水孔蛋白2（AQP2）在SHR和WKY大鼠肾脏的不同表达

目的　本研究旨在探讨SHR和WKY大鼠肾脏中 ,AQP2mRNA是否存在差异表达及其和精氨酸加压素 (AVP)的关系。方法　成年SHR和WKY大鼠各 9只 ,12周龄 ,体重 2 0 0～ 3 0 0g。断头取血 ,放免法测定血浆AVP含量。取肾脏近髓组织 10 0mg ,RT PCR法检测大鼠肾脏AQP2mRNA的表达量 ,数据以 x±s表示。结果　SHR肾脏AQP2mRNA表达水平显著高于WKY( 0 80 1± 0 0 8vs 0 5 71± 0 0 6,P <0 0 5 ) ,SHR血浆中AVP的浓度显著高于WKY( 90± 17 83vs60 82± 12 5 9) pg/mL。结论　SHR肾脏AQP2mRNA表达量上调 ,可能在SHR高血压的发生发展中发挥着一定的作用 ,AVP可能介导了AQP2mRNA表达     

阿托伐他汀通过RXRα介导的抗氧化应激效应抑制高脂喂养糖尿病ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的形成

目的:观察阿托伐他汀(Atorv)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病高脂喂养载脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响,探讨阿托伐他汀在糖尿病合并高脂饮食条件下对抗动脉粥样硬化的机制。方法:C57小鼠8只作为对照,34只高脂喂养的ApoE-/-小鼠随机分为3组:ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组和STZ-ApoE-/-+Atorv组。STZ腹腔注射建立糖尿病动物模型,测定小鼠空腹血糖、血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉斑块面积;免疫杂交检测主动脉及细胞内NADPH氧化酶亚基gp91phox蛋白水平;Fenton反应Griess显色法测定血清及胸主动脉匀浆上清液活性氧(ROS)水平。I型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),流式细胞术检测内皮细胞内ROS的水平,光泽精分析法测定NADPH氧化酶活性。采用干扰RNA和质粒转染的方法评价类视黄醇X受体α(RXRα)在Atorv抑制氧化应激中的作用。结果:(1)与C57组相比,ApoE-/-组小鼠胸主动脉斑块面积显著增加[(215.88±34.19)μm2vs 0μm2,P0.01],2组间空腹血糖水平无显著差异,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox表达水平显著缩小(P0.05);(2)与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组胸主动脉斑块面积进一步增加[(314.13±35.72)μm2vs(215.88±34.19)μm2,P0.05],血糖水平升高,血清TC、LDL-C、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平进一步增加(P0.05);(3)与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+Atorv组胸主动脉粥样斑块面积显著降低[(217.47±24.56)μm2vs(314.13±35.72)μm2,P0.05],血糖、血清TG、HDL、TC、和LDL-C无显著变化,血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平亦显著降低(P0.05);(4)高糖(25 mmol/L)干预后,HUVECs内ROS含量、gp91phox蛋白水平及NADPH氧化酶活性明显增加(P0.05),阿托伐他汀(10-8~10-6mol/L)显著降低高糖环境下HUVECs胞内ROS含量、gp91phox表达及NADPH氧化酶活性,且具有浓度依赖性;(5)将RXRαsiRNA转染至HUVECs之后,阿托伐他汀(10-6mol/L)对高糖环境下ROS生成及NADPH氧化酶活性的抑制效应显著减弱,RXRα质粒转染使RXRα过表达后,阿托伐他汀(10-6mol/L)抑制ROS生成及NADPH氧化酶活性的作用明显增强(P0.05)。结论:阿托伐他汀通过抑制高糖环境下机体的氧化应激反应对抗动脉粥样硬化;核受体RXRα介导阿托伐他汀的抗氧化应激效应。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭

目的 探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响.方法 无菌条件下取8周龄F344大鼠的股骨和胫骨,获得骨髓间充质干细胞(MSCs),在体外纯化、扩增后 ,用5-溴-2'脱氧尿苷(BrdU)进行标记,然后注射到心力衰竭模型细胞移植组和对照组大鼠的心肌组织内,细胞移植后4周,采用生理记录仪测量3组大鼠的心功能 ,处死动物,心脏切片行免疫组化了解移植细胞在受体心脏的存活情况.结果 细胞移植后4周,细胞移植组大鼠死亡率为6.2%,明显低于假细胞移植组12.5%(P<0.01);在受体大鼠的心脏切片上有BrdU标记的移植细胞存活.心功能测定显示:与对照组相比,细胞移植组最大左室收缩末压(LVSP)、心率(HR)、左室内压最大(最小)变化速率(LV±dp/dtmax)均明显下降(P<0.01),而左室舒张末压(LVDP)明显升高(P<0.01);与对照组相比,细胞移植组大鼠的LVSP、HR、LV±dp/dtmax均有明显升高(P<0.01),而LVDP明显降低(P<0.01);与假移植组相比,细胞移植组大鼠的HR、 LV±dp/dtmax仍有明显下降(P<0.01),而LVDP明显升高(P<0.01).结论 MSCs移植可有效改善阿霉素诱导的扩张型心力衰竭大鼠的心功能,减少心力衰竭大鼠的死亡率.     

局部血管紧张素Ⅱ水平与核因子-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngII)与核因子(NF)-κB、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路活化在人门静脉高压症(PHT)脾静脉血管病变中的作用及其机制.方法 PHT组为乙肝后肝硬化门静脉高压症患者26例;对照组选取因外伤性脾破裂行脾切除术患者10例.放免法(RIA)检测脾静脉中AngII水平;免疫组织化学法测定脾静脉中NF-κB、Phospho-p38蛋白的表达.蛋白免疫印迹法检测脾静脉及体外培养的脾静脉血管平滑肌细胞的NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结果 PHT组脾静脉组织AngII为(248.91±48.31)ng/L,显著高于对照组AngII为(143.35±36.45)ng/L(P<0.01).免疫组织化学和蛋白免疫印迹均显示PHT组脾静脉NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达较对照组明显增强.体外培养脾静脉血管平滑肌细胞(VSMC),AngII在1×10-8～1×10-6mol/L浓度范围内,AngII以浓度依赖性方式增加人脾静脉VSMC中NF-κB 、Phospho-p38蛋白的表达.结论 门静脉高压症时脾静脉组织AngII水平升高,NF-κB、Phospho-p38蛋白表达增加.AngII能激活脾静脉血管平滑肌细胞NF-κB、p38信号传导通路.门静脉高压症时AngII可能通过激活P38和NF-κB信号对传导通路门静脉高压症的形成和维持可能起重要作用.     

RXR/VDR激动剂对糖尿病ApoE-/-小鼠胸主动脉硬化及NF-κB表达的调控

 目的：探讨视黄醇X受体（RXR）激动剂贝沙罗汀（Bex）和维生素D受体（VDR）激动剂骨化三醇（Cal）对链脲佐菌素（STZ）诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠胸主动脉硬化及NF-κB表达的影响。方法: 动物分6组：C57组、ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-+Bex（10 mg·kg-1·d-1）组、STZ-ApoE-/-+Cal（10 μg/kg）组和STZ-ApoE-/-+Bex+Cal组。STZ腹腔注射复制糖尿病动物模型,Western blotting法及免疫组化法测定小鼠胸主动脉中NF-κB的表达,HE染色观察小鼠胸主动脉斑块的面积。结果：与C57组相比,ApoE-/-组的血糖水平无明显差别,血清总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白（LDL）水平升高（P<005）;STZ-ApoE-/-组的血糖及血清TC和LDL水平较ApoE-/-组明显增高（P<005）,Bex和Cal对小鼠的血糖及血清TC、LDL无影响。与C57组相比,ApoE-/-和STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉的NF-κB蛋白表达显著增加;与STZ-ApoE-/-组相比,Bex和Cal均显著降低NF-κB的水平（P<0.05）,联合用药降低更明显（P<001）。与STZ-ApoE-/-组相比,Bex和Cal可缩小STZ-ApoE-/-小鼠的胸主动脉斑块面积（均P<005）;与Bex组相比,联合组斑块面积缩小的程度有显著差异（P<005）。结论：Bex和Cal可降低STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉粥样硬化斑块面积及NF-κB的表达,联合有协同作用,由此推论Bex和Cal的抗动脉粥样硬化机制可能与其对NF-κB的调节有关。     

人激肽释放酶基因转移对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(human tissue kallikrein 1,hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCSHR)增殖的影响及其机制.方法 自行构建重组腺病毒载体,携带目的 基因hKLK1和标志基因强绿色荧光蛋白.细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTF)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期.蛋白免疫印迹法测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达.RT-PCR法测定缓激肽B1受体、B2受体的mRNA表达.结果 (1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20～100 M0I)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100 MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5天时达高峰,抑制率为35.2%.(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P＜0.001).(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达.(4)PDGF-BB诱导VSMCSHR的缓激肽B2受体mRNA表达明显增加(P＜0.001),且Hoe140可明显降低其表达(P＜0.01).结论 hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,可上调缓激肽B2受体和细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达.     

人组织激肽释放酶基因转移对球囊拉伤后大鼠颈总动脉内膜的影响

目的 探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶1(Ad-hKLK1)基因转移对球囊拉伤后的自发性高血压大鼠(SHR)颈动脉新生内膜增生的影响及其机制.方法 取SHR,雄性,采用球囊拉伤法建立大鼠颈动脉再狭窄模型,将存活动物随机分为4组,即假手术组(n=6)、单纯拉伤组(n=8)、拉伤+注射对照病毒组(n=8)、拉伤+注射Ad-hKLK1病毒组(n=8).4周后处死大鼠,测定各实验组再狭窄动脉内膜形态学相关指标.RT-PCR法检测缓激肽受体(B1R和B2R)表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期素激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达.结果 拉伤+Ad-hKLK1组大鼠颈总动脉的壁腔面积比W/L明显低于单纯拉伤组(1.056±0.149比1.641±0.194,P<0.001),抑制率达35.6%,内膜/中膜面积比值显著小于单纯拉伤组(0.77±0.09比1.26±0.051,P<0.01),抑制率达38.8%(P<0.001).拉伤+Ad-hKLK1组的周期抑制蛋白p27Kip1和p21Cip1表达明显高于单纯拉伤组(0.55±0.05比0.31±0.06,P<0.001和0.47±0.06比0.26±0.05,P<0.001).球囊拉伤后颈动脉的缓激肽B2R的mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),而各组间的缓激肽B1R的mRNA表达差异无统计学意义.结论 hKLK1基因转移可减轻SHR颈动脉球囊损伤后的新生血管内膜形成,注射外源性人组织激肽释放酶基因可上调缓激肽B2R mRNA表达和p27Kip1、p21Cip1的蛋白表达.     

罗格列酮对肾大部切除大鼠残肾细胞外基质的影响及其机制

目的：观察罗格列酮对肾大部切除大鼠残肾的细胞外基质（ECM）的影响并探讨其可能的机制。方法：将大鼠随机分为4组，每组8只：假手术组（SHAM组）、肾大部切除组（NX组）、肾大部切除加小剂量罗格列酮治疗组（XL组，罗格列酮5mg.kg^-1·d^-1）和肾大部切除加大剂量罗格列酮治疗组（DL组，罗格列酮15mg·kg^-1·d^-1）。8周后观察大鼠尿蛋白、血BUN、Scr和肾脏病理改变，用免疫组化检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在肾组织中的表达。用天狼星红染色半定量法检测肾脏胶原纤维含量。用RT～PCR的方法测定肾组织中纤连蛋白（FN）的表达。结果：（1）罗格列酮能降低大鼠24h尿蛋白定量、血BUN、Scr，与NX组比较有统计学差异（P〈0.01，P〈0．05）。（2）NX组可见肾小球硬化，ECM增生，肾组织大量胶原纤维沉积。用药后病变减轻，其中大剂量罗格列酮组肾小球MMP-2明显增多；肾小管、间质MMP-9明显减少；肾小球囊壁、肾小球基底膜及肾小管基底膜、血管周围胶原纤维沉积减少。（3）与SHAM组相比，NX组残肾组织FN mRNA的表达均明显升高（P〈0.05），XL组FN mRNA的表达较NX组有所降低，以大剂量XL组为明显（P〈0．01）。结论：罗格列酮可剂量依赖性地降低尿蛋白，改善肾功能肾脏病理损害；减少肾脏胶原纤维沉积和FN的表达；这可能与罗格列酮能抑制肾组织MMP-9表达和上调MMP-2表达有关。     

参芪扶正注射液对病毒性心肌炎小鼠SOD活性和MDA含量的影响

目的 观察参芪扶正注射液对病毒性心肌炎（VMC）小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量的影响,探讨参芪扶正注射液的抗氧化作用.方法 120只雄性BALB/c小鼠随机分为五组：空白组（A）、模型组（B）、病毒唑组（C）、参芪扶正注射液（参芪）小剂量组（D）、参芪大剂量组（E）.接种病毒、注射药物后,分别于治疗3 d、10 d、30 d采集血液,采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法检测血清SOD活性、MDA含量.结果 参芪扶正注射液能升高VMC小鼠的SOD活性,降低MDA含量（P＜0.05）,急性期具有量效依赖性.结论 参芪扶正注射液通过抗氧化作用治疗病毒性心肌炎小鼠,具有一定的疗效.     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径.方法体外培养心肌成纤维细胞(CFB),分别加入不同浓度Ang Ⅱ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein),测定细胞3H-TdR和3H-Leu掺入率.结果 Ang Ⅱ浓度依赖性促进CFB的3H-TdR和3H-Leu掺入率,洛沙坦可完全抑制该效应,Genistein部分抑制该效应.结论外源性AngⅡ通过CFB的AT1R 对该细胞产生增殖反应,作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导.