抗内毒素类脂A单链抗体基因的克隆、表达和初步鉴定

为探索Ｇ－杆菌脓毒症的治疗问题，应用基因工程技术从本所制备的分泌抗内毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取ｍＲＮＡ，然后反转录成ｃＤＮＡ第一链，用特异性轻、重链引物扩增反应产物，获得重链（３４０ｂｐ）和轻链（３２０ｂｐ）基因片段，经纯化后将轻链和重链基因用一多肽连接物连接，构成单链抗体基因片段。此单链抗体基因经再次ＰＣＲ扩增后克隆入ＰＣＡＮＴＡＢ５噬菌粒中再转化于感受态的ＴＧ１大肠杆菌中，通过噬菌体抗体库技术筛选重组噬菌体，结果在ＴＧ１细菌中表达了９Ｇ６单链抗体基因。ＥＬＩＳＡ阻断试验初步证明了该单链抗体能阻断其亲本单克隆抗体对内毒素的结合。提示：抗内毒素单链抗体可为脓毒症的治疗提供一条途径。     

分子生物学技术在肠道感染诊断中的应用

肠道感染病原体由于培养条件的复杂常导致诊断和鉴定的困难。而核酸探针技术及PCR方法的出现为解决上述问题提供了技术保障。本文重点介绍年来DNA、rRNA探针、PCR在引发肠道感染的细菌、病毒及寄生虫等病原体诊断中的应用。     

抗内毒素研究进展

内毒素(endotoxin)是革兰阴性菌细胞壁外膜的结构成分之一,其化学本质为脂多糖(lipopolysac-charide,LPS).LPS主要由O特异性侧链、核心多糖、脂质A(lipid A)3部分组成,其中lipid A为其毒性中心.在创伤、感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS)及脓毒症中,内毒素是重要的致病因子.近年来虽然大量广谱、高效抗生素的应用为临床治疗感染性疾病提供了有力的措施,但并没有从根本上改变脓毒症患者高病死率的现状.     

复方拟虫菊酯气雾剂治疗虱病疗效观察

临床资料　头虱11例,男3例,女8例;年龄7～34岁;病程2天～3月。阴虱37例,男23例,女14例;年龄18～45岁;病程5天～3周。患者均有头皮或阴部瘙痒,局部皮肤可见红斑、丘疹、抓痕、血痂等损害,头发或阴毛上可找到虱卵或成虫。　　治疗方法　药用市售“雷达”蚊子杀手气雾剂[沪卫杀虫剂(核)字第97010号](以下简称“雷达”),其主要成分为0.3%胺菊酯,0.1%氯菊酯及精制煤油。总容量600ｍｌ。治疗时由助手持喷罐对准患者头发(勿喷入眼、鼻、口内)或阴毛直接喷射10～20ｓ,同时拨动头发或阴毛,使药物均匀分布。保留药物15ｍｉｎ后肥皂水洗净毛发,隔日1次,…     

抗生素诱导革兰阴性杆菌释放内毒素的实验研究(二)

目的　探讨 β 内酰胺类抗生素在诱导革兰阴性菌释放内毒素 (LPS)及对感染动物保护效能方面的差异。　方法　制备大鼠烫伤创面脓毒症模型。将大鼠随机分为单纯抗生素治疗组 ,半乳糖胺 (GalN)敏化后治疗组及爱兰苔胶 (CGN)封闭后治疗组。分别用亚胺培南 (IMP ,5mg)和头孢他啶 (CTZ ,10mg)单剂量腹腔注射治疗 ,对照组施以同量无菌等渗盐水 ,敏化组加用GalN 5 0mg ,封闭组在敏化组的基础上加用CGN 1mg。于抗生素治疗后不同时相点检测血中细菌浓度、血浆LPS水平 ,观察敏化组和封闭组大鼠 10d后的死亡率。　结果　IMP和CTZ均能显著降低大鼠血中细菌量 ;IMP和CTZ在杀菌过程中能诱导PA10 3释放大量LPS ,但CTZ组血浆LPS水平显著超过相应的IMP组 (P<0 .0 5～ 0 .0 1) ;敏化组大鼠的死亡率CTZ组明显高于IMP组 (P <0 .0 5 ) ;封闭组两者间的差异消失(P>0 0 5 )。　结论　IMP和CTZ的杀菌效能无显著性差异 ,但在诱导细菌释放LPS的能力方面CTZ>IMP ;两者间的差异直接影响到对感染动物的各自保护作用 ,提示临床应用时 ,选择低诱导力的抗生素 (如IMP)可能更为合理。     

线粒体细胞色素C释放在H2O2诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨线粒体及其细胞色素C释放,在过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡信号途径中的作用。方法：人脐静脉内皮细胞和100umol/L H2O2共同培养24h,或内皮细胞先与环孢霉素A（cyclosporin A,CsA)孵育30min后加入H2O2;在不同时相点取细胞作DAPI染色计数凋亡细胞数量,同时用Rhoadminel23聚集法观察线粒体通透性的变化。Western bolt检测早期线粒体和血浆中细胞色素C浓度的变化。结果：H2O2处理细胞后,细胞呈现出典型的凋亡形态：细胞皱缩,胞核致密,凋亡小体形成,从处理后4h起凋亡细胞数量迅速增加,至12h达峰值,CsA可以明显抑制H2O2诱导内皮细胞亡的作用。H2O2可诱导线粒体细胞色素C浓度的下降,使得胞浆中细胞色素C浓度升高,同样线粒体中Rhoadminel23浓度下降,线粒体通透性增加,而CsA则可以明显抑制二的变化。结论：H2O2促进细胞色素C释放进入胞浆,导致内皮细胞的凋亡,CsA抑制凋亡的机制是通过保护线粒体膜的正常功能来实现的。     

BPI功能区合成肽体外杀菌能力的研究

目的：研究ＢＰＩ功能区合成肽体外杀菌能力。方法：大肠杆菌Ｊ５,绿脓杆菌ＰＡ１０３,稀释成１＊１０＾５ｃｆｕ／ｍｌ,加入不同浓度的ＢＰＩ合成肽,比较ＰＨ,菌量,血清蛋白浓度对其杀菌能力的影响,同时观察细胞形态变化,结果：ＢＰＩ功能区片段与细菌作用０。５－２ｈ杀菌力最强,酸性条件下杀菌活性增强,碱性条件下减弱;细菌浓度愈低杀菌力愈强,杀菌活性随血清浓度升高而增强。ＢＰＩ功能区片段与细菌作用５ｍｉｎ,外     

复方拟除虫菊酯气雾剂治疗虱病疗效观察

临床资料头虱11例,男3例,女8例;年龄7～34岁;病程2天～3月.阴虱37例,男23例,女14例;年龄18～45岁;病程5天～3周.患者均有头皮或阴部瘙痒,局部皮肤可见红斑、丘疹、抓痕、血痂等损害,头发或阴毛上可找到虱卵或成虫.     

严重感染病人血清细胞因子水平与IL-6和病情的关系

TNFα和IL-1β是机体损伤后活化的巨噬细胞最先分泌的两种细胞因子。许多细菌性感染的表现均和这些多肽的释放有关。IL-6可能是巨噬细胞、内皮细胞和其它细胞被IL-1β和TNFα活化后释放出的第二信使。为确定IL-1β、TNFα和IL-6与感染尤其是中毒性休克的关系,对严重细菌性感染患者血清中这些细胞因子的变化进行了研究。研究对象是外科ICU收治的40名感染病人,其中腹腔感染20名,纵隔炎5例,支气管肺炎3例,败血症9人,