成体神经干细胞脑内移植对脑外伤大鼠神经功能的影响

目的 观察脑内移植成体神经干细胞对脑外伤大鼠中枢神经功能的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为5组,正常组(A)、模型组(B)、假手术组(C)、PBS移植组(D)、干细胞移植组(E).Morris水迷宫实验测试各组大鼠的学习记忆能力;免疫组织化学及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达.结果与A组比较,B组大鼠寻找隐形平台的时间明显延长(P<0.01),脑组织中BDNF(27.70±1.65)ng/g蛋白、NGF(59.80±9.40)ng/g蛋白含量下降显著(P<0.01),模型复制效果理想;与B组比较,E组大鼠学习及功能明显改善,脑内BDNF(49.30±2.87)ng/g蛋白、NGF(88.50±9.23)ng/g蛋白的表达量上升,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成体神经干细胞的脑内移植能明显恢复外伤大鼠中枢神经功能.

Abstract：

Objective To study the neuroprotetive effect of dault neural stem cells intracerebral implantation to rats subjected to traumatic brain injury.Methods Sixty Wistar rats were divided into 5 groups randomly: normal group ( A ),model group ( B),sham-operated group ( C ),PBS transplated group (D),neural stem cells transplated group (E).Morris maze method was adopted to observe the impact on the learning and memory.Immunohistochemisty and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)were used to detect the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) and nerve growth factor (NGF) in brain issue.Results As compared with group A,in Morris maze experiment,time to reach the end point of the maze in group B was significantly prolonged ( P ＜ 0.01 ),and the content of BDNF (27.70 ± 1.65 ) ng/g prot and NGF ( 59.80 ± 9.40 ) ng/g prot were decreased significantly ( P ＜ 0.01 ).As compared with group B,the function of learning and memory was obviously improved,and the expression of BDNF (49.30 ±2.87) ng/g prot and NGF (88.50 ±9.23) ng/gprot in brain issues were statistically increased in group E (P ＜0.01 ).Conclusion Transplantation of adult neural stem cells can ameliorate learning and memory deficits following traumatic brain injury in rats.     

成体神经干细胞培养方法的建立

目的 探讨体外建立培养成体神经干细胞(MSC)的方法.方法 从6周龄大鼠脑组织中分离神经干细胞,用神经干细胞培养液[DMEM/F12培养液添加1%N2、2%B27、20 μg/L表皮生长因子(EGF)和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]使其稳定增殖,10%胎牛血清诱导其贴壁分化.倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE,成熟神经元的特异性标志)、半乳糖脑苷脂(Galc-C,成熟少突胶质细胞的标记物)的表达.结果 分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测显示Nestin阳性细胞为97.6%,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE、Galc-C阳性细胞.结论 采用无血清的神经干细胞培养液能培养出具有分化潜能的成体神经干细胞.     

以精神症状为主的神经梅毒合并脑积水1例报告及文献复习

目的探讨神经梅毒的临床特征、早期诊断及治疗。方法回顾性分析经临床和实验室检查确诊的1例神经梅毒患者的临床资料及查阅相关文献。结果这例病人经抗梅毒及脑室-腹腔分流术治疗后,临床症状明显改善。神经梅毒主要分为5种类型,临床表现多样。目前其诊断主要依靠流行病史、临床表现以及实验室检查结果的综合判断。结论神经梅毒误诊率高,临床表现、实验室及影像学检查是其诊断的重要依据。对于合并脑积水的病例,可在病情稳定后行分流术。     

RNA干扰抑制Aurora A表达对胶质瘤U251细胞化疗敏感性的影响

目的:采用RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞化疗敏感性的影响。方法:设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测Aurora A mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪检测在化疗药物尼莫司汀(ACNU)作用下转染Aurora A siRNA前后U251细胞增殖及凋亡情况的变化。结果:转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低。ACNU对转染Aurora A siRNA后U251细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.01),同时在ACNU作用下转染后U251细胞的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论:体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功的抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能提高胶质瘤细胞的化疗敏感性。     

诱导型一氧化氮合成酶在迟发性血管痉挛中的作用

目的　以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用。方法　 3 2只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组 ,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛 ,对照组枕大池注射生理盐水。第 8天行脑血管造影 ,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮 (NO)浓度。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )法和免疫组织化学法测定并评价iNOSmRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达。结果　颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉 (MCA)明显变细 ,大脑中动脉中段直径 (MD)与镫骨动脉中段直径 (SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少 3 0 %。对照组脑脊液中NO浓度为 (11.70± 2 .62 ) μmol/L ,实验组脑脊液中NO的浓度为(5 5 .67± 12 .84)μmol/L。iNOSmRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质 ,其中基底动脉表达最强。 结论　iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胶质瘤生长的影响

目的　观察选择性环氧合酶 (COX) -2抑制剂塞来昔布对人脑胶质瘤细胞株U2 5 1生长、细胞周期的影响以及对其凋亡的诱导。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法检测塞来昔布对细胞生长的抑制 ;用免疫组织化学检测细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达 ;用流式细胞仪检测塞来昔布对其凋亡的诱导。结果　MTT检测表明细胞生长抑制率呈现一定的时间、剂量依赖性。PCNA检测发现经塞来昔布处理后PCNA指数明显下降 (P <0 .0 5 )。2 0 0 μmol/L塞来昔布处理胶质瘤细胞 8h后 ,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰 ,且峰值随处理时间的延长而增加 ,细胞凋亡率随处理时间的延长而呈现增加趋势 ,方差分析各组间差异具有统计学意义。结论　塞来昔布能有效抑制体外培养的人脑胶质瘤细胞生长 ,并呈时间浓度梯度 ;塞来昔布能诱导其发生凋亡。     

p-gp、bcl-2和bax蛋白在人脑胶质瘤中的表达

 本组收集 1997年 3月～ 1998年 3月 6 3例脑胶质瘤石蜡标本 ,利用Ｓ Ｐ免疫组化方法 ,检测其 ｐ ｇｐ、ｂｃｌ 2、ｂａｘ蛋白表达 ,并探讨临床意义。     

微血管密度和Ki—67指数与星形胶质瘤临床病理关系的研究

目的寻求判断星形胶质瘤恶性程度和预后的量化指标.方法采用免疫组化染色技术对48例星形胶质瘤组织微血管密度(MVD)和Ki-67指数(Ki-67LI)进行测定.结果低度恶性肿瘤中MVD和Ki-67LI分别为8.89±5.80和6.69±4.81,在高度恶性肿瘤中分别为17.49±13.13和23.62±6.78,具有显著性差异;术后生存2年以上者,其2个指标值均低于术后生存不足2年者.但MVD和Ki-67LI在不同性别、年龄间的比较,无显著性差异.结论MVD和Ki-67LI均可作为判断星形胶质瘤恶性程度和预后的指标;同时检测两者可互为补充.     

VHL基因与血管网织细胞瘤

VHL基因具有调节转录、稳定细胞生长相关基因组和调节细胞周期的功能 ,其抑癌作用主要是通过wt pVHL对转录延长因子ElonginABC复合物形成的抑制 ,从而发挥对细胞生长相关基因表达的调控作用。VHL基因突变、缺失、重排和异常甲基化在血管网织细胞瘤中有很高的检出率 ,这一事实有力地证明了VHL基因异常与血管网织细胞瘤的发生密切相关。