细胞改善心肌病心力衰竭大鼠的心功能

目的:经静脉移植骨髓间充质干细胞至阿霉素诱导的心力衰竭大鼠体内,观察骨髓间充质干细胞对心功能的影响及其在体内的存活情况。方法:实验于2004-03/2005-11在福建省高血压研究所完成。①分离纯化近交系F344大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养,采用流式细胞仪检测其表面标记CD34,CD44和CD90。②10只正常大鼠作为正常对照组。32只大鼠腹腔注射阿霉素(15mg/kg)建立心肌病心力衰竭模型,然后随机分为细胞移植组16只,以5-溴-2’脱氧尿苷标记第2代骨髓间充质干细胞,经股静脉移植;移植对照组16只,移植等量DMEM培养基。③细胞移植后4周,多导生理记录仪测量3组大鼠的心功能,心脏组织切片行免疫组织化学染色,观察移植细胞在受体大鼠体内的存活情况。结果:实验中细胞移植组有4只大鼠,移植对照组有7只死亡,进入结果分析31只。①体外培养的第2代骨髓间充质干细胞均一表达CD44和CD90,不表达CD34。②心功能测定显示:细胞移植组大鼠的左室收缩压、左室内压最大上升速率和下降速率均比移植对照组明显升高[(101±7)比(76±6)mmHg,(4875±309)比(3644±380)mmHg/s,(5075±336),(3544±354)mmHg/s,P<0.05],而左室舒张末压明显降低[(15±1),(20±2)mmHg/s,P<0.05];移植对照组左室收缩压、左室内压最大上升速率和下降速率均比正常对照组明显下降(P<0.05),而左室舒张末压明显升高(P<0.05)。③免疫组织化学显示:细胞移植组大鼠的心脏组织切片上有5-溴-2’脱氧尿苷标记的移植细胞存活,并且表达心肌特异性抗原β-肌球蛋白重链;细胞移植组室间隔和左心室处血管数量均明显多于移植对照组[(9.0±1.3)比(6.5±1.9)血管数/高倍镜,(9.9±1.5)比(7.8±1.4)血管数/高倍镜,P<0.05]。结论:①经静脉移植骨髓间充质干细胞可有效改善阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能。②骨髓间充质干细胞可归巢至心脏,分化为心肌样细胞。     

氟伐他汀对转化生长因子β_1诱导的系膜细胞结缔组织生长因子和Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨氟伐他汀对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的影响。方法选择对数生长期的MCs,分成对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1加不同浓度氟伐他汀(Flu)诱导组,采用MTT法检测MCs增殖,RT-PCR和Westernblot方法检测MCsCTGF表达,ELISA法检测ColⅣ表达。结果5μg.L-1TGF-β1能明显促进MCs的增殖及CTGF和ColⅣ的表达。Flu可呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导下的系膜细胞增殖和CTGF及ColⅣ的表达:1μmol.L-1Flu即能明显抑制MCs的增殖及CTGFmRNA和ColⅣ蛋白的表达,10μmol.L-1Flu即能明显抑制MCsCTGF蛋白的表达。同时,还观察到外源性CTGF呈浓度依赖性地促进MCsColⅣ的表达,2.5μg.L-1CTGF即可明显促进ColⅣ蛋白的表达。结论氟伐他汀可抑制MCs增殖和CTGF介导的ColⅣ表达。     

SHR,WKY大鼠心,肾及胸主动脉ACE,ACE2表达的差异与高血压的关系

目的观察SHR,WKY大鼠心,肾,胸主动脉及体外培养的VSMCs中的ACE,ACE2表达的差异,探讨ACE与ACE2在自发性高血压大鼠高血压形成的机制。方法选取6个月的雄性自发性高血压大鼠SHR(Spontanous Hypertensive Rat,SHR)及与之配对的正常大鼠WKY。尾袖法测定大鼠血压,断头取血,称量全心与左心重量,计算心体比与左室重指数。免疫组化法检测肾脏ACE,ACE2的表达。放免法测定血浆中AII水平。RT-PCR法比较SHR与WKY大鼠心,肾,胸主动及体外培养VSMC细胞ACE、ACE2 mRNA的表达水平。结果(1)6月龄SHR大鼠血压显著高于WKY(196.42±18.90,116.35±14.48,P<0.05),而WKY大鼠心体比及左室指数明显低于SHR(2.84±0.28,3.79±0.41,P<0.05;2.17±0.18,2.95±0.28,P<0.05),SHR大鼠血浆中AII水平明显增高(1675.35±305.16,694.38±112.56,P<0.05)。(2)肾脏ACE2免疫染色SHR明显低WKY(0.054±0.013,0.205±0.043,P<0.05)。与WKY相比,SHR心,肾,胸主动脉ACE2 mRNA表达水平分别减少49.84%4、0.67%3、6.17%,,而ACEmRNA表达水平分别增加33.66%、29.83%、42.16%。在体外培养的胸主动脉平滑肌细胞(thorax aorta vascularsmooth mulscle cell,TAVSMC)SHR大鼠ACE mRNA表达水平明显高于WKY,ACE2 mRNA的表达水平显著降低。结论(1)ACE与ACE2表达失调可能是高血压形成的重要原因。(2)ACE与ACE2表达差异可能大鼠遗传背景有关。     

携带肾上腺髓质素基因腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达

背景：肾上腺髓质素具有促进骨髓间充质干细胞增殖、生长及减少凋亡等作用。 目的：观察携带肾上腺髓质素基因的腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达。 方法：培养293A细胞,并扩增携带肾上腺髓质素基因的腺病毒(Ad-ADM),实验分为对照组、空载体组和Ad-ADM转染组,3组分别于细胞长满至50%~60%时加入等量的无血清L-DMEM、Ad-lacZ和Ad-ADM,噬斑法检测扩增后腺病毒的滴度;贴壁法体外分离、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞;Ad-GFP体外感染骨髓间充质干细胞后检测转染效率;RT-PCR检测Ad-ADM转染后肾上腺髓质素mRNA的表达。 结果与结论：病毒扩增后噬斑试验测定Ad-ADM的病毒滴度为1.1×109 pfu/mL。Ad-ADM感染骨髓间充质干细胞后,肾上腺髓质素mRNA的表达明显增加,对照组、空载体组未见ADM mRNA表达;量化结果表明其表达量从第1天开始逐渐增加,第7天达高峰,在11 d时仍可检测其表达。提示腺病毒对骨髓间充质干细胞有较高的转染效率。感染Ad-ADM后,骨髓间充质干细胞可有效表达肾上腺髓质素。     

肾上腺髓质素基因转染增强骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠心室重构及心功能的影响

目的： 研究肾上腺髓质素（ADM）基因转染增强骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对心肌梗死大鼠心室重构及心功能的治疗作用。方法：贴壁法体外分离、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞,用X-gal染色测含ADM基因的重组腺病毒(Ad-ADM)对MSCs感染率,ELISA检测Ad-ADM转染后细胞上清液ADM的含量。通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型;以DAPI标记细胞通过心肌局部注射移植MSCs;采用生理记录仪测量大鼠的心功能,荧光显微镜观察移植细胞在心脏存活及分布,免疫组化检测ADM在心肌梗死区的表达及心梗区血管密度;天狼猩红染色检测胶原含量,用偏振光显微镜分析Ⅰ/Ⅲ型胶原比率。结果：重组腺病毒对MSCs的转染率与病毒感染复数（MOI）具有量效关系,MOI为150时细胞的感染率达95.4%;转染Ad-ADM后,MSCs可有效表达ADM,7 d时达到表达高峰,与对照组相比明显增加［(26.53±1.42 vs 1.34±0.08) ng/L,P＜0.05］,15 d后与空白对照组无差别［（2.20±1.44 vs 1.52±0.33) ng/L,P＞0.05］;在受体大鼠的心脏切片上有DAPI标记的移植细胞的存活;与对照组及其它组相比,ADM基因修饰的MSCs组心肌梗死区ADM的表达增加;与对照组比较,单纯细胞移植组心梗区新生血管密度增高（P＜0.01）;而与单纯MSCs移植组及单纯Ad-ADM注射组比较,ADM基因修饰的MSCs移植组梗死区血管密度增高更明显（P＜0.05）;单纯MSCs移植组能降低梗死区Ⅰ/Ⅲ型胶原比率（P＜0.01）,并能改善左室功能;与单纯细胞组比较ADM基因修饰的MSCs移植组梗死区Ⅰ/Ⅲ型胶原比率降低更明显（P＜0.05）,而左室功能改善更多。结论：ADM转染的MSCs移植可能通过局部ADM表达的增加,增强MSCs移植的血管新生作用及降低梗死区Ⅰ/Ⅲ型胶原比率,从而增强单纯MSCs细胞移植改善心功能的作用。     

谷氨酰胺在胃肠道术后患者全胃肠外营养中的疗效评价

目的：探讨在胃肠术后予加入谷氨酰胺的TPN的疗效。方法：32例胃肠道手术患者随即均分为对照组和Gin组,对两组病人胃肠功能恢复情况、术前术后蛋白质合成、氮平衡及等情况进行比较。结果：Gin组患者的并发症发生率及住院时间均较对照组低,并有显著性差异（P〈0．05）;同时,肠功能恢复时间Gin组（58．7±8．7）h短于对照组（60．3±6．7）h,但两组间差异无统计学意义;两组术后12d血清白蛋白、前白蛋白均有回升,但对照TPN组均明显低于Gln组,差异有统计学意义（P〈0．05）;术后第8dGin组氮平衡的改善明显优对照组（P〈0．05）。结论：加用谷氨酰胺的TPN的疗效是有利于改善胃肠道术后患者营养状况和促进胃肠功能的恢复。     

雷洛昔芬对去卵巢大鼠纤维蛋白原的影响

目的探讨选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬对去卵巢大鼠血浆纤维蛋白原的影响。方法40只12周龄雌性SD大鼠随机分为5组，每组8只。（1）去卵巢组（Ovariectomy，OVX）：切除大鼠双侧卵巢建立绝经后模型，给予等量生理盐水灌胃；（2）假手术对照组（Control，C）：只打开腹腔未切除双侧卵巢，给予等量生理盐水灌胃；（3）雌激素组（Ovariectomy＋Estrogen，E）：切除大鼠双侧卵巢，给予雌激素（倍美力，1mg／kg·d）灌胃治疗；（4）小剂量雷洛昔芬（Ovariectomy＋Raloxifene，Rs）：切除大鼠双侧卵巢，给予雷洛昔芬（易维特，1mg／kg·d）灌胃治疗；（5）大剂量雷洛昔芬组（Ovariectomy＋Raloxifene，Rl）：切除大鼠双侧卵巢，给予雷洛昔芬（易维特，3mg／（kg·d）灌胃治疗。治疗3个月后，测量治疗后各组血浆纤维蛋白原的变化。结果去卵巢组血清雌二醇水平明显下降，显著低于假手术对照组。雌激素或雷洛昔芬治疗后血清雌二醇水平都上升，接近假手术对照组（OVX：36．69±6．91比C：248．32±32．51比E：240．89±29．44比Rs：239．56±25．73比Rl：243．48±27．62pg／mL,P〈0．01）。去卵巢组的血浆纤维蛋白原浓度显著高于假手术对照组和雷洛昔芬组。雌激素组纤维蛋白原的浓度也升高，与假手术对照组比较有统计学意义。雷洛昔芬治疗后纤维蛋白原下降，低于去卵巢组和雌激素组（OVX：4．25±0．43比C：1．76±0．20比E：3．46±0．31比Rs：1．63±0．19比Rl：1．41±0．16g／L，P〈0．05）。结论雌性SD大鼠双侧卵巢切除后，纤维蛋白原水平升高。雌激素治疗不能降低纤维蛋白原水平反而升高其水平，而雷洛昔芬能降低纤维蛋白原水平。     

大鼠肺小动脉重构发生在肺动脉压增高之前

目的 探讨野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉重构与肺动脉压力增高的关系.方法 雄性SD大鼠32只,体质量200～230 g,随机均分为肺动脉高压(PAH)组和对照组.PAH组一次性腹腔注射MCT 40 mg/kg,对照组一次性腹腔注射相同体积的生理盐水.于注射MCT后2周及4周,分别从以上两组大鼠中随机选择8只,测定肺动脉平均压(MPAP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用ipp6.0图像分析软件分析肺组织切片,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%).结果 腹腔注射MCT 2周后MPAP和RVHI在对照组与PAH间差异无统计学意义[(23.6±2.1)vs(26.0±2.8)mm Hg,(23.4±4.6)vs(24.7±3.9)%,P均＞0.05],但是与对照组相比,PAH的WT%、WA%均明显增高[WT:(39.1±2.8)vs(50.8±3.1)%,WA:(51.2±3.0)vs(74.5±2.9)%,P均＜0.05];4周后与对照组相比,PAH的MPAP、RVHI、WT%、WA%都明显增高[MPAP:(24.0±3.0)vs(35.7±3.1)mm Hg,RVHI:(24.2±3.7)vs(44.6±4.3)%,P均＜0.01;WT:(40.1±3.1)vs(57.5±2.0)%,WA:(51.1±2.0)vs(78.3±2.0)%,P均＜0.05].结论 MCT所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高.     

复方丹参滴丸对自发性高血压大鼠血管重构的影响

目的探讨复方丹参滴丸（DSP）对自发性高血压大鼠（SHR）血管重构的影响。方法将32只8周龄雄性SHR随机分为4组,DSP小剂量组、DSP大剂量组、福辛普利组、SHRc组。另选8周龄雄性Wistar大鼠为正常对照组。5组分别用灌胃法给药或给蒸馏水8周,测定大鼠尾动脉收缩压、胸主动脉与肠系膜动脉中层壁厚（M）、管腔内径（L）及二者的比值（M／L）。结果与Wistar组比,SHRc组主动脉中层壁[Wistar组：（85±10）μm比SHRc组（120±7）μm]与肠系膜动脉中层壁[Wistar组：（61±8）μm比SHR模型组（84±8）μm]显著增厚（P〈0．05）,中层壁厚与管腔内径比值（M／L）也显著增大（P〈0．05）;与SHRc组比,DSP大剂量组[肠系膜动脉M：（65±5）μm;主动脉M：（94±7）μm]、小剂量组[肠系膜动脉M：（70±3）μm;主动脉M：（97±9）μm]与福辛普利组[肠系膜动脉M：（64±7）μm;主动脉M：（93±6）μm]SHR主动脉与肠系膜动脉的M及M／L均明显减轻（P〈0．05）,而各治疗组间无统计学意义（P〉0．05）。结论复方丹参滴丸可抑制SHR的血管壁重构。     

NPM1 A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响

  目的  观察核仁磷酸蛋白（nucleophosmin 1,NPM1）A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响。  方法  腺病毒载体（Ad5－NPM1）转染髓系白血病K562细胞建立过表达NPM1蛋白细胞株;应用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液含量,Western blot法检测K562细胞NPM1、AKT和P-AKT蛋白表达,MTT法检测细胞增殖。  结果  K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1转染复数[（multiplicity of infection,MOI）:30-200]依赖性增加,与空载组（Ad5-vector-100）相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞及细胞上清液NPM1蛋白水平均显著增高（P < 0.01）。TGF-β1（10 ng/mL）能够诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平无明显影响。TGF-β1（10 ng/mL）+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于TGF-β1处理组（P < 0.05）,各组总AKT水平无显著差别（P>0.05）。与空白对照组（CT）相比,TGF-β1（10 ng/mL）处理可促进K562细胞增殖;但TGF-β1（10 ng/mL）+Ad5-NPM1-100组细胞的增殖水平明显高于TGF-β1处理组（P < 0.01）。  结论  NPM1可促进TGF-β1诱导的K562细胞增殖。NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞可能与AKT磷酸化有关。