体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究

目的 研究膜蛋白在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌中的作用.方法 从同一住院病人体内分别收集碳青霉烯类敏感和耐药的鲍曼不动杆菌各1株.经多序列位点测序分型(MIST)和细菌基因组外回文结构重复序列分型(REP-PCR)分析后,等电聚焦电泳检测其已知碳青霉烯类水解酶的表达,在此进行膜蛋白二维电泳和质谱鉴定分析,并最后应用PABN(Phe-Arg-β-naphthylamide)外排泵抑制剂检测其外排泵相关膜蛋白表达.结果 MIST和REP-PCR结果表明耐药株来源与敏感菌株属于同一型别;等电聚焦电泳在P17.6和P19.0处两株菌中检测到β-内酰胺酶,没有检测到任何已知的碳青霉烯类水解酶;耐约株和敏感株的差异膜蛋白组学鉴定出相对分子质量(M_r)为34×10~3外排泵膜蛋白和0prD与CarO膜孔蛋白,且后续的外排泵抑制剂试验表明,在PAβN存在的情况下,耐药株的亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)由大于32 μg/ml下降到8 μg,/ml.结论 本研究发现外排泵膜蛋白的过度表达伴随OprD和CarO膜孔蛋白的下调是临床分离耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌主要耐药机制.     

变性梯度凝胶电泳检测鲍曼不动杆菌中SHV基因单核苷酸多态性

目的建立变性梯度凝胶电泳（DGGE）检测超广谱β内酰歧酶（ESBL）基因中单核苷酸多态性（SNP）的方法,并获得鲍曼不动杆菌中SHV丛因SNP的资料。方法采用DGGE并结合DNA序列测定,检测了24株SHV基闳刚性的鲍曼不动杆菌SHV基因SNP。结果对这些菌株SHV基因的PCR产物直接进行DGGE电泳时,24例标本均呈现出单一条带,但条带的位置明显不同,可分为A、B两组;对两组标本分别用含GC后夹的引物进行SHV基因PCR扩增后再行DGGE,结果显示各产物均为单一条带,而且每组条带均处于同一位置。测序结果表明两组产物分别为SHV-1b．Like、SHV一18-Like。结论目前该地区鲍曼不动杆菌中SHV基因存在两种型别。通过DGGE,不仅能简便、迅速地获得某种基因的SNP资料,而且有利于高效和经济地筛选出新的核苷酸突变。     

2019年CHINET三级医院细菌耐药监测

目的监测国内主要地区医疗机构临床分离菌对抗菌药物的敏感性。方法对国内主要地区36所三级医院临床分离菌采用纸片扩散法或自动化仪器法按CHINET统一监测方案进行抗菌药物敏感性试验。按CLSI文件标准判断结果。结果收集2019年1-12月上述医院临床分离菌共249 758株,其中革兰阳性菌占29.0%,革兰阴性菌占71.0%。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和其他凝固酶阴性葡萄球菌(除假中间葡萄球菌和施氏葡萄球菌)中甲氧西林耐药株的检出率分别为31.4%、82.4%和78.3%。甲氧西林耐药株(MRSA、MRSE和MRCNS)对绝大多数抗菌药物的耐药率均显著高于甲氧西林敏感株(MSSA、MSSE和MSCNS)。MRSA中有92.6%的菌株对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑敏感;MRSE中有89.0%的菌株对利福平敏感;未发现万古霉素耐药株。肠球菌属中粪肠球菌对多数测试抗菌药物的耐药率均显著低于屎肠球菌,两者中均有少数万古霉素耐药株。2019年儿童和成人中分离的肺炎链球菌中PSSP(95.2%和95.3%)所占比例较2018年有所上升,PISP和PRSP的检出率有所下降。除肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药率为27.6%外,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感,多数菌属的耐药率低于10%。2005-2019年15年的监测数据显示肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率呈持续上升趋势(3.0%和2.9%对25.3%和26.8%)。此外,不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为73.6%和75.1%;铜绿假单胞菌对上述两药的耐药率分别为27.5%和23.5%。结论临床分离菌对常用抗菌药物的耐药率仍呈增长趋势,尤其是碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌。为应对严峻的全国细菌耐药形势,需各相关部门协作以遏制细菌耐药。     

同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒bla_(KPC-2)基因

目的建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应(PCR)分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段,采用重叠延伸基因扩增(SOE-PCR)技术构建融合片段,以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导,同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子,用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析(MLST)型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。     

胆源性胰腺炎和胰胆管合流异常的关系

目的 探讨胆源性胰腺炎(ABP)和胰胆管合流异常(anomalous pancreaticobiliary ductalunion,APBDU)的关系.方法 选择ABP患者131例,入院后抽取静脉血检查总胆红素(TB)、ALT、AST、ALP,γ-GT.先行非手术治疗,待病情稳定后复查上述指标,然后择期手术,并行术中胆道造影,观察胰胆管合流情况.结果 131例ABP患者中发现APBDU 27例,占20.6%.其中胆总管汇入胰管(Ⅰ型)8例,占29.6%,胰管汇入胆总管(Ⅱ型)16例,占59.3%,复杂型(Ⅲ型)3例,占11.1%.经非手术治疗后,TB、ALT、AST、ALP、γ-GT含量均较入院时明显降低(P＜0.05),其中APBDU患者的ALT为(71.81±23.19)U/L,AST为(47.85±27.87)U/L,γ-GT为(52.86±31.49)U/L,仍明显高于无APBDU患者的(51.96±15.40)U/L、(40.77±16.58)U/L和(34.86±26.47)U/L(P＜0.05).结论 胰胆管合流异常足导致ABP的重要原因之一.     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价

摘要：目的：对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的可靠性进行评估。 方法：用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率。 结果：PCR法的最低检测限为5×10⁴ CFU/mL;菌数5×10⁶和5×10⁴ CFU/mL标本的批内变异系数（CV）为0.81%、0.94%,批间CV为1.48%、2.03%;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100%。痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98%,血液、尿液和其他体液标本均为100%。 结论：PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用。     

腹腔镜术中胆道造影398例分析

目的探讨腹腔镜术中胆道造影对腹腔镜胆囊切除术的应用价值。方法回顾性分析近8年间398例腹腔镜术中胆道造影者的临床资料。结果发现胆总管结石40例，胆囊管内结石3例，胆道畸形54例，胆道损伤6例。均予相应治疗，无死亡。结论腹腔镜术中胆道造影的临床应用能显著降低胆道结石残留和及时发现胆道损伤等严重并发症。     

皮下组织钩剥松解治疗乳腺癌术后上肢淋巴水肿

目的：研究皮下组织钩剥松解术治疗乳腺癌术后上肢淋巴水肿的效果。方法：9例乳腺癌术后上肢淋巴水肿2年以上的患者进行患肢皮下组织钩剥松解治疗,利用小切口皮下组织钩剥松解水肿上肢瘢痕增生及组织肥厚处,并置皮下引流,术后弹力绷带加压包扎3d后换药,继续弹力绷带加压包扎3个月后改为弹力袖套加压支持治疗,观察疗效。结果：经术后3—15个月随访,患肢淋巴水肿明显减轻,外观缩小,患肢上臂及前臂周径差值（患肢-健肢）较治疗前差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：皮下组织钩剥松解术治疗乳腺癌术后上肢淋巴水肿方法简便,近期疗效良好。     

肺炎克雷伯菌中携带碳青霉烯酶KPC-2基因的质粒分型

目的：观察华山医院临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中携带bla_KPC-2质粒的分型情况, 以了解其流行变迁。方法：共收集华山医院临床连续不重复的bla_KPC-2阳性碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌38株, 对其进行多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）分型, 并用松弛酶对质粒进行分型。结果：8株肺炎克雷伯菌所携带的bla_KPC-2阳性质粒属于MOBP3亚型, 另30株均为MOB_F12亚型。同时, 进化树显示, 本批菌株所含有的MOB_F12亚型质粒位于2个不同分支上, 提示该批菌株的MOB_F12亚型质粒具有不同的生物来源。结论：首次运用松弛酶对肺炎克雷伯菌所携带的bla_KPC-2阳性质粒进行分型, 发现其中8株属于MOB_P3亚型, 30株为MOB_F12亚型, 且MOB_F12亚型菌株具有不同的生物来源, 反映了华山医院临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中携带bla_KPC-2质粒的多样性。     

穿刺置管引流与传统手术治疗乳腺脓肿的疗效比较

目的 观察超声引导穿刺置管引流与传统手术引流治疗乳腺脓肿的临床疗效,并对其进行比较,评价各自的临床应用价值.方法 64例乳腺脓肿患者根据自愿分成两组:超声引导穿刺置管引流治疗组(A组)和传统手术引流治疗组(B组).比较两组的治疗效果并观察各组患者切口愈合时间,换药次数,疼痛分级,瘢痕长度以及继续哺乳的例数等指标.结果 超声引导穿刺置管引流组手术切口愈合时间(13.4±4.2)d,换药次数(4.3±1.5)次,疼痛程度评分(3.4±1.3),瘢痕长度(1.3±0.7)cm,脓腔愈合时间(10.7±5.4)d,78.1%的患者能继续哺乳,上述方面均优于传统手术引流治疗组(P＜0.01).结论 超声引导穿刺置管引流治疗乳腺脓肿可以缩短愈合时间,减少换药次数,减轻疾病痛苦,保护乳房功能和美观,是治疗乳腺脓肿较为理想的方法.