局部Ang Ⅱ水平与ERK的活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平与细胞外信号调节激酶（ERK）活化在人门静脉高压症（PHT）脾静脉血管病变中的作用及可能机制。方法选取乙型肝炎感染后肝硬化PHT患者26例为PHT组;选取因外伤性脾破裂行脾切除术患者10例为对照组。放射免疫分析法（RIA）检测脾静脉中AngⅡ水平;免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测脾静脉中ERK的表达。结果PHT组脾静脉组织AngⅡ水平（248.91±48.31）ng/L,显著高于对照组（143.35±36.45）ng/L（P〈0.01）。蛋白免疫印迹/免疫组织化学染色均显示PHT组脾静脉ERK表达较对照组明显增加。结论PHT时脾静脉组织AngⅡ水平升高,ERK表达增加。局部AngⅡ升高及ERK信号传导通路的激活可能与门静脉高压症的形成和维持有关。     

SHR主动脉平滑肌细胞异常增殖和自身AII、ACE的关系(论著摘要)

自发性高血压大鼠（SHR）循环肾素一血管紧张素系统（RAS）处于正常或低于正常的状态，但主动脉平滑肌细胞（ASMC）RAS却处于激活状态，表现为组织ACE活性和AII含量显著增高，实验表明：血管局部AII、ACE水平比血压、循环AII、ACE水平与血管肥厚更具相关性。为探讨SHRASMC异常增殖和自身AII、ACE活性的关系，本实验通过体外培养20周龄SHR和WKYASMC，并在培养基中加人一定浓度的卡托普利（Cap）或saralasin（Sar）干预4周，观察ASMCRAS和增殖速度的改变。用3H－TdR掺人和倍增时间（DT）反映ASMC的增殖能力，放…     

维生素D通过抑制Pin1介导线粒体氧化应激拮抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:观察维生素D对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的作用,对脯氨酰异构酶1(Pin1)蛋白表达和活性、p66Shc线粒体转位及活性氧簇(ROS)生成的影响,以及维生素D受体(VDR)在这一过程的作用。方法:以33 mmol/L葡萄糖干预建立高糖内皮细胞损伤模型,分别接受维生素D(10~(-8)~10~(-6)mol/L)和Pin1抑制剂胡桃醌(10~(-7)mol/L)共孵育;流式细胞术和TUNEL染色法检测HUVECs的凋亡率;流式细胞术和荧光显微术检测细胞内的ROS水平;Western blot法检测HUVECs中Pin1、p66Shc、p-p66Shc、p66Shc胞浆/线粒体比值及caspase-3的蛋白水平;多肽酶解法测定HUVECs裂解液中Pin1的活性;通过转染siRNA沉默VDR的表达,观察VDR是否介导Pin1蛋白及活性改变。结果:维生素D(10~(-8)~10~(-6)mol/L)抑制高糖诱导的HUVECs凋亡,并抑制高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加。维生素D抑制高糖诱导的HUVECs中p66Shc磷酸化、p66Shc线粒体转位、ROS生成及caspase-3蛋白表达(P0.05)。通过转染siRNA沉默VDR表达,可削弱维生素D对高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加的抑制作用。结论:维生素D通过激动VDR,抑制高糖环境下Pin1蛋白表达和活性增加,抑制p66Shc的线粒体转位,减少ROS生成,从而减轻血管内皮细胞凋亡。     

原癌基因c-myc核酶表达载体抑制血管平滑肌细胞的c-myc表达

目的构建原癌基因c-myc核酶表达载体以抑制心血管系统细胞异常增殖。方法采用DNASIS软件对大鼠c-mycmRNA进行二级结构和最低自由能分析,确定第4600位核苷酸作为核酶的切割位点,设计并合成c-myc核酶。通过体外切割实验证明该核酶的有效性。进一步构建成c-myc核酶表达载体,转染同步化血管平滑肌细胞(VSMC)以检测其对原癌基因c-myc表达的影响。结果体外切割实验显示该核酶能有效地将85bp的模板切割成60和25bp的二个片段。所构建载体经酶切法和基因测序法证明其序列的正确性。转染VSMC后能有效抑制血管紧张素Ⅱ诱导的c-myc的表达。结论c-myc核酶表达载体能有效抑制VSMC的c-myc过度表达,适合用于动脉增殖性疾病的基因治疗。     

通心络治疗对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的：观察通心络对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响。方法：30只12周龄雄性SHR大鼠，随机分成大剂量通心络组、小剂量通心络组、SHR空白对照组3组，每组10只；另取10只同龄雄性正常血压WKY大鼠作为对照组。给药12周，天狼星红染色法使肢原特殊染色，计算机图像分析测量心肌切片的肢原容积分数和心肌小动脉周围肢原面积与小动脉面积比表示心肌纤维化程度；放免法(RIA)测定血浆AngⅡ的浓度：结果：与SHR组相比，大、小剂量通心络组均能在一定程度上抑制S服血压升高(P＜0．05)。通心络大、小剂量组治疗均能在一定程度上改善SHR大鼠左心室肥厚(P＜0．05)，并使心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原减少，同时血浆AngⅡ浓度较SHR组下降，其中大剂量组各指标均较SHR有统计学意义(P＜0．05)。结论：通心络对SHR大鼠的心肌纤维化有显著的抑制作用。     

阿魏酸钠抑制纤维粘连蛋白和纤维蛋白原诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移和粘附

目的：探讨阿魏酸钠（SF）对纤维粘连蛋白(FN)和纤维蛋白原(Fg)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和粘附的影响。 方法： VSMCs源于8周龄自发性高血压大鼠(SHR)的胸主动脉，组织块外生法体外培养VSMCs，在96孔聚苯乙烯平底培养板上进行细胞粘附实验；采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Fura-2/AM法测定细胞内游离钙离子(［Ca2+］i)浓度。 结果： (1) FN和Fg可诱导VSMCs的粘附，SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞粘附，最大抑制率分别为67.12％和70.23％(P<0.01)。(2) FN和Fg可诱导VSMCs迁移，作用峰值浓度分别为40-60 mg/L和1-5 g/L。SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移，10-3mol/L SF对FN和Fg诱导的细胞迁移的抑制率达69.79%和87.06％。(3)Fg和FN显著促进［Ca2+］i升高(P<0.05)，SF明显抑制Fg和FN诱发的［Ca2+］i升高，峰抑制率分别为74.85％和71.57％。 结论： Fg和FN可诱导VSMCs粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，SF可直接抑制VSMCs的粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，抑制［Ca2+］i 浓度升高可能是它抑制上述物质诱导的VSMCs迁移的机制之一。     

阿托伐他汀通过抑制PKC的激活对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应

目的:探讨阿托伐他汀对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)产生氧化应激的影响及其作用机制。方法:体外培养HUVECs,以25 mmol/L葡萄糖干预,模拟糖尿病患者体内环境,通过流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞内的活性氧(ROS)水平,采用Lucigenin分析方法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹杂交的方法检测 NADPH氧化酶亚基Nox4和Nox2/gp91^phox的表达水平,用免疫印迹杂交方法检测蛋白激酶C(PKC)蛋白的磷酸化水平。结果:(1)在高糖环境(终浓度为25 mmol/L)下,HUVECs内ROS生成显著增加,NADPH氧化酶的活性显著增强,NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基的mRNA和蛋白表达水平显著上调;(2)阿托伐他汀可显著抑制高糖诱导的ROS 生成、NADPH氧化酶活性的增强及NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基表达水平的增加幅度,且具有浓度依赖性;(3)PKC抑制剂(PKC inhibitor peptide, 20 μmol/L)可显著抑制高糖环境下ROS的生成、NADPH氧化酶活性的增强及NADPH 氧化酶Nox4和Nox2/gp91^phox亚基表达水平的增加幅度;(4)阿托伐他汀可抑制高糖诱导的PKC蛋白的磷酸化。结论:PKC的活化参与了高糖诱导的HUVECs产生的氧化应激反应。阿托伐他汀通过抑制PKC蛋白的活化对抗高糖诱导的内皮细胞产生的氧化应激反应。     

携带肾上腺髓质素基因腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达

背景：肾上腺髓质素具有促进骨髓间充质干细胞增殖、生长及减少凋亡等作用。目的：观察携带肾上腺髓质素基因的腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达。方法：培养293A细胞,并扩增携带肾上腺髓质素基因的腺病毒（Ad-ADM）,实验分为对照组、空载体组和Ad-ADM转染组,3组分别于细胞长满至50%～60%时加入等量的无血清L-DMEM、Ad-lacZ和Ad-ADM,噬斑法检测扩增后腺病毒的滴度;贴壁法体外分离、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞;Ad-GFP体外感染骨髓间充质干细胞后检测转染效率;RT-PCR检测Ad-ADM转染后肾上腺髓质素mRNA的表达。结果与结论：病毒扩增后噬斑试验测定Ad-ADM的病毒滴度为1.1×109pfu/mL。Ad-ADM感染骨髓间充质干细胞后,肾上腺髓质素mRNA的表达明显增加,对照组、空载体组未见ADMmRNA表达;量化结果表明其表达量从第1天开始逐渐增加,第7天达高峰,在11d时仍可检测其表达。提示腺病毒对骨髓间充质干细胞有较高的转染效率。感染Ad-ADM后,骨髓间充质干细胞可有效表达肾上腺髓质素。     

罗格列酮改善肾大部切除大鼠左心室肥厚

目的观察罗格列酮对肾大部切除大鼠左心室肥厚的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、肾大部切除组、小剂量罗格列酮组[肾大部切除加5 mg/(kg.d)罗格列酮治疗]和大剂量罗格列酮组[肾大部切除加15mg/(kg.d)罗格列酮治疗]。8周后观察大鼠血压、尿蛋白、血尿素氮、血肌酐,并用放射免疫法测定血清血管紧张素Ⅱ、内皮素,测量大鼠左心室质量/体重,天狼星红染色测量心肌胶原纤维含量。结果罗格列酮能降低肾大部切除大鼠血压(P<0.01)、尿蛋白、血尿素氮和血肌酐(P<0.01或0.05)。与肾大部切除组比较,罗格列酮治疗组血清血管紧张素Ⅱ、内皮素均明显降低,差异有显著性(P<0.05)。与假手术组相比,肾大部切除组大鼠左心室质量/体重明显升高(P<0.05),罗格列酮治疗组大鼠左心室质量/体重较肾大部切除组有所降低,以大剂量罗格列酮组为明显(P<0.01)。肾大部切除组可见心肌组织大量胶原纤维沉积,用药后病变减轻,其中大剂量罗格列酮组心肌组织胶原纤维沉积明显减少(P<0.01)。结论罗格列酮可降低肾大部切除大鼠的血压;降低尿蛋白和改善肾功能;并可能通过降低血清血管紧张素Ⅱ、内皮素水平改善大鼠左心室肥厚。     

浆细胞膜糖蛋白1基因多态性与2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系

目的 探讨浆细胞膜糖蛋白1(PC-1)基因K121Q多态性与2型糖尿病及糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测糖尿病(DM组,n=80)及其合并冠心病患者(DC组,n=67)与健康对照组(n=83)的PC-1基因K121Q的多...