胃腺癌的血管内皮细胞生长因子和KDR受体的表达及其临床意义

目的：研究胃腺癌的血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ, ＶＥＧＦ）及其受体 ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ）的表达,并探讨其临床意义。方法：应用免疫组织化学染色法检测ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的表达,并分析其与６１例胃腺癌临床病理特征之间的关系。结果：胃腺癌组织ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达率分别为５５．９％和３９．３％;其中粘液腺癌和管状腺癌表达率较高（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ表达率分别为７１．４Ｔ／４２．８％和６１．９％／５２．４％;ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达与ＴＮＭ分期有显著差异（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,阳性率为Ⅵ＞Ⅲ＞Ⅱ＞Ⅰ期,Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ期的表达率分别为 ８０．０％／５０．０％,６８．２％／４５．５％,４０．０％／３０．０％和３６．８％／３１． ６％;胃腺癌并转移患者,ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达分别为７６．２％和４７．６％,远高于无转移的４５．０％和３５．０％（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;术后生存期小于１年的ＶＥＧＦ的表达率为６６．７％,明显高于术后生存期１年以上的５２．２％。结论：ＶＥＧＦ是胃腺癌血管生成的正向调     

化疗药物对荷人胆管癌裸小鼠移植瘤的药效试验

目的：观察化疗药物对荷人胆管癌裸小鼠移植瘤的治疗效果。方法：采用人中分化胆管癌裸小鼠移植瘤模型。将45只荷人胆管癌裸小鼠分为各治疗组和对照组,裸小鼠治疗组每组5只,对照组10只。分组当天称鼠重,由尾静脉用药1次。给药剂量：丝裂霉素(MMC)4mg／kg,阿霉素(ADM)10mg／kg,长春新碱(VCR)0．20mg／kg,泰素(TAXOL)20mg/kg,顺铂(DDP)10mg／kg,环磷酰胺（CTX)120mg／kg,5-氟脲嘧啶(5-Fu)120mg/kg,NS为0．2mL／只。第21天处死裸小鼠,称鼠重,计算体重变化。治疗期间每周测肿瘤瘤径2次,计算相对肿瘤增殖率T／C(％)。结果：MMC,ADM,VCR,TAXOL,DDP和CTX组第21天相对肿瘤增殖率分别为：1％,23％,39％,47％,51％和86％,裸小鼠体重增加分别为：21％,0％,11％,1％,14％和8％。5-Fu组80％裸小鼠死亡,有药物毒性反应。结论：MMC,ADM,VCR,TAXOL,DDP对荷人中分化胆管癌裸小鼠的移植瘤有明显的抗癌作用,CTX无效。     

多替泊芬-光动力疗法肿瘤抑制效应的实验研究

目的观察多替泊芬-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对肿瘤生长的抑制作用。方法 (1)体外杀伤效应实验,肿瘤细胞加药后孵育3h,采用波长627.8nm、功率密度20mW/cm2的激光照射300s,应用磺酰罗丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B,SRB)检测多替泊芬对人口腔鳞癌细胞KB、人结肠腺癌细胞HCT-116、人胃腺癌细胞MKN-45、人宫颈上皮鳞癌细胞HELA、人食管癌细胞Eca-109、人膀胱癌细胞T-24等6株人实体瘤细胞增殖生长的抑制作用。(2)在体抗肿瘤效应实验,荷瘤裸小鼠单次静脉注射多替泊芬后1h,采用波长627.8nm、功率密度120mW/cm2的激光照射肿瘤30min,检测多替泊芬-PDT对裸小鼠人鳞癌KB、人胃腺癌MKN-28、人结肠腺癌HCT-116三种移植肿瘤的生长抑制作用。结果多替泊芬光动力治疗对6株人实体瘤细胞生长抑制的IC50为0.14～0.20μM;加药无激光照射时,对人实体瘤细胞无生长抑制作用。多替泊芬光动力疗法对人鳞癌KB、人胃腺癌MKN-28和人结肠腺癌HCT-116三种裸小鼠移植瘤有明显的生长抑制作用,该作用与药物剂量相关,10mg/kg多替泊芬光动力治疗后第24天上述三种移植瘤的相对肿瘤增值率分别为13.8%、11.7%、14.2%。结论多替泊芬-光动力疗法对本实验的6株人实体瘤细胞、三种实体瘤均有显著生长抑制作用,有较好的临床应用前景。     

全长及细胞内磷酸化位点缺失的人组织因子真核表达重组质粒的构建及其生物学功能

目的： 研究组织因子(tissue factor,TF)细胞内区域的功能,分析TF细胞内区域对人乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的影响。方法： Trizol一步法抽提人乳腺癌细胞MDA-MB-231总RNA,RT-PCR扩增TF全长(TF full-length)基因和TF细胞内磷酸化位点缺失(TF truncated)基因,分别克隆入pGEM-T载体,再构建人TF full-length基因和TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated。将构建好的pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated瞬时转染MCF-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达,并用发色底物法检测瞬时转染后TF的促凝血功能。利用Transwell小室检测转入人TF full-length基因和TF truncated基因后MCF-7细胞的迁移能力。结果： 扩增出人TF full-length基因和TF truncated基因,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),并且在MCF-7细胞中表达后具有促凝血活性。瞬时转染pcDNA3.1(+)-TF truncated不能增加MCF-7 细胞的迁移能力,而转染 pcDNA3.1(+)-TF full-length后可以显著增强MCF-7细胞的迁移能力。结论： 成功构建了带有人TF full-length,TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated,为研究TF以及其细胞内磷酸化位点区域在肿瘤学中的作用奠定了基础。     

重组人p43蛋白抗血管生成活性及其机制

为了研究重组人p43(YS-1)蛋白对血管生成的影响及其机制,并考察其对肺癌实体瘤的抑制作用。采用内皮细胞增殖实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、大鼠动脉环体外实验、鸡胚尿囊膜体内实验考察YS-1的抗血管生成作用;采用Western印迹法检测细胞内磷酸化MEK1/2、Akt蛋白质的表达;选用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤模型检测YS-1的体内抗肿瘤活性。结果发现,YS-1能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,可以抑制体外培养的大鼠动脉环微血管样结构及鸡胚尿囊膜血管,YS-1可以明显抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的内皮细胞中VEGFR2及下游MEK1/2及Akt的磷酸化,YS-1高剂量(10mg/kg)能显著抑制肺癌A549移植瘤的生长。研究结果表明：YS-1能抑制人肺腺癌A-549裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能跟抑制VEGF引起的VEGFR2活化及信号转导而影响血管生成有关。     

中性磷酸酯酶2在癌症发生发展中作用的研究现状

鞘磷脂-神经酰胺代谢与细胞氧化应激、细胞增殖和细胞坏死等多种细胞过程相关,参与衰老、肥胖和糖尿病等生理病理过程.中性磷酸脂酶2(neutral sphingomyelinase-2,nSMase2)是鞘磷脂-神经酰胺代谢途径中的关键酶,能够水解鞘磷脂产生神经酰胺和磷酸胆碱,参与细胞凋亡、细胞增殖、炎症和骨骼发育等生物学...     

二乙基邻菲咯啉二氯合锡与DNA作用的研究

用紫外光谱、荧光光谱、循环伏安和电泳等手段,对二乙基邻菲咯啉二氯合锡[Et₂SnCl₂(phen)]与DNA的作用机制进行了研究。结果表明,Et₂SnCl₂(phen)主要作用于DNA磷酸基因,使DNA构象发生改变。此外还存在通过Et₂SnCl₂(phen)的邻菲咯啉插入DNA双股螺旋的作用方式。Et₂SnCl₂(phen)浓度较大时可使DNA单链断裂。首次提出了Et₂SnCl₂(phen)对DNA可能的分子作用机制模型。     

C—反应蛋白在慢性乙型肝炎中的表达

目的了解慢性乙型肝炎时，Ｃ－反应蛋白（ＣＲＰ）在肝细胞中的表达。方法用本室建立的ＬＢＡ法检测４０例ＨＢｓＡｇ阳性慢性肝炎的肝组织和１５例ＨＢｓＡｇ阴性的正常肝组织的ＣＲＰ原位表达；用免疫双标记染色检测肝细胞中ＣＲＰ、ＨＢｓＡｇ的表达。结果４０例肝炎标本ＣＲＰ均呈阳性，表达位置和形态与ＨＢｓＡｇ相似；免疫双标记染色显示肝细胞中ＣＲＰ与ＨＢｓＡｇ有重叠。此外，Ｔ淋巴细胞也表达ＣＲＰ。结论ＣＲＰ可与ＨＢｓＡｇ形成复合物。ＣＲＰ可能与慢性乙型肝炎的发病机制有关     

沉默CC型趋化因子受体5对人乳腺癌细胞黏附及迁移的影响

构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1 和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。     

骨桥蛋白启动子区报告基因的构建

目的 克隆和构建带人骨桥蛋白(OPN)启动子区基因的载体pGL3-OPN.方法 一步法提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总DNA,PCR扩增 OPN全长基因,克隆入T载体,测序,双酶切连入真核表达载体pGL3-vector,酶切鉴定.将构建好的pGL3-OPN瞬时转染到人乳腺癌细胞MDA-MB-435中,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测,通过计算两种质粒荧光素酶活性的比值来筛选药物.结果 扩增出人OPN基因全长,测序结果和GenBank记载一致,成功克隆入真核表达载体.p47可一定程度激活OPN启动子活性.结论 成功构建带有人OPN基因的真核表达载体pGL3-OPN.