不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80 ℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法.方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜 40%胎牛血清 50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜 90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清 90%DMEM/F12.以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况.结果:A、C 2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24 h内出现较多贴壁细胞.结论:以5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好.     

胃癌围手术期并发症

全腹腔镜下吻合已成为腹腔镜全胃切除食管空肠吻合的常规方式[1, 2, 3, 4]。Overlap食管空肠吻合在各种腔内吻合中已成为主流。然而, 目前不少文献报道的腔内食管空肠吻合并发症发生率高于辅助切口吻合[1, 5]。因此, 如何安全、便捷地完成全腹腔镜下食管空肠Overlap吻合仍是当前的临床热点问题。对于如何提高腔镜下Overlap吻合的吻合质量、防治术中术后吻合并发症, 笔者团队在临床实践中总结出以下心得体会。     

量子点标记神经生长因子纳米化颗粒修饰羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠实验性脑损伤

目的:量子点是由Ⅱ-Ⅵ族元素或Ⅲ-Ⅴ族元素组成的纳米颗粒,因三维上受到量子限制而表现出独特的光学特征,其标记的神经生长因子纳米化颗粒由于是纳米级,易通过细胞生物膜.实验观察负载此纳米颗粒的羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤的效果.方法:实验于2007-01/10在郑州大学完成.①材料:SPF级健康成年Wistar大鼠40只,按体质量编号分为4组:神经生长因子细胞组、常规细胞组、损伤模型组、培养基对照组,10只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.羊膜间充质干细胞来自健康产妇胎盘羊膜,产妇对实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.量子点神经生长因子纳米粒由兰州大学功能有机分子化学国家重点实验室协助构建.②实验方法;向羊膜间充质干细胞中加入含10%胎牛血清、20 μg/L碱性成纤维生长因子的DMEM/F12培养基,置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,待细胞达80%～90%融合时胰酶消化传代.取传至第3代细胞,分别加入终浓度为20,40,60 μg/L的量子点标记神经生长因子纳米粒进行修饰处理72 h,并设立空白对照和空载量子点对照.4组大鼠均采用Feeney自由落体法建立脑损伤模型,神经生长因子细胞组于大鼠损伤部位注入经40 mg/L量子点标记神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞悬液10 μL(约4.0×108 个细胞),常规细胞组注入等量单纯量子点标记的羊膜间充质干细胞悬液,培养基对照组注入等量DMEM/F12细胞培养基,损伤模型组不给予移植操作.③实验评估:经量子点标记的神经生长因子纳米粒修饰后,MTT法检测细胞活性,荧光显微镜观察量子点在细胞内的分布,免疫细胞化学鉴定细胞分化.细胞移植后对各组大鼠运动及感觉功能进行评分,免疫组织化学染色及荧光显微镜观察量子点荧光化羊膜间充质干细胞在脑内存活分化和迁移情况.结果:①细胞生长率:培养72 h后与空白对照和空载量子点对照细胞比较,20,40,60 μg/L量子点标记的神经生长因子纳米粒组细胞生长率均呈增长趋势,40 μg/L时细胞无明显生长抑制,达60 μg/L时增长有所减慢.②体外量子点分布:荧光显微镜连续观察羊膜间充质干细胞.约6 h后开始摄入量子点标记的神经生长因子纳米粒,随着时间延长摄入量逐渐增加,于32 h荧光强度达高峰.③体外免疫细胞化学鉴定:经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞表达神经元烯醇化酶和神经丝蛋白,向神经元方向分化,但不表达胶质纤维酸性蛋白.④神经行为学检测结果:细胞移植后24h,各组神经行为学各项指标评分均基本相似(P＞0.05);移植后10,20 d,损伤模型组与培养基对照组无明显变化,神经生长因子细胞组、常规细胞组运动及感觉功能各项评分均显著降低(P＜0.05),且神经生长因子细胞组下降幅度明显强于常规细胞组(P＜0.05).⑤免疫组织化学和荧光检测结果:经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞在脑组织损伤区存活,并向周围迁移.结论:量子点是一种较好的细胞示踪剂,负载其标记的神经生长因子纳米化颗粒的羊膜间充质干细胞移植能够改善脑损伤大鼠神经功能.     

人羊膜间充质干细胞移植对荷瘤鼠C6胶质瘤生长的抑制

背景:实验室前期课题成果显示,脐血或羊膜间充质干细胞具有亲肿瘤及抑瘤特性。目的:探讨人羊膜间充质干细胞对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用。设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2008-06/09在郑州大学微生物与免疫教研室完成。材料:胎盘来源于郑州大学一附院妇产科健康剖宫产产妇,C6胶质瘤细胞株由北京神经外科研究所惠赠,10只BALR/c裸鼠由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。方法:无菌条件下取胎盘,分离部分羊膜,体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代用于实验。10只裸鼠背部双侧皮下注射含3×106个C6胶质瘤细胞的DMEM/F12培养基,建立双侧荷瘤鼠模型。成功造模后,模型对照组于裸鼠左侧皮下注射DMEM/F12培养基50μL,细胞移植组于同一裸鼠右侧皮下注射含2×106个羊膜间充质干细胞的等量DMEM/F12培养基。主要观察指标:肿瘤生长情况,周围组织浸润及新生血管形成等病理学观察,免疫组化法检测肿瘤中细胞周期素D1的表达。结果:细胞移植后14,21d,细胞移植组肿块体积明显小于模型对照组(F=54.127,P<0.05)。模型对照组瘤体呈结节状,部分肿瘤组织中心有坏死现象,内部有新生血管形成,肌层及皮肤浸润较明显,已达腹膜;细胞移植组瘤体分叶较少,无新生血管形成,仅有局部的皮肤浸润,未见肌层浸润。模型对照组细胞周期素D1蛋白呈阳性表达,而细胞移植组表达阳性率较低。结论:人羊膜间充质干细胞可明显抑制荷瘤鼠C6胶质瘤细胞的生长,同时可抑制细胞周期素D1蛋白的异常表达。     

基于掌上电脑实现护理计划的全程监控

目的探索智能护理计划的开发和护理计划全程监控的方法。方法在以患者为中心思想的指导下,应用软件开发等信息技术,设计基于医疗诊断和护理评估相对应的护理项目,为护理计划提供参考,借助掌上电脑(personal digital assistant,PDA)智能记录护理计划的全过程。结果基于PDA实现护理计划的全程监控,实现无纸化护理记录,缩短数据汇总时间,分类展示护理过程。结论 PDA不仅是扫码身份核对及患者体征采集的有效工具,而且可以全程无缝隙地监控护理过程。     

大网膜乳斑在胃癌腹膜转移中的作用

目的 观察大网膜乳斑在胃癌腹膜转移中的作用.方法 胃癌细胞株MFC,经Dil标记后,以每只小鼠1×10~4个Dil-MFCs注射到72只615小鼠腹腔内,不同时间取大网膜,观察Dil-MFCs在乳斑和非乳斑区的变化.结果 Dil-MFCs注入小鼠腹腔12 h后,Dil-MFCs开始大量出现在乳斑区;48 h,在巨噬细胞杀伤作用下,仅有少量细胞存活;72 h后,乳斑区可见增殖细胞团,形成微转移增殖灶.在非乳斑区,48 h可见散在少量的Dil-MFCs,72 h后散在Dil-MFCs增多,未发现增殖细胞团.腹腔注射14 d,乳斑区形成以乳斑为中心的团状转移灶,而非乳斑区则形成单细胞转移.结论 胃癌细胞在腹膜转移的早期阶段选择性地侵犯乳斑,乳斑转移灶是腹膜进一步转移的基础.     

福建省胃癌高中发区居民血清PG和幽门螺杆菌感染调查

目的了解福建省胃癌高发和中发区的居民血清胃蛋白酶原（PG）水平和幽门螺杆菌（Hp）感染状况。方法采集胃癌高发的长乐市和中发的同安区居民血清样本,以ELISA法检测血清胃蛋白酶原I、II（PG I、PG II）和Hp抗体。结果长乐市和同安区居民的血清PG I分别为110.8μg/L和131.0μg/L;PG II分别为13.9μg/L和14.7μg/L;两者的比值（PG I/II）分别为7.9和8.7;Hp感染率分别为49.6%和33.5%。结论两地居民的血清PG水平与Hp感染率有显著差异。     

残胃癌的临床病理学特征和预后

目的探讨残胃癌的临床病理学特征和外科治疗的效果及其预后。方法回顾性分析大连医科大学附属第一医院普通外科收治的42例残胃癌患者的临床资料。结果本组患者残胃癌发生部位以吻合口居多,组织学类型以低分化型癌为主。原手术方式为BillrothⅠ（BⅠ）式9例,BⅡ式33例。残胃癌的淋巴结转移,BⅠ式时No．1、No．3、No．10、No．11转移率大于30．0％,No．12转移率为22．2％;BⅡ式No．1、No．2、No．3、No．4及第2站的No．10、No．11、N0．12转移率均高于30．0％,No．14为25．0％。空肠系膜淋巴结转移率27．3％。BⅠ式患者胰腺浸润为66．7％．肝十二指肠韧带为33.3％;BⅡ式患者横结肠浸润为25．0％,胰腺浸润为75．0％。本组患者5年累计生存率为0．38：其中Ⅰ期0．86,Ⅱ期0．50,Ⅲ期0．13,Ⅳ期0,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论残胃癌的淋巴结转移和周围脏器浸润有其独特的方式和规律．外科手术是有效的治疗手段。     

残胃癌的淋巴结转移特点及外科治疗

Objective To explore the characteristics of lymph node metastasis in gastric stump cancer and the efficacy of surgical treatment. Methods The clinical data of 42 patients with gastric stump cancer (test group) and 56 patients with primary cancer in the upper stomach (control group) who were admitted to The First Affiliated Hospital of Dalian Medical University from January 1994 to January 2008 were retrospectively analyzed. All data were analyzed by t test and chi-square test. The survival of the patients and lymph node metastasis rate were analyzed using the Kaplan-Meier method and Log-rank test, respectively. Results The metastasis rates of lymph nodes 1-3 of the test group and control group were similar (43%-61%), with no significant difference between the 2 groups (χ2 = 0.752, 0. 833, 0. 678, P > 0. 05). The metastasis rates of lymph nodes 7-9 of the test group and control group were 22% , 18% , 25% and 46% , 25% , 30% , respectively, and this was signifi-cantly different between the 2 groups (χ2 = 2. 168, 3. 263, 5. 761, P < 0. 05). The metastasis rates of lymph nodes 10-14 were 47% , 36% , 31% , 20% and 25% in the test group, which were significantly higher than 33% , 34% , 19% , 6% and zero in the control group, respectively (χ2 =3.225, 1.883, 3.945, 4.137, 6.823, P <0.05). The metastasis rate of lymph node no. 16 was zero in the test group and 23% in the control group. The metastasis rate of jejunal mesenteric lymph nodes was 27% in the test group and zero in the control group. The accumulative 5-year survival rate of patients was 38% in the test group and 48% in the control group, and this was significantly different (χ2 =4. 165, P<0.05). The overall 5-year survival rate of patients with radical resection was not significantly different between degree A (54%) and B (57%) (χ2 = 0. 622, P > 0. 05). Conclusions Gastric stump cancer has a unique pattern in lymph node metastasis. Surgical resection is effective in improving the prognosis of patients with gastric stump cancer.     

肝豆状核变性活检组织的超微结构观察

目的观察肝豆状核变性肝细胞的超微结构改变,以利于丰富临床肝豆状核变性的病理诊断。方法应用透射电镜观察病变肝组织中肝细胞内细胞器和颗粒、肝间质及肝血窦超微结构。结果肝细胞内线粒体形态异常多样、可见特殊颗粒,肝细胞脂肪变性等。结论肝活体组织标本的电子显微镜检查,是一种早期发现和诊断肝豆状核变性的有效手段。