重组免疫毒素治疗实体瘤的研究进展

0引言 免疫毒素(Immunotoxins,ITs),是具有导向能力的分子(载体)和具有细胞毒性的分子(毒素)偶联而成的具有特异性细胞杀伤能力的杂合分子[1].     

人Tenascin-Raa454-1069蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的 表达和纯化带多聚组氨酸（6×His）标签的人Tenascin-R EGFL结构域（Tenascin-Raa454-1069）的融合蛋白,并制备相应的兔源性多克隆抗体（pAb）。方法 利用PCR从PMD18-T-TNR获得Tenascin-Raa454-1069编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-Tenascin-Raa454-1069融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清, Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果 成功构建了pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069原核表达载体,原核蛋白Tenascin-Raa454-1069以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的融合蛋白,蛋白浓度为1 600mg/L,制备的抗Tenascin-Raa454-1069多抗效价高达1∶1.6 ×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论 获得高纯度Tenascin-Raa454-1069蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究Tenascin-R的生物学功能提供实验基础。     

重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和铜绿假单胞菌外毒素A(PE)融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响,探索抗肿瘤血管生成的新方法.方法 采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型,9 d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组,采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化.免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAF)、CD31、PE的表达.分析肿瘤组织的微血管密度(MVD). 结果 注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达,而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达. 结论 VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略.     

重组血管内皮生长因子165-PE38融合基因的构建及其对人脐静脉内皮细胞的抑制作用

目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)基因和铜绿假单胞菌外毒素(PE38)基因真核融合表达载体,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响.方法 通过聚合酶链反应(PCR)获得VEGF165基因片段,通过Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ双酶切pRB391质粒获得PE38基因.构建两融合基因的真核表达载体plRES2-VEGF165-PE38-EGFP,转染293细胞后用逆转录(RT)-PCR及ELISA检测VEGF165-PE38融合蛋白在293细胞的表达,并检测转染细胞的培养上清对HUVECs的选择性细胞毒作用.结果 成功构建VEGF165-PE38融合基因真核表达载体,其可在293细胞表达,ELISA检测表明空质粒转染组、无转染组和重组质粒转染组VEGF浓度分别为(269.0±23.6)、(306.0±29.3)和(1390.0±136.6)ng/L.CCK-8和TUNEL检测表明重组质粒细胞转染上清对HUVECs具有较强的细胞抑制效应,凋亡细胞率分别为8.34%、7.69%和39.88%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 VEGF 165-PE38融合基因构建,表达及其功能的初步研究,为肿瘤血管内皮细胞的靶向治疗及临床应用奠定了基础.     

铁死亡：胶质母细胞瘤治疗的潜在方案

胶质母细胞瘤(GBM)是临床上常见且预后极差的胶质瘤类型, 具有复杂的耐药机制, 死亡率高, 生存期短, 侵袭性和复发是目前治疗的主要障碍。铁死亡是一种铁依赖性的大量脂质过氧化相关的调节性细胞死亡, 与各种类型肿瘤的发展和治疗反应相关。癌细胞依靠其强大的抗氧化能力来避免铁死亡, 因此, 探索铁死亡可能是预防肿瘤增殖和侵袭的有效策略。文章主要对铁死亡在GBM中的作用机制, 以及铁死亡作为潜在治疗靶点的研究进展进行综述。     

VEGF165-PE38重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达

目的构建血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38）基因的真核融合表达载体,研究其在HEK293细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验需要的VEGF165基因片段,通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP,重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后,用Lipofectamine2000脂质体转染HEK293细胞,然后用RT—PCR及ELISA法检测VEGF165-PE38融合蛋白在HEK293细胞的表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实,VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP,RT—PCR及ELISA法检测证实重组基因可在HEK293细胞表达。结论VEGF165-PE38融合基因可在HEK293细胞中表达,为进-步研究其对肿瘤血管内皮细胞的靶向毒性及临床应用奠定基础。     

喉癌功能保全性手术对嗓音的影响

喉癌的功能保全性手术方式有多种,不同的手术方式对嗓音会产生不同的影响,因此,了解不同的手术方式对嗓音的影响有利于术后嗓音的恢复,提高生活质量,进一步探索更佳的手术方式。     

喉癌功能保全性手术对嗓音的影响

喉癌的功能保全性手术方式有多种,不同的手术方式对嗓音会产生不同的影响,因此,了解不同的手术方式对嗓音的影响有利于术后嗓音的恢复,提高生活质量,进一步探索更佳的手术方式。     

NADPH氧化酶调节U251胶质瘤细胞的生长和凋亡

目的 研究NADPH氧化酶(NOX)对U251胶质瘤细胞存活、增殖和凋亡的影响.方法 RT-PCR检测U251胶质瘤细胞系NOX基因的表达.分别使用5、15、25 μmol/LNOX抑制剂DPI及10 mmol/L抗氧化剂Tiron处理U251细胞,24h后alamarBlue法检测U251细胞的增殖,流式细胞术检测细胞内活性氧的产生和U251细胞的凋亡情况,并与正常对照组(不做任何处理的1的U251细胞进行比较.结果 U251细胞系中明显表达NOX4 mRNA.各浓度DPI及10 mmol/Ltiron均能抑制U251胶质瘤细胞的生长,诱导U251细胞凋亡.与正常对照组比较,各浓度DPI处理组的U251细胞内的活性氧簇(ROS)均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05); 结论 NOX4可能是胶质瘤细胞内ROS生产的主要来源.NOX4可能通过增加细胞内ROS水平并作用于其下游调节分子,对胶质瘤细胞的生长、存活和凋亡起着重要的调节作用.     

显微手术治疗小脑幕脑膜瘤临床价值分析

目的 研究小脑幕脑膜瘤的治疗中应用显微手术治疗方法的临床价值.方法 小脑幕脑膜瘤病例53例,研究应用显微手术治疗的手术方法、小脑幕脑膜瘤的切除程度及治疗后疗效.分析显微手术后的小脑幕脑膜瘤患者的病死率,死亡原因.比较治疗前、治疗后Spitzer指数,评价患者生活改观情况.结果 小脑幕脑膜瘤患者在经过显微手术治疗后未出现死亡病例;小脑幕脑膜瘤患者肿瘤全切除率情况巨大肿瘤＜大肿瘤＜中型肿瘤＜小型肿瘤;治疗前Spitzer指数好9例,良好14例,治疗后好26例,良好14例,治疗前、治疗后Spitzer指数差异有统计学意义（x2=19.15,P＜0.01）.结论 显微手术治疗在针对与小脑幕脑膜瘤病例的治疗过程中有着较好的临床疗效,能够较大的改善患者的生活质量.