人骨髓间充质干细胞亚群ZHJ-MAPCs特征表型及细胞遗传学分析

目的：对经过CD45，血型糖蛋白-A免疫微磁珠体外负分选纯化并传代培养的ZHJ-MAPCs进行体外部分细胞学鉴定，了解其特异性标志物表达及增殖、传代过程中的遗传学稳定性。 方法：实验于2004-01／12在珠江医院中心试验室完成。①原代冻存的ZHJ-MAPCs经复苏培养、传代。②利用流式细胞仪对其进行CD29，CD44，CD34和HIJA-DR流式细胞分析，以对照管作为空白定标，计算10000个细胞，记录标本的阳性细胞百分率。③分别在传代至第6代和第13代时进行细胞核型分析了解细胞核型变化。④细胞计数及细胞活力检测方法：细胞数／mL=四个大方格总数／4&;#215;104&;#215;稀释倍数。细胞存活率=5g/L锥虫蓝染色阴性细胞／100个细胞／高倍镜&;#215;100。 结果：①流式细胞仪检测结果：流式细胞仪检测ZHJ-MAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99．2％，CD44阳性细胞比率为98.3％，CD34阳性细胞比率为1．2％，HLA-DR阳性细胞比率为5.3％。②细胞核型分析结果：ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征，染色体于系数目在第6，13代均为55～58条，占80％，染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间，镜下见细胞均发生染色体变异，且变异形态多样。 结论：①ZHJ-MAPCs具有骨髓间充质干细胞的特征及较高的纯度。②ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征，染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间．染色体变异形态多样。     

透明质酸在大鼠肝移植中的应用

1原文的要点 作者应用不同品系的大鼠进行原位肝移植[1],在肝移植术后不同时间用放免法检测血中透明质酸(HA)的浓度.比较正常组、同基因移植组、异基因移植组以及异基因移植+环孢酶素A(CsA)组间透明质酸变化的差异,以及各组转氨酶(ALT)和总胆红素(Bilirubin)的变化情况.结果表明肝移植后血清HA水平与正常组比较有明显升高(P＜0.01);而术后6 d排斥反应组HA水平明显高于同基因移植组和异基因移植+CsA组(P＜0.01);ALT和Bilirubin在术后9 d才出现明显差异.作者认为由于急性排斥反应造成肝内皮细胞的损伤,导致HA水平在术后6 d时高于其他处理组;连续测定肝移植术后的HA水平有助于排斥反应的早期诊断.本文立题新颖,构思独特,实验设计比较合理,放免法检测HA浓度特异性强,检测血中HA水平反映移植排斥反应的研究在国内还没有发现有相关报道.就原文内容提出几点商榷意见:①实验动物品系不纯,SD大鼠以及Wistar大鼠属于封闭群,个体之间差异较大,如能够用近交系大鼠则更具有说服力.②内源性HA水平与冷缺血保存及再灌注损伤等因素关系密切,在术后数小时至数天内便恢复正常.     

基质金属蛋白酶的生物学特性及其在肝癌浸润转移中的作用

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)家族是一簇Zn2+依赖性蛋白酶[1],其主要功能是降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,在生理及病理过程中发挥着重要作用,如胚胎发育、创伤修复、血管再生、结缔组织病、牙周病及肿瘤的浸润和转移过程等[2-6].近年来MMPs在各种恶性肿瘤的转移和浸润中的作用成为研究热点[7-11].我们就其生物学特性及在肝癌浸润转移中的作用作一综述.     

重型脑挫裂伤术后绿脓杆菌颅内感染1例

1病例报告患者男，38岁，因车祸伤及头部、左下肢伴昏迷、尿失禁lh于1995年12月31日入院。CT示重型脑挫裂伤（左额、颞部）、脑疝形成，遂行左额去骨瓣减压术，术后患者始终昏迷，生命体征平稳。1周后再行左股骨干内固定术，术后第三天见头部切口水肿，有脓性分泌物，给予清创引流。多次将分泌物培养为大肠杆菌，依据药敏试验给予磺胺嘧啶钠、妥布霉素、头孢哌酮（先锋必）等抗感染，勤换敷料，分泌物未见减少。3月1日脑脊液及分泌物培养报告铜绿假单胞菌生长，仅对多粘菌素B敏感。立即换用多粘菌素B50万U静滴，每日2次。用药5d切口分泌物…     

自发性腹膜炎患者血清及腹水一氧化氮检测的意义

一氧化氮(nitric oxide,NO)是近年来发现的人体中具有多种生理、病理作用的活跃分子[1,2],其作用引起了众多学者的关注[3-6].NO能促使肝硬变患者门脉血流动力学紊乱,其增高与腹水的有无呈非常显著相关[7],且与感染和炎症有密切关系[8,9].为进一步探讨NO在自发性腹膜炎中的作用,我们分别测定了自发性腹膜炎、肝硬变及肝癌患者血清、腹水中NO的水平,现报告如下.     

家族内白线疝三例报告

患者：男，47岁。因脐上正中腹壁色块10年，疼痛3小时急诊入科。患者Ic年前无意间发现脐k有一1．scmXI．scm大小的包块，因无不适未引起重视。包块渐增大并感饱餐后不适；平卧后包块可消失，且腹胀及不适缓解。3小时前突感包块增大，并感上腹部持续疼痛不适，急诊入院。体检：神志清楚，痛苦面容，心肺无异常。腹平坦，脐上正中有一scmXscmX3cm大小的色块，质中，活动度差，压痛明显，叩诊呈买音，未触及血管搏动，不能回入腹腔。肝脾肋下未触及，移动性法音阴性，肠鸣音正常。诊断为“白线迹嵌顿”。遂急诊手术治疗，证实为“白线迹嵌顿…     

一种恶性梗阻性黄疸介入治疗的新方法—经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术

目的探讨介入治疗恶性梗阻性黄疸的新方法:经皮肝穿刺胆道射频消融内支架置入术的临床经验。方法经临床筛选2例晚期恶性梗阻性黄疸患者,其中肝门部胆管癌1例,胰头癌1例。采用经皮肝穿刺胆道内肿瘤射频消融,然后置入相匹配的金属内支架。结果 2例患者均完成手术,血清总胆红素明显下降,其中一例CA-199降至正常,临床症状显著改善。结论经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术率先在国内开展,是一种安全可行的新的手术方式。相对于传统的介入治疗方式,射频消融能减少操作时肿瘤的出血,进一步阻止肿瘤的局部增长,从而延长内支架的通畅期和患者的存活期,改善患者生存质量。     

新型免疫状态定量监测皮肤移植模型小鼠的特异性*☆

背景：器官移植后如何监测受者的免疫状态,并预测排斥反应的发生,从而调整免疫抑制剂的用量是当前面临的重要问题。 目的：探索新型免疫状态定量监测方法在小鼠皮肤移植模型中是否有抗原特异性。 方法：建立 C57→BALB/c皮肤移植排斥模型,分别输注 C57/BALB/c 混合脾细胞悬液及第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞,在细胞输注后检测2种混合细胞悬液比例变化及供体细胞杀伤率,同时设置 BALB/c→BALB/c 同系皮肤移植对照组,免疫低下裸鼠对照组及免疫抑制剂对照组与之对比。 结果与结论：C57/BALB/c悬液-移植排斥模型组和C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组小鼠对供体 C57 脾细胞有强烈的特异性杀伤作用,其中C57/BALB/c悬液-移植排斥模型免疫抑制剂组特异性杀伤作用稍弱,而输注第三者对照DBA/BALB/c混合脾细胞的小鼠细胞注射2~4 h内没有明显特异杀伤作用,但免疫低下的裸鼠始终未表现出特异性杀伤。说明实验建立的抗原特异性免疫状态检测方法能够快速地检测出皮肤移植受体的免疫状态。     

Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

目的探索应用Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的效果,筛选出所涉及的信号通路,并验证Hippo 信号通路。方法对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取、分离、传代培养及鉴定。取第3代细胞进行诱导培养,分为SD大鼠 BMSCs（A组）、SD大鼠BMSCs+0.5 μg/mL Gal-3（B组）、SD大鼠BMSCs+20 ng/mL HGF（C组）、SD大鼠BMSCs+0.5 μg/mL Gal-3+20 ng/mL HGF（D组）和大鼠肝细胞（E组）。分别在诱导后7、14、21、28 d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时 定量PCR 以及Western blot 检测,鉴定其分化情况。取B组细胞行基因芯片检测。将BMSCs 与Gal-3、Gal-3+XMU-MP-1 （Hippo信号通路抑制剂）分组进行诱导,Western Blot检测YAP、P-YAP、ALB、AFP、CK-18。结果大鼠股骨骨髓分离出的细胞 符合骨髓间充质干细胞特性。诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,D组28 d时细胞形态与肝细胞相对比相似 度最高。糖原染色28 d 时A组无染色,B、C、D组染色较前增多,B、C组间无明显差异（P>0.05）,D组染色率最高（P<0.05）。 Q-PCR检测AFP、ALB、CK-18表达逐渐升高,28 d时B组与C组各指标较接近（P<0.05）。Gal-3与HGF对AFP、ALB的mRNA 表达不存在交互效应（AFP：F=0.236, P=0.640;ALB：F=50.639, P=0.000）,对CK-18 的mRNA表达有协同效应（F=50.639, P= 0.000）。Western blot检测A组几乎不表达AFP、ALB及CK18,B、C、D组AFP、ALB及CK18蛋白表达随时间延长,逐渐增加。 基因芯片检测发现上调基因27个,下调基因62个。涉及TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路。Gal-3及Gal-3+XMU-MP-1诱 导组的YAP表达较空白对照组增加,Gal-3+XMU-MP-1较单独应用Gal-3诱导BMSCs分化的效率高。结论Galectin-3能够单 独诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,而且联合HGF诱导BMSCs分化的效率更高。诱导过程与TGF-β、PI3K-Akt 及 Hippo等信号通路相关。抑制Hippo信号通路可提高诱导效率。