高位连续双节段颈椎间盘突出症1例

病人,女,50岁,因“四肢麻木无力、活动不灵1月,加重半月”入院。体格检查:颈椎棘突无压痛,活动无明显受限,双前臂、双小腿及足背痛觉减退,双手握力Ⅳ级,双下肢肌力Ⅴ级,双侧肱二头肌、肱三头肌腱反射正常,双侧膝腱反射活跃,踝反射正常,双HOFFMANN征阳性,BABI NSKI征阴性。颈椎X线正侧位片检查颈椎曲度变直,颈椎退变(图1)。颈椎CT及颈椎MRI检查示颈2/3及颈3/4椎间盘突出,相应节段硬膜囊受压(图2~4)。诊断为颈椎间盘突出症(颈2/3,颈3/4)。在全麻下行颈椎前路颈2/3、颈3/4椎间盘切除,颈3椎体次全切除,自体髂骨取骨植骨,行钛板内固定术。病人仰卧位,全身麻醉,取右侧颌下     

人基质金属蛋白酶3基因RNA慢病毒载体构建及在人退变髓核细胞中的鉴定

BACKGROUND: Inhibiting the degradation of extracellular matrix in the intervertebral disc can delay the degenerative process of intervertebral disc. Matrix metalloproteinases-3 (MMP3) is considered as a key enzyme for degradation of extracellular matrix components such as type II collagen and aggrecan. OBJECTIVE: To construct the short hairpin RNA lentiviral vector targeting human MMP3 gene and to detect its efficiency of gene silence by infecting human degenerative nucleus pulposus cells. METHODS: According to the human MMP3 mRNA (NM_002422.4) sequence, four groups of the short hairpin RNA gene sequences targeting MMP3 were designed, synthesized and annealed to form double stranded DNA fragments, which were connected with the LV3 vectors digested by BamHI and EcoRI enzymes, and then transfected into the competent cells. The positive clones were identified by PCR, and analyzed by sequencing. The packaging and titer of lentivirus were determined after transfecting 293T cells. Human degenerative nucleus pulposus cells were infected with lentivirus vector, and the transfection efficiency of each group was observed under inverted fluorescence microscope. The interfering efficiency was detected by real time-PCR and western blot at 72 and 96 hours. RESULTS AND CONCLUSION: The ds-oligo DNA was successfully inserted into the lentiviral vector as confirmed by electrophoresis and sequence analysis. The recombinant lentivirus was harvested from 293T cells with a viral titer of 1-5 ×108 TU/mL. RNA interference targeting the GCC AGG CTT TCC CAA GCA AAT sequences with the highest interfering efficiency in MMP3 gene at 72 and 96 hours resulted in suppression of MMP3 mRNA expression by 98% and 72%, respectively; and at 96 hours, the interfering efficiency of protein expression was 57.2%. The recombinant lentivirus vector containing RNA interference targeting MMP3 gene is successfully constructed, which lays a foundation for further studies on the MMP3 function and gene therapy.      

pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒构建腺相关病毒包装

背景：实验为基因治疗退变椎间盘实验的前期部分,旨在构建含免疫荧光的pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒并应用腺相关病毒包装,为后期体内外实验打下基础。 目的：构建人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV- hSOX9-IRES- tdTomato的包装。 方法：用酶切法将质粒pAAV-IRES- tdTomato和质粒pUC57- hSOX9连接成pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato,用质粒共转染方法包装腺相关病毒,感染293AAV细胞,腺相关病毒纯化及用生物学滴度测定法进行滴度测定。 结果与结论：经测序结果BLAST比对分析,pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato完全与合成的基因序列hSOX9相符,滴度为1×107TU/mL。结果表明,人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato包装成功。      

Lenke-Silva Ⅵ型退行性脊柱侧凸不同内固定方式的生物力学分析及活动度研究

目的:建立退行性脊柱侧凸矫正术后三维有限元模型并对其进行仿真分析,得出钉-棒系统的应力分布情况,根据钛合金钉棒的屈服强度确定患者术后活动度。方法:选取4例已完成矫形手术但钉棒并未取出的患者,分别采取了不同内固定方案(A方案,T10-S1共17枚螺钉固定,横向连接位于矫形区上方;B方案,L2～S1共12枚螺钉固定;C方案,T10～S1共14枚螺钉固定,横向连接位于矫形区下方;D方案,T10～S1共19枚螺钉固定,卫星棒跨L1-S1固定加强,横向连接位于矫形区上方)。分别对4例患者的脊柱进行CT扫描,通过CT图像建立完整的三维有限元模型,对三维模型进行加载,模拟人体前屈后仰、左右弯曲、左右旋转六种工况,分析各个工况下钉-棒系统应力分布。对钉棒进行敏感度分析,并根据钛合金钉棒的屈服强度及敏感度曲线确定患者术后的活动度。结果:成功建立了退行性脊柱侧凸矫正术后三维有限元模型,钉棒所受应力集中于钉尾与钉身交界处以及钉尾与矫形棒连接处。A、B、C、D四种内固定方案前屈后仰的活动度分别约为22°、30°、45°、30°;左右弯曲分别约为19°、28°、34°、32°;左右旋转分别约为21°、20°、42°、24°。结论:退行性脊柱侧凸矫正术后有限元模型的建立及应力分析能为退行性脊柱侧凸生物力学研究提供借鉴意义,并为手术方案的制定及患者术后活动度预测提供一定的理论基础。     

腰椎间盘突出症神经根损害的肌电图检查分析

目的 探讨神经电生理检查对腰椎间盘突出症患者神经根功能损害的诊断价值。方法 2003年1月至2007年12月临床确诊为腰椎间盘突出症48例,男33例,女15例;年龄23-65岁,平均47.6岁;病史1周-1年;发病部位：L_4-5 29例,L_5-S_1 8例,L_4-5并L_5-S_1 11例。对所有患者进行周围神经传导、F波、H反射及肌电图（electromyography,EMG）,观察电生理检查对神经根受损程度和定位的准确性。结果 48例患者的周围神经感觉传导均正常;周围神经运动传导检查除5例表现为复合肌肉动作电位（compound muscle action potential,CMAP）波幅降低外,其余基本正常。F波异常3例,H反射异常12例。病程超过2周的40例患者的相应神经根前支支配肌肉的EMG出现异常表现,其中15例腰部椎旁肌EMG异常。结论 神经电生理检查可了解腰椎间盘突出症患者的神经根定位和神经功能状态,是辅助诊断腰椎间盘突出症的重要方法和判断神经损害程度的客观指标。     

脊髓及神经根监测技术在脊柱外科手术中的应用

[目的]应用体感诱发电位（somatosensory evoked potential，SEP）行颈、胸椎手术脊髓监护及应用自发肌电图行腰椎手术神经根监护，对2种电生理检查的方法学、准确性及影响因素进行分析。[方法]颈、胸椎手术采用SEP监测，根据不同阶段SEP的变化与术后功能相结合，判断SEP的准确性。腰椎手术采用自发肌电图监测神经根功能，以判断神经根在术中是否受到牵拉、激惹及刺激。并观察手术中SEP及自发肌电图的影响因素，减少监测假阳性及假阴性的发生。[结果]颈、胸椎手术128例病人中，监护未达到预警标准116例，术后无神经症状加重表现。术中SEP变化达到预警标准8例，及时提醒手术医生，暂停手术操作，7例患者SEP波幅渐恢复，术后无神经症状加重。1例患者因SEP波幅降低时间超过10min未恢复，术后神经症状加重。非手术原因如麻醉、低血压及局部低温对SEP的影响均未达到预警标准。假阴性3例，假阳性1例。腰椎手术40例，12例术中出现肌电反应，及时提醒手术医生，避免过多的刺激及牵拉，术后均未出现神经根损伤症状。[结论]颈、胸椎手术，采用SEP监测，排除各种干扰因素，体感诱发电位可较准确地反应脊髓的生理或病理状况。腰椎手术采用自发性肌电图，在严格控制肌松剂使用下，可准确及时地反应神经根的功能，避免神经根的损伤。     

经皮空心螺钉内固定治疗骨盆骨折15例临床分析

目的探讨经皮空心螺钉内固定治疗骨盆骨折的方法及临床疗效。方法选择骨盆骨折患者15例,骨折按AO分型:A型3例,B型8例,C型4例;伤后至入院时间为3 h～2 d。9例术中一期闭合复位内固定,6例术前因骨折移位严重或严重合并伤需先行股骨髁上骨牵引再行闭合内固定。结果术中共置入空心螺钉28枚,平均每枚置入时间为53 min。除1枚耻骨空心螺钉置入受髂骨螺钉干扰改用骨圆针固定外,均一次性准确置入,成功率为96.4%。术后切口均Ⅰ期愈合,无内固定失败。15例均获随访,根据Majeed骨盆功能评分标准,优11例,良3例,中1例,优良率为93.3%。结论经皮空心螺钉内固定治疗骨盆骨折,在有效重建骨盆环稳定性的同时,可降低手术对患者的损伤,减少术后并发症的发生。     

腰椎间盘内X型胶原基因表达的观察

腰椎间盘内X型胶原其确切的作用和分布还不清楚。我们以原位杂交的方法探讨胎儿、不同年龄的成人以及病理椎间盘中X型胶原基因表达的规律。     

β-连环蛋白在骨折修复过程中的表达及其意义

目的观察β-连环蛋白在骨折愈合期间变化规律,探讨其在骨折愈合期间可能的作用。方法对32只Tcf报道鼠制作胫骨骨折模型。随机分为三组：I组-对照组2只;II组-骨折组24只;III组-Dkk-1注射组6只。应用Western blot分析对各组骨折愈合不同时间点β-连环蛋白水平进行测定。同时进行组织形态学测量等。结果正常骨组织中β-连环蛋白水平低,在整个骨折愈合期间呈现高表达。Dkk-1腺病毒处理的骨痂样本显示β-连环蛋白水平低于未用Dkk1的骨痂样本。组织形态学测量发现,Ad-Dkk1处理组骨痂切片诸参数测量（软骨和骨组织占整个骨痂组织量的比例,小梁骨的直径（μm）,数量（每毫米）数值均低于对照组,II组小梁骨的间隔（μm）明显短于Ad-Dkk-1处理组。结论β-连环蛋白在骨折愈合中发挥重要作用,激活它的措施可能有助于骨折愈合。