霍乱毒素基因(ctx)和耐热直接溶血素基因(tdh)双重TaqMan实时PCR检测方法的建立

[目的]建立霍乱毒素和耐热直接溶血素基因双重TaqMan实时-PCR实验室检测方法。[方法]根据霍乱毒素基因(Cholera toxin gene,ctx)和耐热直接溶血素基因(thermostable direct hemolysin,tdh)的保守序列设计引物和TaqMan探针,建立检测霍乱毒素和耐热直接溶血素两种毒力基因的双重TaqMan实时PCR方法。对所建立的霍乱毒素基因和耐热直接溶血素基因双重TaqMan实时PCR检测方法进行灵敏度和特异度评价。[结果]建立了霍乱毒素基因和耐热直接溶血素基因双重TaqMan实时PCR的实验室检测方法。优化的tdh和ct双重TaqMan实时PCR反应体系中,ct引物和探针的浓度分别为200nmol/L和100nmol/L;tdh引物和探针的浓度分别为200nmol/L和100nmol/L。反应体系的灵敏度和特异度均为100%。优化的反应体系对两种质粒模板的检测下限均为1.0×102拷贝/μl,扩增效率分别为94%和97.7%。[结论]本研究建立了基于TaqMan探针的tdh和ct双重实时PCR检测方法,具有令人满意的灵敏度和特异度。检测下限能达到1.0×102拷贝/μl,高于普通PCR100倍。并且双重实时PCR能够在一个反应体系中同时检测两种毒力基因,这为费时又繁琐的传统检测方法提供了一种可靠又快速的替代选择。     

NFкB家族蛋白对人卵巢癌细胞系生长及耐药性的影响

目的：研究NFкB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。方法：培养13株卵巢癌细胞系，对其进行胞质、胞核蛋白质提取，Western印迹法观察NFкB家族蛋白及其抑制物的表达，并用MTT检测药敏、观察NFкB家族蛋白与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。结果：①P65，P50及IKB在胞质内表达阳性率分别为76．9％，81．8％，84．6％，P65，P50同时在胞核内表达，P50尤为明显，阳性率分别为15．3％，45．5％。②OV－MZ－5和OV－MZ－2774两个卵巢癌细胞系P65表达阳性，MTT检测IC50表现明显高值，显示耐药。结论：P65，P50在卵巢癌细胞的发生、发展中发挥作用，P50更为明显；P65与卵巢癌细胞的耐药关系密切，可望成为判断预后的新的标志物。     

子痫前期胎盘早剥并发DIC 1例术中抢救及护理

<正>2007年11月,我院收治1例子痫前期,胎盘早剥并发DIC的患者,经积极抢护理,住院7天,治愈出院。1病例介绍患者35岁,停经9~+月,下腹痛6~+小时,阴道流血2~+小时入院,患者于2007年11月4日3am出现下腹痛,并逐渐     

护肝片治疗和预防甲状腺功能亢进及抗甲状腺功能亢进药物肝损害临床观察

目的观察护肝片治疗和预防甲状腺功能亢进及抗甲状腺功能亢进药物（ATD）肝损害的临床疗效。方法回顾性分析甲状腺功能亢进及使用ATD（丙硫氧嘧啶／PTU、他巴唑／MMI）的患者,同时辅用护肝片治疗64例为治疗组,用五脂胶囊护肝治疗58例为对照组。结果甲状腺功能亢进及ATD所致肝损护肝片治疗有效,治疗组肝功能ALT、AST、TBIL异常发生率明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论护肝片对甲状腺功能亢进及ATD肝损害有较好的治疗和预防作用。     

小檗碱诱导耐药急性淋巴细胞白血病细胞株EU-4凋亡及其机制

目的 探讨小檗碱对耐药急性淋巴细胞白血病细胞株EU-4的凋亡诱导作用及其机制.方法 0、10、1 00 μmol／L小檗碱作用EU-4细胞72 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测Caspase-3、PARP及X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的蛋白表达,比色法检测Caspase-3的活性变化,基因沉默技术观察降低XIAP表达对于细胞凋亡的影响.结果 0、10、100μmol／L小檗碱作用EU-4细胞72 h后凋亡率分别为（9.08±1.20）％、（22.36±2.16）％、（59.81±4.17）％,呈剂量-效应关系.凋亡过程中Caspase-3的活性增强,分别为1.70±0.25、1.92±0.10、2.89±0.25.小檗碱抑制EU-4细胞XIAP的表达（P＜0.05）,并呈剂量和时间依赖关系.单纯下调XIAP蛋白的表达引起细胞凋亡,对照siRNA转染组和XIAP siRNA转染组细胞凋亡率分别为（9.23±1.66）％和（22.15±0.63）％.结论 小檗碱可以诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞凋亡,XIAP下调引起的Caspase-3的激活参与了EU-4细胞的凋亡.     

双重荧光RT-RAA检测5种蚊媒病毒方法的建立

目的 建立快速筛查登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、寨卡病毒(ZIKV)、黄热病毒(YFV)以及基孔肯雅病毒(CHIKV)5 种蚊媒病毒的重组酶介导等温扩增(RAA)方法。 方法 分析上述 5 种病毒的保守基因作为靶标区域并引入人核糖核酸酶 P(RNaseP)基因作为内对照,设计 6 组特异性引物和探针,并根据引物二聚体和错配等生物信息学分析将 6 组引物和探针组合成 3 组双重荧光 RT-RAA 检测体系,在相同反应条件下进行检测。 用 5 种病毒的体外转录 RNA 验证 3 组荧光 RT-RAA 检测体系的灵敏度,用疟原虫、汉坦病毒、汉城病毒以及流感病毒核酸验证方法的特异性;分别用中浓度(10⁴拷贝/μl)、低浓度(10²拷贝/μl)5 种病毒的体外转录 RNA 验证 3 组双重荧光 RT-RAA 检测体系的重复性。 结果 通过生物信息学分析,将 5 种病毒和 RNaseP 组合为 3 组双重荧光 RT-RAA 检测体系,分别为DENV 与 ZIKV、JEV 与 YFV 以及 CHIKV 与 RNaseP, 均在 39℃反应 ...     

紫外线照射对卵巢癌细胞NFkB和p53的影响

目的　研究NFkB家族蛋白、p5 3在卵巢癌细胞系的表达及紫外线照射后所引起的变化。 方法　培养 11株卵巢癌细胞系 ,收获细胞 ,对其进行胞浆、胞核蛋白质提取 ,Western印迹法观察NFkB家族蛋白及其抑制物的表达 ,并用同法观察 p5 3的表达 ;采用 2 0J/m2 剂量紫外线照射细胞 ,继续培养并提取蛋白质进行检测。结果　① 11个卵巢癌细胞系 p5 0、p65和IKB α胞浆表达阳性率分别为 :63 6%、45 5 %、81 9% ,胞核表达阳性率分别为 :63 6%、5 4 5 %、18 2 %。②紫外线照射后胞核p5 0、p65和IKB α阳性率分别为 :81 9%、72 7%、3 6 4%。③p5 3在卵巢癌细胞表达阳性率为 :45 5 %。紫外线照射后阳性率为 :72 3 %。结论　①紫外线照射可导致胞核 p5 0、p65及 p5 3阳性率提高。②NFkB家族蛋白尤其是 p5 0对卵巢癌的发生、发展有一定作用     

新生儿桡动脉与股动、静脉穿刺采血对照与分析

为准确诊断治疗新生儿疾病,必须进行临床必要的化验检查,因此,临床穿刺抽血是一种常用的操作技术,我们必须熟练掌握。近2年来,笔者在临床实践中,对桡动脉穿刺采血与股动、静脉采血方法进行了总结。现报告如下：     

SODD和Survivin在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的作用

为了研究死亡结构域沉默子（SODD）、survivin、caspase3、caspase8及caspase9在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的变化,以进一步明确凋亡调控基因的调控机制和寻找药物作用新靶点,采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测化疗药物作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化;采用免疫组织化学SABC法检测survivin蛋白表达的变化。结果表明：SODD及survivn高表达均抑制肿瘤细胞凋亡,VCR具有时间依赖性特异下调SODD蛋白的功能并能有效诱导Jurkat细胞凋亡,在该凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9及survivin均无明显变化趋势。结论：SODD参与了VCR诱导白血病细胞凋亡过程,VCR通过下调SODD表达并启动受体配体介导途径诱导Jurkat细胞凋亡,在该过程中线粒体凋亡途径并未被启动。     

急性髓细胞性白血病患儿淋巴系分化抗原表达的意义

目的探讨淋巴系抗原在儿童急性髓细胞性白血病(AML)细胞中的表达及其临床意义。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科2000年1月-2009年7月收治的初诊AML患儿42例。其中原粒细胞白血病未分化型(M1)2例,急性髓细胞性白血病(M2)17例,颗粒增多的早幼粒细胞白血病(M3)12例,急性粒单核细胞白血病(M4)4例,急性单核细胞白血病(M5)7例。采用CD45/SSC双参数散点图设门方法对42例AML患儿进行三色流式细胞术细胞免疫分型检测。同时对伴淋巴系相关抗原表达的AML(Ly+AML)患儿与不伴淋巴系相关抗原表达的AML(Ly-AML)患儿的临床资料进行比较分析。结果42例AML患儿中13例伴有淋巴系抗原的阳性表达(30.95%),其中CD19在AML中的阳性表达率最高(33.33%),其次为CD7(11.90%)、CD3(11.90%)。CD19在M5中的阳性表达率为71.43%。Ly+AML组肝大例数与Ly-AML比较有统计学差异(χ2=6.48,P<0.05),其余临床指标均无统计学差异。Ly+AML组与Ly-AML组首次化疗后完全缓解率比较无差异。结论儿童AML伴有淋巴系抗原CD19...