转染血管内皮生长因子基因的骨髓间充质干细胞修复糖尿病大鼠足背创面

背景：糖尿病足溃疡严重威胁患者的健康甚至生命,其治疗仍是国际性难题,目前缺乏良好有效的治疗手段,而基因疗法和干细胞疗法在创伤修复领域展现出独特的优势和潜力。目的：探索转染人血管内皮生长因子165（human vascular endothelial growth factor 165, hVEGF165）基因的骨髓间充质干细胞对大鼠糖尿病足背创面的治疗效果。方法：体外构建hVEGF165基因的腺病毒表达载体,转染第3代大鼠骨髓间充质干细胞;将120只雄性Wistar大鼠分成正常溃疡对照组、模型组、基因治疗组、干细胞治疗组和基因转染干细胞治疗组。后4组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病,在所有大鼠的后足背切取一3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成足背创面模型。各组大鼠均在足背创缘皮下分点注射移植,距创缘5 mm处、等距6点,正常溃疡对照组和模型组各点均注射50μL的PBS,基因治疗组各点注射50μL的腺病毒悬液（1×1013 pfu/L）,干细胞治疗组各点注射50μL的干细胞悬液（1×1010 L-1）,基因转染干细胞治疗组各点注射50μL的病毒转染后的干细胞悬液（1×1010 L-1）。结果与结论：与模型组、基因治疗组、干细胞治疗组相比,基因转染干细胞治疗组大鼠创面愈合率、血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达水平、局部毛细血管数量均有显著提高（P〈0.05）,但较正常溃疡对照组差（P〈0.05）。说明 hVEGF165基因联合骨髓间充质干细胞疗法能够促进大鼠糖尿病足背创面的愈合,其主要机制为促进局部血管的生成及血管内皮生长因子的表达。     

高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾组织细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的 探讨高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾脏组织Bcl-2蛋白的表达及其与肾组织细胞凋亡的关系.方法 雄性Wistar大鼠240只,分别在1 517m和3 848m两个海拔高度建立30%TBSAⅢ度高原烫伤模型,随机分为即时复苏组(IFR组,伤后即刻腹腔注射等渗盐水4ml/kg,n=60)、延迟复苏组(DFR组,伤后6h开始按4ml/kg补液,n=50)和假烫对照组(NC组,n=10),分别于伤后1、6、12、24、72和168h取材.采用组织芯片技术和原位末端标记法(TUNEL)检测肾组织细胞的凋亡,免疫组织化学染色与图像分析技术检测肾组织Bcl-2蛋白的表达.结果 随着海拔梯度上升,肾小管上皮细胞发生水肿、颗粒变性、坏死及崩解;肾小球毛细血管出现不同程度扩张、充血,内皮细胞变性及坏死,肾间质充血、水肿及炎性细胞浸润.病变程度DFR组较IFR组加重,高海拔地区较低海拔地区加重.肾组织细胞凋亡率和Bcl-2蛋白表达水平DFR组高于IFR组,高海拔地区高于低海拔地区(P＜0.001),且二者呈明显正相关(r=0.516,P＜0.001).结论 高原严重烧伤导致的肾损伤与肾小管细胞凋亡有关,而凋亡抑制因子Bcl-2的高表达反映了损伤过程中细胞自我保护机制的增强.     

复方红景天参芪花粉制剂对不同高海拔梯度大鼠严重烧伤后早期肝损害的保护作用

目的：观察不同高海拔梯度大鼠严重烧伤后复方红景天参芪花粉制剂对早期肝损害的防治作用。方法：在海拔3480m的甘南高原和海拔1517m的兰州地区建立大鼠30％Ⅲ度烧伤模型，208只大鼠随机分为高原组104只（海拔3480m），兰州组104只（海拔1517m），每组随机分为实验组，对照组各48只，正常组8只。造模型前实验组予复方红景天参芪花粉制剂灌胃，对照组使用生理盐水。伤后不同时相点测定血清GPT、GOT和总胆红素（BIL）变化。结果：GPT与OGT在两种高海拔地区伤后3h无论实验组还对照组均见高（P＜0．01），并且3480m，地区比1517m地区升高明显（P＜0．01），伤后24h起开始下降，至72h GPT在实验组已降至正常，对照组仍高于正常。GOT在两组仍高于正常，BIL在3480m地区升高，尤其是对照组（P＜0．01），在低海拔地区变化不明显。结论：复方红景天参芪花粉制剂可对烧伤后肝功能损害提供一定保护作用，并具有一定临床应用价值。     

大鼠高原严重烧伤后早期肺损伤的病理变化及复方红景天参芪花粉对其的保护作用

目的：探讨高海拔地区大鼠严重烧伤后肺脏病理改变以及复方红景天参芪花粉对其影响；方法：180只大鼠随机分为烧伤试验组(红景天组)、烧伤对照组和正常组，试验组伤前用RACC4ml灌胃给药，对照组及正常组生理盐水4ml灌胃，伤后不同时相点剖腹取肾组织，10％福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色；结果：伤后3小时，对照组肺泡即发生严重损伤，持续(6—24)小时加重，而实验组则损伤轻微；结论：大鼠高原严重烧伤后，早期肺损伤严重，复方红景天参芪花粉对肺损伤确有保护作用。     

高海拔地区严重烧伤MODS诊断标准的初步探讨

目的 :探讨高海拔地区严重烧伤MODS相关指标参数的变化特征。方法 :将近 1 0年我院收治的 4 3例严重烧伤MODS ,按庐山和Marshall评分标准 ,参照APACHE -Ⅱ和Bowser烧伤权重系数Z值 ,比较平原与高海拔地区评分标准和结局。结果 :按庐山、Marshall评分标准 ,死亡病例分布在心、肝、肾、血液系统评分的构成比均依次增加 ,P <0 .0 1。结论 :受高海拔地区环境因素的影响 ,全身多系统器官应激反应提前发生 ;高海拔地区ARDS/MODS标准参数与平原有明显差异     

小阴唇瓣阴道成形术的方法改进

目的：完善小阴唇瓣阴道成形术。方法：2002年9月～2003年9月，对小阴唇瓣阴道成形术进行了改进，并采用改进的手术方法治疗先天性无阴道惠者5例。结果：伤口均Ⅰ期愈合，小阴唇瓣1OO％成活，再造阴道可顺利容纳2指，未发生直肠、尿道及膀胱损伤。术后6～7个月的随访结果表明，小阴唇外形良好，外阴结构满意，2例已成婚，婚后性生活满意。结论：采用改良的小阴唇瓣阴道成形术有助于术后外阴形态的恢复。     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的影响

目的：观察过氧化氢处理对体外培养肠上皮细胞株SW－480线粒体编码基因mRNA的影响。方法：以400μmol/L和4mmol/L的过氧化氢处理人肠上皮细胞细胞株（SW－480)3h后，分离RNA,应用RT－PCR检测ATPase6、ATPase8、COI、COII及COIII mRNA的变化。结果：过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的表达具有明显影响，但是这种改变不与过氧化氢的剂量呈现出一种一致的变化。结论：过氧化氢引起肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的明显改变。     

高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾组织细胞凋亡及低氧诱导因子-1α的表达

目的 探讨高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与细胞凋亡的关系.方法 雄性Wistar大鼠240只,建立高原烫伤模型[30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤],分别在1 517 m和3 840 m两个海拔高度将大鼠随机分为延迟复苏组(DFR,n=50)、即时复苏组(IFR,n=60)和正常对照组(CG,n=10).分别于伤后1、6、12、24、72和168 h从右肾组织取材,采用大组织芯片技术和原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡.用免疫组化染色技术与图像分析技术检测肾组织HIF-1α的表达.结果 随海拔梯度上升,肾小管上皮细胞水肿、颗粒变性、坏死及崩解;肾小球毛细血管不同程度扩张、充血,内皮细胞变性、坏死;肾间质充血、水肿,炎性细胞浸润.DFR组较IFR组、高海拔较低海拔地区病变均明显加重.随海拔梯度上升,细胞凋亡和HIF-1α表达均增强.阳性表达均位于肾小管上皮细胞的胞核上;其表达强度DFR组和IFR组均高于CG组,高海拔组高于低海拔组,同一海拔高度DFR组高于IFR组(P均＜0.01).细胞凋亡指数与HIF-1α阳性表达灰度值呈负相关(r=-0.651,P＜0.01).结论 高原地区不同海拔高度严重烫伤可导致HIF-1α表达增强,同时伴肾小管细胞凋亡增加.肾损伤与肾组织细胞凋亡有关;表明HIF-1α可能参与了肾组织细胞凋亡.     

高海拔地区成批烧伤的临床救治

目的：总结高海拔地区成批烧伤救治经验。方法：对2006-04～2009-04救治的4批烧伤事故共计122例烧伤病例进行回顾性总结。结果：4批122例烧伤,治愈118例;死亡4例,其中休克2例,多脏器功能衰竭1例,猝死1例,治愈率96.72%。结论：结合高海拔地区特点,合理的组织领导、有效的治疗措施是救治成批烧伤成功的关键因素。     

异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡及血管内皮生长因子的表达

背景:目前在临床多采用自体骨髓干细胞及自体外周血干细胞治疗糖尿病足溃疡,少见利用骨髓间充质干细胞治疗糖尿病足溃疡的基础研究.目的:观察局部移植异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡的效果及血管内皮生长因子的全身及局部表达情况.方法:取雄性Wistar大鼠90只,随机数字表法分为3组:对照组(正常足部溃疡)、干细胞治疗组、糖尿病对照组.干细胞治疗组、糖尿病对照组建立2型糖尿病足溃疡模型,造模后分别注射同种异体骨髓间充质干细胞、干细胞培养基DMEM.造模后第1,4,8天观察各组大鼠溃疡面积、细胞核染色示踪及病理学检查,ELISA法测外周血血管内皮生长因子浓度、Western-blotting法测局部血管内皮生长因子浓度.结果与结论:与糖尿病对照组比较,干细胞治疗组溃疡愈合速度迅速,但仍较对照组愈合缓慢,外周血中血管内皮生长因子表达增高,也未达到正常水平.异体干骨髓间充质干细胞治疗前期(1～4 d)能明显提高局部血管内皮生长因子浓度,但在后期(8 d)局部浓度提高不足.干细胞治疗组愈合缓慢,表皮覆盖不完全,但较糖尿病对照组愈合明显提前,表皮覆盖较明显;细胞核染色示移植后干细胞均聚集于溃疡区周围.提示异体移植骨髓间充质干细胞可促进大鼠糖尿病足溃疡的愈合,其促进愈合的可能机制为其上调了血管内皮生长因子在全身尤其局部的表达.