人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因扣除文库的构建

目的建立人牙周膜成纤维细胞(periodontalligamentfibroblast,PDLF) 与牙龈成纤维细胞(gin-givalfibroblast,GF)差异表达基因的扣除文库。方法体外培养人PDLC和GF,分别提取mRNA,采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建人PDLC与GF差异表达基因的扣除文库。结果成功构建了人PDLF与GF细胞差异表达基因的扣除文库,文库容量为4×l02。结论基于PCR和消减杂交的基因克隆技术是构建细胞间差异表达基因扣除文库的较为简洁而有效的方法。     

携载rhBMP-2微球的新型复合人工骨的释药及成骨活性研究

目的 制备一种具有良好降解性和成骨活性，可注射的自凝固新型骨修复材料。方法制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合。制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。测定了复合材料释药速度，将复合材料及rhBMP-2-CPC分别植入兔双侧股骨髁骨缺损区域，通过X线、组织学观察比较不同时期材料的降解及成骨情况。结果 复合材料各时间点的体外释药量均大于单纯rhBMP-2／CPC组．与单纯rhBMP-2／CPC材料相比较，复合材料植入体内后不同时间点材料的降解和新骨生成均高于单纯rhBMP-2／CPC植入组。结论 rhBMP-2／PLGA微球的掺入可明显加快rhBMP-2的释放。提高材料的降解速度和成骨活性。     

人防御素-α克隆表达纯化及生物活性初步检测

防御素（Defensin）是一类阳离子大环形多肽,在人体多种器官和组织广泛存在,起着重要的屏障防御作用,对G＋/-菌、真菌及病毒都有杀灭作用.临床观察表明,测定血浆及各种体液中防御素的改变有助于某些炎症性疾患的诊断,如脓毒症、细菌感染及早产等.此外,提纯或重组防御素作为“超级抗生素”来取代传统的抗生素已成为药学界的研究热点.本研究拟在大肠杆菌中表达人防御素-α,建立稳定表达的工程菌和纯化、复性技术途径,获得活性蛋白,为进一步研究提供材料.     

联合使用骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对成纤维细胞成骨表型的影响

目的研究联合使用骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞成骨表型的影响。方法向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-2和bFGF,观察成纤维细胞形态学变化、碱性磷酸酶(ALP)活性与染色的情况和骨钙素表达的变化,同时观察细胞增殖周期的变化。结果在两种因子作用下,成纤维细胞由长梭形向多角形方向转化,细胞体积增大、细胞内颗粒增多;成纤维细胞ALP活性增高、骨钙素表达增多,细胞内ALP染色加深;细胞增殖周期缩短。结论联合使用rhBMP-2和bFGF可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖。     

简化提取核心蛋白聚糖的方法及扩大活性检测范围

目的简化分离、纯化核心蛋白聚糖的程序 ,了解其对瘤细胞生长的抑制作用。方法经匀浆、溶解沉淀、透析、研磨等步骤制备核心蛋白聚糖 ,MTT染料结合法检测A5 49、BT32 5等四种癌细胞体外生物学活性。结果简化法制备的核心蛋白聚糖得率为 3mg/g大鼠肌肉 ,SDS PAGE显示在相对分子质量 36～ 38kD间有两条带 ,除明显抑制A5 49生长外 ,对Hela、胃 790 1及BT32 5三者同样具有抑制生长活性 ,抑制率依次为 6 9.19%、48.19%、5 4.47%、6 7.80 %。结论此法成本低、纯度好、收获量及生物学活性略有提     

自拟桔梗蜈蚣散配合穴位敷贴对咳嗽变异型哮喘缓解期的治疗作用

正咳嗽变异型哮喘(cough variant asthma,CVA)是以慢性咳嗽为主要或唯一表现的特殊类型哮喘[1],并常反复发作。CVA缓解期的治疗对防止或减少急性发作有重要作用。笔者运用自拟桔梗蜈蚣散配合穴位敷贴治疗CVA缓解期疗效显著,现报道如下。1临床资料1.1一般资料154例均为2005年9月-2011年9月天水市第四人民医院呼吸科门诊患者。按门诊顺序号随机分为3组。治疗组52例,其中男28例,女24例;年龄16~69岁,平均(46.3±7.8)岁;病程65~131 d,平均(112.67±28.12)d。     

用消减杂交技术克隆人成骨样细胞机械牵张力敏感基因的研究

目的 :对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法 :对人成骨样细胞Saos 2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周 /分钟 ,加载 12小时后分别提取牵张力作用后Saos 2细胞及未作处理的正常Saos 2对照细胞的mR NA ,反转录制备cDNA ,将cDNA进行消减杂交 ,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库 ,克隆后进行序列测定。结果 :克隆到的基因片段中 ,功能已知基因片段 15个 ,功能未知基因片段 2个 ,其中牵张力敏感基因 (SSG1)位于 9号染色体上 ,功能未知 ;牵张力敏感基因 (SSG2 )位于 18号染色体上 ,与转录因子 2 ,4高度同源。结论 :用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究。     

rhBD3-BPI对7株临床分离革兰阴性菌的抗菌活性

目的:探讨rhBD3-BPI是否对革兰阴性菌具有抗菌活性.方法:采用密度梯度稀释法检测rhBD3-BPI对铜绿假单胞菌标准株和不同来源的临床多药耐药革兰阴性菌株的抗菌活性,确定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).以基因工程重组的人β-防御素3(rhBD3)作为对照.结果:rhBD3-BPI对各待检菌的MIC在1～4 μg·mL-1之间,MBC在4～8 μg·mL-1之间.rhBD3对革兰阴性菌的MIC在4～8 μg·mL-1之间,MBC在8～16μg·mL-1之间.rhBD3-BPI和rhBD3对G-菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度有统计学差异(分别为P=0.006 0、P=0.005 3),rhBD3-BPI对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度低于rhBD3对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度.结论:rhBD3-BPI和rhBD3均对革兰阴性细菌具有显著的抗菌活性,两者之间具有显著差异.     

去势大鼠骨中BMP-2, BMP-7基因表达

0 引言 BMP-2有很强的诱导及促进成骨细胞分化和诱导体外成骨能力.许多实验表明BMP-2基因表达是成骨细胞分化必不可少的因素.