热损伤角质形成细胞培养上清对真皮成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达的影响

目的 观察热损(创)伤后角质形成细胞(KC)培养上清对真皮成纤维细胞(Fb)增殖与胶原mRNA表达的影响.方法 建立KC热损伤模型,收集正常及热损伤12 h后培养上清配制不同浓度的细胞条件培养液;分离培养人正常Fb,实验组分别加入含不同浓度的细胞条件培养液,以单纯DMEM组为对照,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定24 h后真皮成纤维细胞增殖;分别以流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定DMEM组、50%浓度条件培养液组相同时间Fb生长周期及Ⅰ型胶原mRNA表达.结果 细胞增殖测定:热损伤上清(10%、30%、50%、70%)条件培养液组A值(0.151±0.004、0.165±0.009、0.195±0.006、0.202±0.008)均高于正常上清(10%、30%、50%、70%)条件培养液组(0.144±0.004,0.159±0.002,0.180±0.005,0.181±0.006)及对照组(0.144±0.007),除10%浓度组外各实验组A值与对照组比较差异均有统计学意义(t值分别为:4.01、11.42、11.41;P＜0.05),热损伤上清与正常上清条件培养液组比较:50%、70%浓度组间差异有统计学意义(t值分别为:2.03、1.94;P＜0.05);热损伤上清条件培养液50%与70%浓度组间差异无统计学意义(t值为1.34;P＞0.05).细胞周期测定见50%浓度热损伤上清组可明显促进Fb通过G1/S及S/G2限制点,S期及G2/M期细胞与对照组比较增多,G0/G1期细胞与对照组比较明显减少(t值分别为:5.87、11.3、4.86;P＜0.05).Ⅰ型胶原mRNA表达测定中,50%浓度热损伤上清组与对照组比较表达明显上调,差异亦有统计学意义(t=1.72;P＜0.05).结论 热损(创)伤后KC上清液可促进Fb的增殖,同时可上调Ⅰ型胶原mRNA的表达.

Abstract：

Objective To observe the effects of heat injured keratinocyte (KC) supematant on proliferation activity and collagen mRNA expression of the normal fibroblast (Fb).Methods A model of heat injured KC in vitro was reproduced,the supernatants of heat injured KC were collected and used as conditioned medium,and DMEM was used as control medium.Normal Fb were treated with different concentrations of conditioned medium.After treatment for 24 h,the proliferation activity,cell cycle and collagen Ⅰ mRNA levels in treated Fb were measured by using methylthiazol tetrazolium ( MTT),flow cytometry (FCM) and real-time polymerase chain reaction (PCR) techniques.Results As compared with the control group,the absorbance (A) values of MTT in treated groups were significantly increased (t = 4.01,11.42,11.41 ;P ＜0.05),except in 10% group (t = 1.34,P ＞0.05).As compared with normal supernatant treated group (0.159 ± 0.002,0.180 ± 0.005,0.181 ± 0.006),the A values in 50% and 70% conditioned medium group (0.195 ± 0.006,0.202 ± 0.008 ) were significantly increased ( t = 2.03,1.94;P ＜0.05).The 50% conditioned medium increased the percentage of G1 to S and S to G2 phase transit.As compared with control group,the number of cells in S and G2/M phase was increased significantly (t =5.87,11.3;P＜0.05 ) and that in G0/G1 phase decreased significantly ( t = 4.86;P＜0.05 ).Real-time PCR revealed that the collagen Ⅰ mRNA level in 50% conditioned medium group was significantly up-regulated (t= 1.72;P＜0.05 ) as compared with control group.Conclusion Heat injured KC supernatant may promote the proliferation of dermal Fb,and up-regulate the mRNA expression of collagen.     

烫伤大鼠肠道P物质含量和P物质能神经的观察分析

以３０％ＴＢＳＡⅢ度烫伤大鼠为模型，采用ＲＩＡ和ＩＨＣ的方法，动态观察了伤后７２小时大鼠空肠免疫活性Ｐ物质（ｉＳＰ）的含量及绒毛内Ｐ物质－免疫反应（ＳＰ－ＩＲ）阳性神经纤维的变化。结果发现：①烫伤大鼠空肠内ｉＳＰ伤后１小时出现显著升高，４小时仍处于高水平状态；８小时后明显下降，伤后７２小时一直处于低水平状态。②绒毛内ＳＰ－ＩＲ阳性神经纤维在形态、分布密度和纤维内ＳＰ－ＩＲ物质的含量都有明显的改变。图像分析定量结果表明：绒毛内ＳＰ－ＩＲ阳性神经纤维分布密度，伤后１小时明显增加，随后减少，４８小时再次出现增加；神经纤维内ＳＰ－ＩＲ阳性物质伤后１小时及４小时明显升高，１２小时明显下降，２４小时后再次升高。实验结果说明：烫伤后大鼠空肠内Ｐ物质出现应激性释放与消耗，Ｐ物质可能参与了烫伤后大鼠的肠道损伤；肠绒毛内的Ｐ物质能神经纤维是肠粘膜屏障损伤的直接参与因素。     

高压液—固相微型催化反应器—色谱仪联合装置

对于催化剂快速初评及催化动力学的研究,微型催化反应器装置是很有效的工具。可是目前一般均限于气—固相的反应过程。为了适应某些液—固相反应过程的开发,研制了本装置。操作压力最高可达6MPa(可调),催化剂装量仅为0.5—2克。在连续流动的反应过程中,还能进行在线取样分析,并用微处理机自动打印结果。     

硝酸镧块染法显示肠粘膜屏障通透性的电镜技术

硝酸镧块染法显示肠粘膜屏障通透性的电镜技术史颖辉，李学荣，胡大海，谷法有，陈壁，刘健（西安第四军医大学电镜室，西京医院烧伤科．西安７１００３２）我们将镧示踪法用于肠粘膜屏障的研究．取得了良好的效果，现介绍如下．１材料和方法１．１动物及模型用纯系ＳＤ大...     

深Ⅱ度烧伤早期及愈后增生性瘢痕组织中p16基因表达的甲基化调控

目的：了解深Ⅱ度烧伤愈合早期及愈合后不同时期增生性瘢痕基因组中抑癌基因p16甲基化程度．方法：深Ⅱ度烧伤临床标本取材在烧伤后17，30，44d及愈后4，8，18，32mo增生性瘢痕组织，每组5例，用DNA甲基化特异性PCR(methylation—specific PCR，MS PCR)动态观察基因组中p16基因甲基化情况．结果：与正常组织相比，p16基因甲基化水平在深Ⅱ度烧伤愈合前17，30d组织中显增高；在愈后4mo增生性瘢痕组织中，p16基因的甲基化水平显降低，在8mo以后的增生性瘢痕组织中逐渐增高，瘢痕增生时间越长，甲基化程度越高．结论：p16基因在烧伤愈合早期高甲基化可能与促进愈合有关，在4mo增生瘢痕中低甲基化可能对快速的瘢痕增生有抑制作用，8mo以后逐渐增高的甲基化水平可能是瘢痕继续增生的重要原因．     

水胶体敷料治疗小面积Ⅱ度烧伤的临床研究

目的: 评价水胶体敷料治疗小面积Ⅱ度烧伤临床疗效及可行性.方法: 烧伤面积(total body burn area,TBSA)<10%的Ⅱ度烧伤患者30例,选择深度、面积相近的两处创面自身对照,实验组用水胶体敷料,对照组用凡士林油纱治疗,分别观察两组在创面愈合时间、医师工作量、治疗费用、患者疼痛反应方面的差别.结果: 两组间在4项观察指标上均有显著差别,实验组水胶体敷料比对照组凡士林油纱创面愈合时间平均快4 d;医师工作量明显减少;医疗费用下降;患者较舒适.结论: 水胶体敷料优于传统敷料,是目前治疗小面积Ⅱ度烧伤的理想敷料.     

应用MTT法观察人皮肤培养细胞的形态学特征

目的：在创面愈合细胞生物学研究时,应用ＭＴＴ比色法细胞活性和生长增殖;探讨及时观察细胞生长状态下的形态变化的可行性。方法：人角朊细胞（ＫＨ）和人真皮成纤维细胞（ＨＤＦ）不同生长密度时加入ＭＴＴ溶液后,观察不同时间点细胞的形态,测定细胞内形成镜下可见蓝色甲及胞外形成针状结晶的时间;比较镜下观察时间长短对ＭＴＴ比色法最终值的影响。结果：在不同生长密度条件下,加入ＭＴＴ溶液后,ＨＫＴ ＨＤＦ于３７℃孵育     

电烧伤343例分析

０引言电烧伤是一种特殊损伤,虽然烧伤面积不大,但毁损严重,为一种立体损伤．截肢率高,后遗症严重,临床治疗棘手．随着电力工业的迅速发展,电在生产和生活中广泛应用,其发病率在逐年增加．我院４０ａ来,电烧伤患者占烧伤患者的６．２９％．其中大部分为电接触烧伤...     

重组融合饰胶蛋白拮抗转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用

目的　观察重组谷胱甘肽 S-转移酶与饰胶蛋白的融合蛋白 (GST- Decorin)对转化生长因子β1 刺激增生性瘢痕成纤维细胞的作用 ,探索瘢痕治疗的新方法 .方法　采用 RT- PCR技术克隆饰胶蛋白 (Decorin) c DNA并连接到 p GEX- 4T- 1载体上 ,大肠杆菌内表达 GST- Decorin;体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,加入 1∶ 6.2 5 ,1∶ 12 .5 0 ,1∶ 2 5 .0 0 ,1∶ 5 0 .0 0 ,1∶ 10 0 .0 0稀释度的 GST- Decorin,经四唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖速度 ;进一步将 2 mg/L 的 TGR- β1 或同时与 1∶ 12 .5 0的 GST-Decorin加入培养基内 ,…     

经吻合支跨区供血的腹部轴型皮瓣分期转移修复前臂环形毁损性电烧伤

目的：探讨毁损性上肢高压电烧伤的修复方法。方法：共8例8个肢体，前臂环形毁损性电烧伤，烧伤部位全层皮肤及部分深部组织坏死。应用患肢同侧腹部轴型皮瓣携带经吻合支跨区供血的皮瓣分期转移修复前臂毁损性电烧伤创面。结果：本组全部病例，未发生皮瓣坏死，修复后上肢外形良好。结论：腹部轴型皮瓣，经过一次延迟术后分期转移，通过血管细小吻合支反流供血，能够以一期皮瓣内重建的循环系统形成跨区供血的反流皮瓣，可以获得两组以上的皮动脉供血范围的皮瓣面积。其手术技术相对简单，皮瓣血运可靠，能提供满足腕部、前臂皮肤软组织广泛缺损所需的组织量，皮瓣厚薄适中，修复后外形良好。