组合性人工肝的临床研究现状

因感染、药物或多器官功能衰竭等所致的肝功能衰竭 ,目前的发病率、死亡率仍然很高。其治疗仍局限于内科的护肝支持治疗 ,甚至原位肝移植 (ｏｒ ｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ,ＯＬＴ)。基于这些治疗的局限性 ,近年来随着细胞学技术、生物工程学技术的发展 ,组合性人工肝 (ｈｙｂｒｉｄａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｉｖｅｒ)或称肝细胞支持系统 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｌｉｖｅｒａｓｓｉｓｔｓｙｓｔｅｍｓ,ＬＡＳ)的建立和临床试验成为研究热点 ,并已可望成为临时和长期肝支持治疗的方法。目前 ,由哺乳动物肝细胞…     

供体特异性体内免疫状态的定量检测

背景:由于免疫反应的复杂性,目前的免疫学检测方法均有其局限性,虽然各种检测技术精确程度不断提高,但是单一指标不足以判断机体复杂的免疫状态.建立一种在多指标基础上的联合评估模式来监测移植后受体免疫状态是当前需要解决的难题.目的:建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探索该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点.方法:取C57及BALB/c小鼠脾脏制各脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色后制备1:1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57→BALB/c小鼠皮肤移植排斥模型,分别于输注后1,2,4,10 h,1,2,3,6 d应用流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/c小鼠为对照,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率.结果与结论:供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响,输注细胞后2-4 h为最佳检测时间点.提示体内细胞毒性试验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法,可以全面反映小鼠皮肤移植后受体的免疫状态.     

供体特异性体内免疫状态的定量检测

背景：由于免疫反应的复杂性，目前的免疫学检测方法均有其局限性，虽然各种检测技术精确程度不断提高，但是单一指标不足以判断机体复杂的免疫状态。建立一种在多指标基础上的联合评估模式来监测移植后受体免疫状态是当前需要解决的难题。 目的：建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法，探索该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。 方法：取C57及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液，分别用不同浓度活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液，按混合细胞输注C57→BALB/c小鼠皮肤移植排斥模型，分别于输注后1，2，4，10 h，1，2，3，6 d应用流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化，同时设未移植BALB/c小鼠为对照，探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点，按公式计算供体特异性细胞杀伤率。 结果与结论：供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门，两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右，输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响，输注细胞后2~4 h为最佳检测时间点。提示体内细胞毒性试验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法，可以全面反映小鼠皮肤移植后受体的免疫状态。 关键词：皮肤移植；小鼠；免疫状态；定量免疫检测；荧光流式技术     

海藻糖对生物人工肝用人永生化肝细胞系C3A细胞低温的保存

背景:随着生物人工肝在临床上的应用,需要有一种方便、有效、实用的保护生物反应器装载细胞活力及功能的方法,设计有自主知识产权的生物人工肝用肝细胞的低温保护液迫在眉梢。目的:验证海藻糖作为低温保护剂在4℃低温保存肝细胞的作用。方法:采用C3A人永生化肝细胞系在不同低温保存液(DMEM培养液,乳酸钠林格氏液,加有不同浓度海藻糖的乳酸钠林格氏液,UW液)4℃保存24,48,72h。复苏后行细胞活力、细胞损伤指标、氧自由基代谢相关指标等检测,并通过荧光双染法观察细胞凋亡情况。结果与结论:不同低温保存液保存不同时间C3A细胞的活力、细胞损伤及细胞凋亡表现均有所不同,其中同时间点不同浓度海藻糖组均优于单用乳酸钠林格氏液组,但不如UW液组(P<0.01)。而保存24h的不同浓度海藻糖组及UW液组与乳酸钠林格氏液组相比差异无显著性意义(P>0.05),提示海藻糖能有效减轻低温对肝细胞凋亡及缺血再灌注损伤的程度,可成为低温保存液中有效及重要的保护剂组分。     

人骨髓来源多能成体祖细胞ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞的分化

目的:探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPCs)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性．方法:(1)间接共培养:将第4代ZHJ-MAPCs和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养．分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPCs的ALB、AFP、CK-18、CK-19等肝细胞特征性表型表达情况,并设阳性对照和阴性对照,计数阳性细胞比率;(2)直接共培养:将CFSE荧光(绿色)标记的第4代ZHJ-MAPCs与L02(密度均为1×107／L)按照各50％比例混合行直接共培养．5 d后用SABC-Cy3免疫荧光(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ—MAPCs表达ALB,AFP,CK-18的情况．同样设阳性对照和阴性对照．结果:(1)间接共培养:AFP在ZHJ-MAPCs间接共培养第1天即表现为强阳性,随后表达逐渐减弱．ALB在共培养第1天有可疑阳性,第3天出现较强的阳性,第5天达到高峰．CK-18在培养第1、3天检测均为阴性,至第5天开始出现阳性,第7天表达较前增强．CK-19在各时间点均为阴性着色．(2)直接共培养:胞质内呈黄色荧光ALB和CK18的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPCs在共培养5 d时出现较多,而AFP阳性表达则仅出现在极个别细胞,该结果与阳性对照细胞荧光表达类似．结论:人骨髓来源的ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化,且直接共培养有提前趋势．     

经皮浅静脉缝扎治疗大隐静脉曲张

我院自2000-08至今，采用大隐静脉高位结扎、剥脱加经皮浅静脉缝扎术(简称缝扎术)治疗大隐静脉曲张40例，与传统的大隐静脉高位结扎、剥脱加局部曲张静脉剥离切除术(简称剥离术)40例比较。现报告如下。     

腹膜后多余卵巢及黄体囊肿1例

患者,女,14岁,因左腰部间断性隐痛5个月,加重伴左上腹疼痛6d。于2007年10月23日入院。患者缘于2007年5月上旬无诱因出现左侧腰部隐痛,为持续性隐痛,于运动后疼痛加剧,取蹲位可稍缓解,与月经无关,未予特殊治疗;10月21日运动后疼痛加重,10月22日无明显诱因呕吐胃内容物1次,为非喷     

人骨髓间充质干细胞亚群ZHJ-MAPCs特征表型及细胞遗传学分析

目的:对经过CD45,血型糖蛋白-A免疫微磁珠体外负分选纯化并传代培养的ZHJ-MAPCs进行体外部分细胞学鉴定,了解其特异性标志物表达及增殖、传代过程中的遗传学稳定性。方法:实验于2004-01/12在珠江医院中心试验室完成。①原代冻存的ZHJ-MAPCs经复苏培养、传代。②利用流式细胞仪对其进行CD29,CD44,CD34和HLA-DR流式细胞分析,以对照管作为空白定标,计算10000个细胞,记录标本的阳性细胞百分率。③分别在传代至第6代和第13代时进行细胞核型分析了解细胞核型变化。④细胞计数及细胞活力检测方法:细胞数/mL=四个大方格总数/4×104×稀释倍数。细胞存活率=5g/L锥虫蓝染色阴性细胞/100个细胞/高倍镜×100。结果:①流式细胞仪检测结果:流式细胞仪检测ZHJ-MAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%。②细胞核型分析结果:ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征,染色体干系数目在第6,13代均为55～58条,占80%,染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间,镜下见细胞均发生染色体变异,且变异形态多样。结论:①ZHJ-MAPCs具有骨髓间充质干细胞的特征及较高的纯度。②ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征,染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间,染色体变异形态多样。