碱性成纤维细胞生长因子联合骨髓间充质干细胞构建组织工程瓣膜的研究

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合骨髓间充质干细胞(MSCs)构建组织工程瓣膜(TEHV),能否在保证生物学性能不变的前提下,缩短MSCs体外构建TEHV的时间.方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞猪主动脉瓣膜支架上,再进行分组于体外构建TEHV.在培养基中加入5 μg/L的bFGF分别培养7 d、14 d做为实验组A和实验组B,实验组C除培养液中不添加bFGF外,其余同实验组B.对照组为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV.各组TEHV进行形态学观察,DNA和羟脯氨酸含量检测.结果:MSCs表达CD29 (94.82%)和CD44 (93.59%), a-SMA和Vimentin染色阳性,各组TEHV具有相似的形态学结构,DNA和羟脯氨酸含量的差异无统计学意义.结论:采用bFGF联合MSCs能在更短的时间内构建具有相同生物学性能的TEHV,从而缩短TEHV体外构建时间.     

器械发展对心力衰竭治疗方向的影响及发展前景

随着结构性心脏病介入治疗的迅速深入开展, 心力衰竭(心衰)器械治疗必将成为未来心衰治疗的主要方式。心衰患者人群数量巨大, 因病因、发病机制、病程及个体差异不同, 内科治疗有时难以取得满意疗效。基于器械或设备的心衰治疗为内科治疗无效的患者提供生存曙光。近年来, 各种心衰器械研发与临床应用如雨后春笋, 但其有效性、安全性、实用性仍需经过严格的临床试验和循证医学证据验证。本文简要述评近年来心衰器械治疗主要进展与发展前景。     

容积调控阴离子通道在心血管疾病中的研究进展

容积调控阴离子通道是由渗透压变化激活的一种调控细胞体积的阴离子(主要是氯离子)通道。研究显示,容积调控阴离子通道在心房和心室的心肌细胞、血管平滑肌细胞以及内皮细胞中都有充分表达。本文回顾了其在心肌肥厚、充血性心力衰竭、心肌缺血/再灌注损伤、动脉粥样硬化、高血压病血管重塑中的作用,探讨容积调控阴离子通道作为心血管疾病治疗新靶点的可行性。     

大鼠SOCS3基因重组腺病毒载体的构建及转染血管平滑肌细胞后的表达

目的 构建携带大鼠SOCS3基因的重组腺病毒载体并转染大鼠血管平滑肌细胞,评价其转染效果,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定基础.方法 用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ将目的基因pUC57-Simple-rSOCS3及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle- 4(带GFP标记)行双酶切.回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化至DH5α感受态.提取质粒酶切鉴定正确后测序.通过LR体外同源重组将rSOCS3表达框构建至pAd/PL-DEST腺病毒表达载体上.将腺病毒线性化后转染HEK293细胞包装腺病毒,PCR鉴定此腺病毒中是否含有rSOCS3基因.放大培养并收集病毒,TCD法测定病毒滴度.将此病毒感染大鼠血管平滑肌细胞,荧光显微镜观察感染效率,real-time PCR及免疫印迹检测SOCS3 mRNA及蛋白表达.结果 rSOCS3腺病毒穿梭质粒酶切鉴定正确,测序与rSOCS3基因库中的序列完全相符.PCR鉴定pAd/PL-DEST腺病毒表达载体成功携带目的基因rSOCS3.TCD法测定的最终滴度为2×1010pfu/mL.荧光显微镜观察此病毒感染血管平滑肌细胞的效率在80％以上,real-time PCR及免疫印迹检测结果显示血管平滑肌细胞中SOCS3 mRNA及蛋白表达明显上调.结论 成功构建携带大鼠SOCS3基因的腺病毒载体,并在血管平滑肌细胞中高表达,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定了基础,具有一定的应用价值.     

脂联素对兔短期缺血再灌注心肌的保护作用

目的 探讨脂联素(adiponectin,APN)对兔短期缺血再灌注损伤心肌的保护作用并探讨其可能机制.方法 18只新西兰大白兔随机分成3组(n =6),假手术对照组(S组)、缺血/再灌注组(IR组)、脂联素组(APN组).除S组外,其余两组均接受左冠状动脉前降支15 min阻断和30 min再灌注.APN组于再灌注开始时自耳缘静脉注入重组脂联素50 μg/kg.检测心肌组织的细胞凋亡情况,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,一氧化氮(NO)含量;免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 APN组心肌细胞凋亡指数低于IR组(P ＜0.01).APN组Bcl-2基因的蛋白表达量高于IR组(P ＜0.05),Bax基因的蛋白表达量低于IR组(P ＜0.05).APN组血清TNF-α含量低于IR组(P ＜0.05),NO含量高于IR组(P ＜0.01).结论 APN对短期缺血再灌注心肌有一定保护作用,其机制可能与APN增加血清中的NO含量,降低血清中TNF-α水平及上调Bcl-2基因的蛋白表达,下调Bax基因的蛋白表达有关.     

姑息性手术在复杂先天性心脏病患者中的应用

目的探讨姑息性手术在复杂先天性心脏病中的应用策略,提高其治疗效果及生存率。方法回顾性研究华中科技大学同济医学院附属协和医院2004年1月至2011年5月95例复杂先天性心脏病患者接受姑息性手术的临床资料,男62例,女33例;年龄1个月～37岁。施行改良Blalock-Taussig shunt(B-T分流术)12例,改良Brock’s手术23例,双向Glenn手术55例和肺动脉环缩术(Banding手术)5例;对术式的选择、手术效果影响因素等方面进行分析。结果本组共死亡10例,总病死率为10.5%(10/95),其余患者顺利出院。主要并发症为低心排血量综合征、低氧血症和肺部感染等。随访5个月～6年,心功能(NYHA)Ⅰ～Ⅱ级。9例行改良Brock’s手术后患者已完成根治术,6例双向Glenn手术后患者完成全腔静脉-肺动脉吻合术。讨论由于相当部分患者错过了最佳手术干预时机,而影响手术效果;在姑息手术方式的选择策略上,需根据患者肺动脉发育状况、心内畸形特点、最终治疗目标等共同决定。     

利用培养乳鼠心肌细胞建立缺血再灌注损伤实验模型的探讨

利用培养乳鼠心肌细胞，复制缺血再灌注损伤模型，通过观察细胞三磷酸腺苷（ＡＴＰ）、细胞内钙离子（［Ｃａ＾２＋］ｉ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及心肌细胞扫描电镜变化，发现：①缺血３ｈ培养液中ＬＤＨ及［Ｃａ＾２＋］ｉ、ＬＰＯ轻度上升，ＡＴＰ耗竭明显，细胞严重水肿；②再灌注早期ＬＤＨ、［Ｃａ＾２＋］ｉ及ＬＰＯ急剧增加，ＡＴＰ含量逐渐升高，再灌注１ｈ细胞水肿减轻。结果提示：①在常温、缺氧     

主动脉缩窄合并心内畸形的外科治疗策略

目的 总结主动脉缩窄合并心内畸形的外科治疗经验.方法 武汉协和医院心血管外科2003年1月至2008年1月用3种术式共行主动脉缩窄合并心内畸形矫治18例.分期手术4例,一期主动脉缩窄修复,Ⅱ期室间隔缺损闭合(组Ⅰ);双切口一期手术8例,在循环阻断或局部灌注心肺转流下行主动脉缩窄修复和室间隔缺损闭合(组Ⅱ);正中切口一期手术6例,正中开胸非心肺转流下缩窄修复.同期闭合室间隔缺损(组Ⅲ).结果 组Ⅰ中死亡3例,1例出血心跳骤停,2例术后低心排综合征.组Ⅱ2例死于术后多器官功能衰竭.组Ⅲl例死于术后低心排综合征.12例术后随访6个月～4年,残余轻度主动脉缩窄,组Ⅱ2例、组Ⅲ1例,均无症状且无需再次手术.各组均未发现体循环高血压、动脉瘤形成和主动脉瓣返流等并发症.结论 主动脉缩窄合并心内畸形的外科手术策略主要根据心内畸形和缩窄病变特点决定.能一期手术矫治者最好一期手术,其效果优于分期手术.     

肌钙蛋白T判断心脏手术心肌保护效果的临床应用

以心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）、肌酸激酶（ＣＫ）等为指标，对浅低温心脏不停跳心内直视术（实验组）及低温心脏停跳术（对照组）的心肌保护效果进行了临床研究。发现：①ｃＴｎＴ于停机时，术后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ两组均升高，但各时间段实验组低于对照组；②ＣＫ酶于停机时两组无差异，术后２４ｈ、４８ｈ实验组低于对照组，术后７２ｈ两组均恢复正常；③开胸非心脏手术患者的ｃＴｎＴ值均为正常。结果提示，浅低温心脏不停跳术心肌保护效果优于低温心脏停跳者，其反映心肌损伤程度的指标ｃＴｎＴ的敏感性与特异性明显优于心肌酶谱。ｃＴｎＴ在心肌保护效果方面的研究具有广阔前景     

去端肽胶原介导小干扰RNA抑制大鼠静脉移植物内膜增生

Objective To evaluate the efficacy of using small interfering RNA targeting TF as a therapy for vein graft failure. Methods External jugular vein to carotid artery interposition vein grafts, which were applied to a low flow condition, were made in 120 Sprague-Dawley rats weighing 260 to 300 g. These rats were randomly divided into 4 groups, 30 rats each group. Group A was atelocollagen-TF Stealth<'TM> Select RNAi group. Group B was atelocollagen-TF Stealth<'TM> RNAi group. Group C was atelocollagen group. Group D was control group. Small interfering RNA mixed with atelocollagen was administrated to the external wall of grafted veins. The TF protein expression of vein gratis was analyzed by Western blot at 1, 3, 7, 14, and 28 d postoperatively, and by immunochemistry at 3 d postoperatively. The proliferation index was determined at 14 d postoperatively. Neointimal hyperplasia was evaluated at 28 d postoperatively. BLOCK-iTTM fluorescent oligo was used to confirm its stability and successful transfer into the vein graft wall at 3 and 7 d postoperatively for another group (n = 12). Results Fluorescence of BLOCK-iT<'TM> fluorescent align could be detected in the graft wall even at 7 d postoperatively. Knockdown of the TF expression was achieved by perivascular application of siRNA using atelocollagen. Compared with control group, the intima thickness at 28 d after grafting was significantly reduced (P ＜ 0.05). This phenomenon was preceded by significant reduction of cell proliferation in siRNA-treated grafts at 14 d postoperatively (P ＜0.05). Conclusion The expression of TF in vein grafts can be effectively inhibited by specific siRNAs using a atelocoilagen-based nonviral delivery approach/n vivo, so that the neointimal thickening can be prevented.