Toll样受体4在实验性急性坏死型胰腺炎形成中的介导作用

目的　应用抗内毒素受体 Toll样受体 4 (TLR4 )抗体体内注射观察其对小鼠实验性急性坏死型胰腺炎 (ANP)的影响 ,探讨内毒素信号通路 ,尤其是Toll样受体 4在ANP发生中的介导作用。方法　 1 0只BALB/c小鼠随机分为ANP组和ANPTLR4抗体处理组。ANP模型制备采用腹腔内注射雨蛙肽和脂多糖 (LPS)。TLR4抗体处理组于LPS注射前 1 5min静脉注射TLR4单克隆抗体 ,剂量为 2 0 μg。 1 2h后处死小鼠并收取标本。测定血清淀粉酶和乳酸脱氢酶 (LDH)水平 ;胰腺组织切片行HE染色并作病理评分 ;RT PCR检测胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRNA表达变化 ;免疫组化和westernblot检测胰原组织核因子 -κΒ (NF κΒ)p6 5亚单位蛋白表达的改变 ;酶组织化学方法检测中性粒细胞特异性髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果　与ANP模型组相比 ,TLR4抗体处理组血清淀粉酶活性 [1 2 6 1 2± 5 70 6U/Lvs2 341 2± 892 2U/L ,P <0 0 5 ]和LDH活性 [1 92 6± 4 0 0U/Lvs2 5 74± 2 77U/L ,P <0 0 5 ],较ANP模型组显著升高 ;病理评分结果显示 ,TLR4抗体处理组胰腺组织坏死和炎症反应程度明显加重 ;胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRAN表达呈显著上调 ;胰原组织NF κBp6 5亚单位的蛋白表达也呈上调趋势 ;反映中性粒细胞     

血管紧张素Ⅱ受体在胰腺纤维化大鼠胰腺组织中的表达及其意义

目的动态观察血管紧张素II受体在胰腺纤维化大鼠胰腺组织中的表达并探讨其可能意义。方法采用胰管内注射2%三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠胰腺纤维化模型。制模后第3、21、28、35、42、49天分别处死大鼠,每组6只大鼠。对照组仅行剖腹术而未注射TNBS。应用VanGieson(V-G)染色观察胰腺组织纤维化程度。免疫组化和RT-PCR检测胰腺组织AT1蛋白、血管紧张素II受体mRNA和TNF-αmRNA表达。结果模型组大鼠胰腺组织细胞外基质合成较对照组明显增加。胰腺组织TNF-αmRNA表达逐渐增加并于第五周达峰值。AT1、AT2mRNA表达随时间不同呈不同程度的增加,分别于第28天、第35天达到峰值(382%和314%)。与AT1B受体mRNA相比,AT1受体亚型AT1AmRNA表达水平升高更为明显。免疫组化结果提示,模型组大鼠胰腺组织AT1蛋白表达增加并主要分布于纤维化区域。结论血管紧张素II可能通过AT1、AT2介导的途径参与了TNBS诱导的大鼠胰腺组织纤维化形成过程。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠胰腺纤维化过程中细胞凋亡的调节作用

目的 探讨洛沙坦对TNBS诱导大鼠实验性胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡的影响及可能机制。方法 雄性SD大鼠100只随机分为正常组、对照组、治疗组，采用胰管内注射2％三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠胰腺纤维化模型。治疗组每天给予洛沙坦(10mg／kg)灌胃；对照组给予等容积的无菌蒸馏水。观察胰腺组织病理改变；TUNEL法原位检测凋亡胰腺腺泡细胞密度；透射电镜观察胰腺组织细胞形态学变化；逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Bcl-2凋亡相关基因家族成员Bcl-2、Bcl—XL、Bak、Bax mRNA表达。结果 洛沙坦治疗可逆转胰腺组织炎症细胞浸润、腺泡萎缩等异常改变。对照组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡较正常大鼠明显增加，胰腺组织Bax、Bak mRNA表达较正常增加，Bcl-2mRNA表达降低，Bcl-mRNA不表达；洛沙坦治疗后凋亡减少，洛沙坦治疗组Bax、Bcl-2mRNA表达及Bax／Bcl-2较对照组降低，Bak、Bcl—XLmRNA不表达。结论TNBS诱导大鼠胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡增加；洛沙坦阻断1型血管紧张素Ⅱ受体(AT1R)可抑制其凋亡，其机制可能与调控bcl-2凋亡相关基因表达有关。由此可见，血管紧张素Ⅱ与AT1R可能介导了实验大鼠胰腺纤维化过程中胰腺腺泡凋亡的发生。     

过氧化物酶增殖物活化受体γ活化对胰腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞凋亡中的调节作用。方法胰腺癌细胞系SW1990经10μmol/L PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)、20μmol/L维甲酸受体α(RXRα)配体9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)及其两者联合作用培养48 h后,应用电子显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪研究细胞凋亡比例的变化。30只雌性裸鼠皮下接种1×107个SW1990细胞,2周后待肿瘤可触及时,将其随机分为对照组和治疗组(予罗格列酮)。11周后处死裸鼠并取下移植瘤,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的生物素缺口末端标记法(TUNEL)评估移植瘤中凋亡细胞的情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2凋亡相关基因家族成员bcl-2、bcl-xl、bak、bax以及凋亡抑制基因Survivin的表达。结果电子显微镜结果显示15d-PGJ2、9-cis-RA及其两者联合作用均可导致SW1990细胞发生形态学变化。可见细胞核和胞质内容物密集皱缩,核内染色质凝集成块并边集,形成1个或数个沿核膜的月芽小体。在联合应用组中还可观察到凋亡小体的存在。流式细胞术检测提示对照组凋亡比率为0.95%,15d-PGJ2、9-cis-RA及其联合应用可引起SW1990细胞凋亡比率增加,15d-PGJ2组为8.05%,9-cis-RA组为8.36%,联合作用组为6.86%。TUNEL染色显示治疗组移植瘤组织中凋亡指数(AI)为15.25±4.57,明显高于对照组的6.25±2.62(P<0.05)。RT-PCR揭示在SW1990移植瘤中,促凋亡基因bak、bax表达上调,抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin下调,抗凋亡基因bcl-2几乎不表达。结论PPARγ的活化可诱导SW1990胰腺癌细胞凋亡。其机制可能是通过上调促凋亡基因bak、bax及下调抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin表达而实现的。     

实验性慢性胰腺炎大鼠骨髓间充质干细胞的检测

目的:检测实验性慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)大鼠造模后不同时间段内,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的数量和增殖能力。方法:采用精氨酸腹腔注射法建立CP大鼠模型,并分别于造模后3、7、14 d获取大鼠骨髓细胞行原代培养,CFU-F计算克隆形成率。培养的细胞分别标记荧光抗体anti-CD29-PE/CY5、anti-CD44-FITC、anti-CD45-PE后,采用流式细胞仪检测MSCs细胞群CD29+CD44+CD45-占总体细胞的比例。结果:CP造模后3、7、14 d的原代培养骨髓细胞的克隆形成分别为(19.33±3.56)个、(24.67±4.89)个和(18.33±2.73)个,均显著高于对照组(4.83±1.72)个(P<0.05)。结论:CP大鼠建模后不同时间段MSCs数量和增殖能力发生改变,经历了先增加后减少的过程。     

环氧合酶2对胰腺癌新生血管生成的调节作用及其机制

目的　探讨环氧合酶 2 (COX 2 )在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其作用机制。方法　应用免疫组织化学染色研究人胰腺癌组织COX 2、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达 ;同时标记肿瘤新生血管内皮细胞vWF和血管壁Ⅳ型胶原 ,计算肿瘤组织微血管密度 (MVD)。建立裸鼠胰腺癌细胞株PC 3移植瘤 ,观察选择性COX 2抑制剂Celebrex对肿瘤组织MVD的影响 ,并应用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化。结果　COX 2在人胰腺癌组织中表达阳性率为 87 5 % ,VEGF阳性率为 5 8 3%。COX 2强阳性组MVD平均值显著高于COX 2弱阳性 +阴性组 ,P <0 0 1。VEGF阳性组MVD平均值高于VEGF阴性组 ,但无统计学差异 ,P >0 0 5 ;Pearson相关性检验结果表明COX 2与vWF和Ⅳ胶原标记的MVD均有明显的相关性 (相关系数分别为 0 5 99和 0 6 ) ,P <0 0 5。在裸鼠移植瘤的体内实验中 ,与对照组MVD(6 3 89± 13 6 7)相比 ,Celebrex处理组MVD为 32 2 5± 12 99,两者差异显著 ,P <0 0 1。免疫组织化学染色和RT PCR结果表明Celebrex处理组肿瘤组织VEGF表达较对照组明显下调。结论　COX 2与胰腺癌新生血管生成密切相关 ,其高表达促进了胰腺癌新生血管生成 ;可能作用机制是上调促血管生成因子VEGF     

核因子-κB在血管紧张素II介导的大鼠胰腺纤维化发生中的作用

目的:探讨NF-κB在血管紧张素II介导的大鼠胰腺纤维化发生中的作用。方法:SD大鼠(200-300g)随机分为正常组、对照组、治疗组。大鼠胰管内逆行注射2%三硝基苯磺酸(TNBS)复制胰腺纤维化模型。于造模后第1d始,治疗组给予洛沙坦灌胃(10mg·kg^-1·d^-1),模型组给予等量的无菌蒸馏水。分别采用免疫印迹、免疫组化和TransAM^TM方法检测胰腺组织NF-κB表达、分布和活化情况。采用硫堇蓝(toluidineblue)染色和透射电镜观察肥大细胞数量、分布和活化脱颗粒现象。RT-PCR研究胰腺组织细胞间粘附分子(ICAM-1)mRNA表达。结果:造模后第3d大鼠胰腺组织NF-κBp65蛋白表达及其活性增加,第7d达峰值[(0.406±0.086)mg/g总蛋白]。对照组大鼠胰腺组织中肥大细胞活化;ICAM-1mRNA表达于第3d和第7d增加。洛沙坦可抑制NF-κB蛋白表达和肥大细胞活化、下调ICAM-1mRNA表达。结论:血管紧张素II在大鼠胰腺纤维化形成早期可能通过受体AT₁途径促发炎症反应及纤维化,具体机制可能与NFκB表达增加并活化有关。     

肥胖为急性胰腺炎患者早期独立的预后指标

目的研究基于亚洲人群肥胖诊断标准探讨肥胖在评估急性胰腺炎(AP)预后中的作用.方法分别采用Ranson标准、APACHE-Ⅱ评分和Balthazar CT分级系统对临床资料完整的42例AP患者入院时的病情严重程度作回顾性分析,若同时符合Ranson标准为≥3分,APACHEⅡ≥8分和Balthazar CT分级达到D级或E级者拟诊为重症急性胰腺炎(SAP).肥胖的诊断依据为体重指数(BMI)≥25 kg/m2.同时详细记录患者入院时的年龄、性别、病因及并发症情况.结果42例患者中SAP11例,轻型急性胰腺炎(MAP)31例.SAP患者平均BMI为(27.31±6.28)kg/m2,显著高于MAP患者平均BMI(22.41±4.72)kg/m2,AP时肥胖患者与非肥胖患者发展成SAP与年龄无相关性.AP时男性肥胖患者较男性非肥胖患者更易发展成SAP,且男性肥胖患者较女性肥胖患者SAP发生的危险度高.胆源性AP时肥胖患者SAP发病的危险度最高,且胆源性AP时肥胖患者较非肥胖患者更易发展成SAP.AP时肥胖与并发症无显著差异.结论肥胖可能是AP时早期独立的预后因素,尤其与一些相关因素如性别、病因联合应用时可能更具有评估性.     

18α甘草酸对I型胶原转录水平的调控

目的探讨18α甘草酸(18αGL)对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的I型胶原的调控作用。方法采用40%CCl4皮下注射方法建立肝纤维化大鼠模型,分为正常组、肝纤维化模型组和18αGL干预组。采用免疫组织化学和实时PCR分析I型胶原表达情况。Signal-Net网络分析发现与I型胶原组分COL1A1和COL1A2直接相关的基因,实时PCR分析18αGL干预后相关基因表达情况。结果 18αGL能够改善纤维化大鼠I型胶原相关COL1A1和COL1A2的mRNA水平,并且能减少I型胶原的分布。Signal-Net网络分析发现与COL1A1和COL1A2直接相关的基因中,与TGF-β/Smad、Rho/rock、MAPK、PDGF和MMP等信号通路相关,动物体内18αGL可引起RAC、RHOA、HSPB、SMAD3、SP-1和MMP2、MMP9转录水平的下调。结论 18αGL能够显著减少纤维化大鼠肝脏I型胶原的表达,并且从多通路抑制I型胶原COL1A1和COL1A2表达,从而可以多层次,多靶点的改善胶原和影响肝纤维化进程。