焦磷酸测序技术检测乙型肝炎病毒多个基因型耐药突变方法的建立及初步评价

目的建立焦磷酸测序(Pyrosequencing,PyroS)法检测HBV反转录酶基因区(rt区)与核苷(酸)类似物(NAs)耐药相关基因突变的检测方法。方法针对HBVDNArt区10个已知常见耐药突变位点的12种突变形式,分别构建野生型和突变型质粒作为标准品;设计通用PCR扩增引物和针对不同突变位点的焦磷酸测序引物,建立基于PyroS技术的HBV耐药突变检测方法。分别采用传统的双脱氧测序法和我们构建的PyroS法对接受/未接受NAs治疗的慢性乙型肝炎患者95份血清标本进行检测比较,并采用克隆测序法进行结果验证。结果 1.构建了HBVrt区常见耐药突变的野生株和变异株标准质粒,并建立了能对12种常见NAs耐药突变同时进行检测的PyroS方法;证实当标准质粒浓度≥1000拷贝/mL时,PyroS法对耐药突变位点的检出率、特异性和重复率均可达100%;2.对95份临床血清标本共检测了950个耐药相关氨基酸置换位点,PyroS法检测结果与直接测序法相符位点939个(符合率98.84%),PyroS法较直接测序法多检出8份标本中共11个变异位点,克隆测序法证实了焦磷酸测序法结果。结论成功建立了能同时定量检测10个已知NAs相关耐药基因突变的PyroS技术,可用于临床抗病毒疗效的监测、及早发现基因型耐药突变,并指导治疗方案的及时调整。     

调强放射治疗肺癌患者发生放射性肺损伤的危险因素分析

目的：探讨肺癌调强放疗后放射性肺损伤发生的危险因素。方法：选择我院放疗科收治的非小细胞肺癌患者190例。患者以调强放射治疗,部分患者联合化疗,对患者随访期间发生的放射性肺损伤的危险因素进行单因素和多因素分析。结果：本组190例患者,调强放疗后发生肺损伤40例,发生率为21.1%,肺损伤率随参数双侧肺MLD、患侧肺MLD、患侧肺V20的增加而增加（P〈0.05）。GTV≥125cm^2者肺损伤率明显高于GTV〈125cm2者（P〈0.05）。双侧肺MLD与患侧肺MLD、患侧肺V20间有显著相关性（P=0.00）;患侧肺MLD与患侧肺V20间有明显相关性（P=0.00）。Logistic多因素分析显示,患侧肺MLD是放射性肺损伤独立危险因素（P=0.00）。结论：全肺MLD、患肺MLD或患肺V20、GTV与放射性肺损伤有一定的关系,因此实施放疗计划前,应充分评估剂量体积参数,结合GTV等因素,以利于提高肿瘤控制率,减少肺损伤。     

烧伤并发抑郁患者对情绪图片的再认偏向研究

目的研究烧伤并发抑郁情绪患者对情绪图片的再认回忆。方法采用国际情绪刺激图片系统,采用3×3混合设计,分析烧伤并发抑郁患者对不同情绪图片再认偏向。结果与无抑郁患者及正常人相比,烧伤并发抑郁患者对正性图片的再认正确率明显降低,对所有图片的再认反应时均延长,其中对负性图片的反应时最长。结论烧伤并发抑郁患者再认加工过程中,对正性情绪图片的选择性过滤可能是抑郁发生的重要认知机制。     

临床护理工作中差错事故防范浅析

临床护理工作中差错事故防范浅析武警云南总队保山医院杨仙兰，李常芬，覃霞（保山６７８０００）医院临床工作中，护士２４ｈ工作在病人身旁，观察病情变化，照顾病人在医疗、生活、心理等方面的需要，保证病人在住院期间得到妥善的治疗和护理。其工作的重要性直接体现在...     

烧伤后并发抑郁患者下丘脑-垂体-肾上腺轴功能变化的研究

目的：探讨烧伤后抑郁患者的下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的变化。方法：采用Zung抑郁量表筛选烧伤患者，分为烧伤治疗期并发抑郁患者和治疗期不并发抑郁患者，烧伤康复期并发抑郁患者和康复期不并发抑郁患者。采用放射免疫方法测定血液中ACTH、CRF和皮质醇水平。结果：烧伤后无论是治疗期还是康复期并发抑郁症患者的HPA轴应激激素水平均显著高于不并发抑郁症患者。结论：烧伤后抑郁症患者HPA轴功能异常，测定HPA轴功能有助于抑郁并发症的早期诊断。     

儿童获得性再生障碍性贫血造血干细胞移植后淋巴组织增生性疾病的临床研究

目的 探讨儿童获得性再生障碍性贫血(AAA)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后淋巴组织增生性疾病(PTLD)的流行病学、临床特点、诊治及预后.方法 选择2002年7月至2012年5月于本中心完成allo-HSCT的71例AAA患儿作为研究对象.患儿常规行氟达拉滨+环磷酰胺+兔-抗人T淋巴细胞球蛋白±全身放疗为基础的预处理,移植后主要采用环孢霉素和甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病.对移植后外周血Epstein-Barr病毒(EBV)-DNA拷贝数持续升高的患儿,抢先予以利妥昔单抗治疗.确诊为PTLD后即予以免疫抑制剂减量或停药.结果 AAA患儿行allo-HSCT后PTLD的发生率为4.2％(3/71),临床均表现为抗感染治疗无效的反复发热伴扁桃体和淋巴结肿大.其中,2例患儿移植后予以监测外周血EBV-DNA拷贝数,在PTLD发生前均出现拷贝数的持续升高,且第1次予利妥昔单抗治疗后拷贝数仍持续上升.3例PTLD患儿中,2例治疗有效,随访至今仍无病生存;1例治疗效果不明显,于PTLD发生后34 d死亡.结论 PTLD是儿童AAA allo-HSCT后一种少见的并发症,病死率较高;动态监测患儿外周血EBV-DNA拷贝数对诊治有一定的指导作用;利妥昔单抗抢先治疗有利于降低PTLD的发生率及病死率.     

免疫抑制剂和移植物抗宿主病的防治

移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是移植物的免疫细胞攻击受体细胞而发生的免疫炎症反应,是同种异体造血干细胞移植的主要并发症,目前主要通过免疫抑制药物进行防治。     

一种改良的肝星状细胞分离方法

目的改良肝星状细胞（HSC）的分离方法,为深入研究肝纤维化的发生机制奠定基础。方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位消化肝脏,在1．040～1．060g／mL范围内多重多次密度梯度离心分离HSC,台盼蓝染色测定细胞存活率,328nm紫外光激发HSC自发蓝绿色荧光法和Desmin细胞免疫荧光法鉴定HSC及检测HSC纯度。Desmin和n—SMA细胞免疫荧光方法鉴定HSC静息和活化状态。结果每只大鼠肝脏HSC得率为（3～5）×10^7个,HSC存活率在95％以上,纯度在90％以上,体外培养14d后活化的HSC纯度几乎达100％。结论在1．040～1．060g／mL密度范围内采用多重多次密度梯度离心方法,避免了HSC分离过程中因密度配比误差及HSC自身密度相对不均一性所导致的细胞流失,建立了一种改良的肝星状细胞分离方法,HSC得率和纯度更加稳定,达到国外文献报道水平。     

硬皮病相关microRNA研究进展

硬皮病是一种以皮肤组织和内脏器官广泛纤维化、微血管改变和免疫反应异常为特征的复杂自身免疫性疾病,其发病机制尚不明确.近年来,较多研究结果显示硬皮病、类风湿和系统性红斑狼疮等自身免疫疾病具有类似的microRNA(miRNA)调控机制.进一步了解近年来自身免疫疾病中具有重要作用的miRNA以及硬皮病致病机制相关的miRNA可增进对其研究进展的理解.     

影响患者入住层流病房的不利因素及护理干预

造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)及大剂量化学药物治疗是目前作为治疗血液系统恶性疾病和其他部分实体瘤的重要手段.患者接受HSCT的过程中及大剂量化疗后均可使中性粒细胞及相关免疫细胞减少或缺乏,可导致患者出现严重感染等并发症,为了减少并发症,患者应入住无菌层流病房与外界隔离,严格实施空气、食物以及患者的无菌化,尽可能减少外来及机体内感染,以提高疾病治愈率及患者的生存质量~([1]).因此无菌层流病房成为现代血液病治疗的必不可少的设施,其优点不言而喻,但不利因素也随之产生.