通用型基因悬浮芯片检测生物恐怖细菌的方法研究

Objective To develop a fast, high-throughput screening method with suspension array technique for simultaneous detection of biothreat bacteria. Methods 16 S rDNA universal primers for Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Brucella spp. and Burkholderia pseudomallei were selected to amplify corresponding regions and the genus-specific or species-specific probes were designed. After amplification of chromosomal DNA by 16 S rDNA primers 341A and 519B,the PCR products were detected by suspension array technique. The sensitivity, specificity, reproducibility and detection power were also analyzed. Results After PCR amplification by 16 S rDNA primers and specific probe hybridization,the target microorganisms could be identified at genus level, cross reaction was recognized in the same genus. The detection sensitivity of the assay was 1.5 pg/μl (Burkholderia pseudomallei),20 pg/μl (Brucella spp.), 7 pg/μl (Bacillus anthracis), 0.1 pg/μ1 (Francisella tularensis), and 1.1 pg/μl (Yersinia pestis),respectively. The coefficient of variation for 15 test of different probes was ranged from 5.18% to 17.88%,it showed good reproducibility. The assay could correctly identify Bacillus anthracis and Yersinia pestis strains in simulated white powder samples. Conclusion The suspension array technique could be served as an opening screening method for biothreat bacteria rapid detection.     

液相蛋白芯片法与BAS-ELISA法检测病原抗体的方法比较

〔目的〕分别建立流感病毒、禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS病毒、结核分支杆菌等发热病原抗体的液相蛋白芯片定量检测方法,比较液相蛋白芯片方法与生物素—亲和素系统（BAS-ELISA）方法的检测能力。〔方法〕用诊断抗原包被编码微球,应用间接法检测模式,建立液相蛋白芯片定量检测病原抗体的方法,用液相蛋白芯片和BAS-ELISA方法检测相当样品并进行比较分析。〔结果〕建立的液相蛋白芯片分别检测流感、禽流感、鼠疫、SARS、结核特异性抗体,最低检测限分别为5.68ng/ml、1.50ng/ml、50.30pg/ml、105.57pg/ml、14.06pg/ml。液相蛋白芯片方法和BSA-ELISA方法的检测性能,在一定浓度范围内,对于相同样品2种方法有很好的相关性。〔结论〕与BAS-ELISA方法相比,液相蛋白芯片检测灵敏度高,动态范围宽,为同时检测多种病原抗体、任意组合检测目标物提供了平台。     

基于症候群监测初步建立我国口岸入境人员传染病 监测网络及其2009-2011年监测结果分析

目的 了解我国入境人群发热症候群和腹泻症候群的病原谱构成数据,促进我国入境传染病网络实验室监测网络技术平台建立和完善.方法通过口岸体温监测、医学巡查、主动申报、健康体检等手段,于2009年5月-2011年3月间,联合9个直属检验检疫局所属口岸建立监测哨点并对筛选出的入境发热及腹泻人员进行样本采集、统一病原谱检测及数据分...     

合成肽技术用于流感病毒快速免疫诊断的分析

高致病性禽流感病毒感染人类病例发现后,因其大规模危害性和病毒高度变异性决定了对流感病毒的研究必须不断加强；也决定了针对流感病毒这类高变异病毒的识别诊断技术研究必须是动态的、灵活的和快速反应型,才能符合当前新发传染病不断出现的诊断需要。合成肽技术的简便易行使之成为能够针对流感病毒变异作出快速反应,并迅速建立有效的快速检测方法的首选技术平台。为此,结合合成肽技术发展的特点,就其针对不同亚型流感病毒的病原学和血清学精确诊断优势作一综述。     

检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素ELISA法的建立

〔目的〕建立一种快速、敏感、特异检测土拉弗朗西斯菌的免疫学方法。〔方法〕应用生物素-亲和素标记系统,建立双抗体夹心ELISA方法,检测土拉弗朗西斯菌,并进行"模拟样品"的检测判定其定量检测能力。〔结果〕建立的生物素—亲和素ELISA检测土拉弗朗西斯菌的方法具有很好的敏感性和特异性,检测FopA蛋白的灵敏度达到6ng/ml;批内变异系数1.96%～6.64%,批间变异系数8.94%～10.02%,重复性好;检测不同浓度马秋波GP2蛋白、天花M1R蛋白、黄热YF-E-D3蛋白、禽流感NP蛋白、登革病毒Deng-E-D3蛋白和普氏立克次体120N蛋白,未发现交叉反应;对"模拟样品"中土拉弗朗西斯菌FopA蛋白的检测回收率为91.7%～125.0%。〔结论〕应用生物化的FopA多抗与酶标亲合素结合,建立了检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素放大酶联免疫吸附法(BSA-ELISA),具有较好的灵敏度和特异性,在病原菌的识别、快速检测、应对生物恐怖威胁中具有广阔的应用前景。     

三种实时荧光RT-PCR试剂在检测甲型H1N1流感病毒中的应用

〔目的〕结合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的检测引物和探针,探索合适的实时荧光RT-PCR试剂应用于国境口岸甲型H1N1流感病毒疑似标本的检测。〔方法〕通过对连续梯度稀释阳性对照品进行检测,从而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript 3种常用实时荧光RT-PCR试剂的灵敏度、信号强度、反应效率等因素。〔结果〕3种试剂的检测下限均为1:1000倍稀释阳性对照品;AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript检测的线性斜率分别为-5.517、5.214和-4.600;信号强度上Qiagen QuantiTect相对于其他2种明显偏弱。〔结论〕为国境口岸输入性甲型H1N1流感病例的检测和监控提供了有力的技术保障。     

编码微球悬浮芯片与改良ELISA鼠疫杆菌检测方法的比较研究

[目的]寻求快速、准确、简便的鼠疫杆菌检测方法。[方法]分别建立鼠疫杆菌编码微球悬浮芯片检测方法和改良ELISA方法,并进行比较。[结果]悬浮芯片对F1抗原最低可以检测到840 pg/ml,检测鼠疫杆菌到1×10~3cfu/ml；用改良ELISA法检测,对F1最低可以检测到53ng/ml,检测鼠疫杆菌到1×10~4cfu/ml。[结论]悬浮芯片检测比ELISA具有更高检测灵敏度,并且具有高效、快速、敏感、特异、低成本等优点。     

2011年中越河口口岸入境发热人员呼吸道病毒监测结果分析

目的掌握中越河口口岸人境发热人员呼吸道病毒感染情况。方法2011年采集入境发热人员咽拭子,用RT—PCR和PCR方法检测8种呼吸道病毒,将阳性样本的PCR产物直接测序,利用MEGA4软件进行序列对比和系统进化分析。结果共采集中国籍和越南籍入境发热人员咽拭子样本66份,检出3型副流感病毒1份,人腺病毒3份,其中2份为基因2型,1份为基因7型;中国籍入境发热人员阳性检出率为10．53％,越南籍入境发热人员阳性检出率为4．26％。结论初步明确了河口口岸入境发热人员的呼吸道病毒感染情况,中越河口口岸入境人员呼吸道病毒感染率较高,应加强传染病防控知识宣传教育。     

中俄双边口岸鼠类及体表寄生虫调查

2007年采用在口岸的港区、仓库、垃圾堆与自然生境的林地、草地、牧场、田地、堤坝处布置板夹与弓形夹的方法,对中俄边境中方(黑河市、逊克市、抚远市、饶河市)以及俄罗斯境内的3个边境口岸(布拉戈申斯维克、波利亚科沃镇、哈巴罗夫斯克市)进行了鼠类及体表寄生虫调查.结果显示,中国的4个口岸总捕获率1.8％,其中自然生境总捕获率...     

秦皇岛口岸首例输入性登革热病例调查及处置报告

登革热（dengue fever,DF）是由登革病毒（denguevirus,DENV）引起,经伊蚊传播的一种急性虫媒传染病[1]。是我国《传染病防治法》规定的乙类传染病。近年来我国口岸多次检出输入性登革热病例[2-7]。但是河北省至今未发现输入性或本地登革热病例[8]。