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61.
目的 建立RT—PCR检测SARS冠状病毒基因的方法,用于早期诊断。方法 对临床确诊的20例SARS患的血、鼻拭子、咽拭子、尿、便等69份标本进行总RNA提取,反转录成cDNA后再以本研究室自行设计合成的一对特异引物进行PCR扩增,2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物,出现140bp带为SARS病毒阳性。采用测序仪对140bp带进行特异性检测,并进行灵敏度试验。结果 140bp扩增序列与公布的SARS病毒的基因序列完全一致,灵敏度可达10个拷贝。SARS患II份尿标本中6份检出140bp阳性扩增带,8份便标本中检出3份阳性,从15份鼻拭子和15份咽拭子中分别检出6份和5份阳性标本,血清15份、白细胞5份分别检出2份阳性。20例SARS患中送检1至4种标本检测到SARS病毒阳性共15例(75%)。结论 本研究建立的RT—PCR方法灵敏、特异,可用于早期诊断。尿、便标本中的SARS病毒检出率较高且取材简便、病人无痛,是取材的极好选择。每例待测患最好同时取其尿、便、拭子、血等多种标本,可以提高SARS病毒检出率。 相似文献
62.
轻稀土元素抑癌作用机理研究 总被引:22,自引:3,他引:22
以体外培养的人胃癌细胞PAMC82和人白血病细胞K562为研究对象,观察了轻稀土元素对癌细胞在软琼脂中生长能力、细胞骨架微管和微丝、钙调素水平及相关抑癌基因表达的影响。轻稀土元素可使癌细胞微管结构发生类似正常细胞的转变,在软琼脂中的生长能力下降,癌细胞内钙调素水平下降,抑癌基因p53、p16和p21表达水平上升。 相似文献
63.
亚砷酸钠诱发人外周血淋巴细胞染色体断裂位点研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在体外培养的人外周血淋巴细胞中加入亚砷酸钠,能使染色体断裂频率显著上升。染色体断裂位点与原癌基因和肿瘤染色体异常位点在同一区带的占72.9%,其中断裂频率较高的位点是:lp32,lq25,lq31,lq42,2p23,2q31,3p14,9q22,19p13,19q13。表明在砷致癌过程中,染色体的变化起着重要作用。 相似文献
64.
目的 为寻找对多发性骨髓瘤新的治疗方法 ,从基因工程乳酸乳球菌提纯苯丙氨酸解氨酶(PAL),探讨PAL酶对多发性骨髓瘤U266细胞系的影响作用.方法 利用已构建成功的高表达PAL的基因工程乳酸乳球菌,结合物理、化学、生物学等方法 ,设计一种简便、高效提纯PAL酶的方法.培养人多发性骨髓瘤U266细胞系,在不同浓度基因工程PAL酶作用后.以MTT法检测细胞增生;流式细胞仪检测细胞凋亡;HPLC检测细胞培养液中苯丙氨酸(phe)浓度.结果 ①用本研究所设计方法 从基因工程乳酸乳球菌NZ3900/pNZ8149-palart中提取的PAL酶比活性可达同量原菌的92.5%;②0.1~2.0U/ml的PAL提取液作用24h后能显著抑制U266细胞生长,并呈剂量依赖性;③只添加提取过程所用试剂的对照组细胞生长无明显抑制;④0.1U/ml、0.2U/ml、2.0 U/ml的PAL酶作用24h后的MM细胞早期凋亡率分别为(21.92±0.95)%、(50.64±0.86)%、(90.86±2.91)%;⑤PAL酶作用24h后细胞培养液中phe浓度随PAL酶活性增加而降低.结论 本研究所设计方法 可从基因工程乳酸菌高效提取PAL酶;提取过程中的添加试剂对MM细胞生长无明显抑制作用;PAL酶能显著抑制MM细胞体外生长,诱导细胞早期凋亡;PAL酶可降低培养液中的phe水平,且phe浓度与MM细胞生长的抑制作用具有相关性. 相似文献
65.
目的 探讨上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)、干扰素诱导蛋白10(IP-10)和血管内皮生长因子(VEGF)的基因多态性与特发性肺纤维化(IPF)的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性技术,检测60例住院IPF患者(IPF组)和60例年龄、性别、吸烟情况匹配的外伤、骨折住院患者(对照组)的ENA-78(-156G/C)、IP-10(-1596C/T)和VEGF(+405G/C)的基因多态性,以比值比(OR)和95%可信区间(CI)表示相对风险度.结果 IPF组ENA-78 GC+CC基因型频率(20.0%)和C等位基因频率(12.7%)均明显高于对照组[分别为6.7%(P=0.032)和3.3%(P=0.008)],携带C等位基因的个体患IPF的相对风险度明显增加(OR=4.23,95%C/为1.35~13.20);IP-10 CT+CT基因型频率(10.0%)和T等位基因频率(5.8%)均明显低于对照组[分别为26.7%(P=0.018)和14.2%(P=0.031)],携带T等位基因的个体患IPF的相对风险度降低(OR=0.38,95%C/为0.15~0.95).2组VEGF(+405G/C)基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义.结论 ENA-78(-156C)等位基因是IPF的危险因素,IP-10(-1596T)等位基因是IPF的保护性因素,VEGF(+405G/C)基因多态性与IPF的发生可能无相关性. 相似文献
66.
目的对肥厚型心肌病患者进行TNNI3K基因进行测序分析,探讨此范围内有无基因突变位点。方法对56例无血缘关系的肥厚型心肌病患者及30名健康对照者的TNNI3K基因第18~19及23外显子进行聚合酶链反应扩增产物,设计内引物直接测序,观察有无基因突变,并对发生突变的患者进行临床特点分析。结果肥厚型心肌病患者及正常对照者在TNNI3K基因第18~19及23外显子未发现突变位点。结论目前在中国人群肥厚型心肌病患者中未发现TNNI3K基因突变位点。 相似文献
67.
目的探讨新疆蒙古族健康人群中FV Leiden(凝血因子V)突变的发生率。方法应用PCR-限制性片段长度多态性技术(PCR—restriction fragment length polymorphism,PCR—RFLP)对新疆地区132例健康个体(其中50例蒙古族和82例汉族)进行FV Leiden基因突变研究分析。结果新疆蒙古族和汉族健康个体均未检出FV Leiden基因突变类型包括纯合子和杂合子。结论新疆地区蒙古族人群和汉族健康人群均未见到FV Leiden基因突变,提示FV Leiden突变可能不是新疆地区蒙古族和汉族健康人群以及冠心病人群血栓形成的主要危险因素。 相似文献
68.
目的建立凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子22的 Xba Ⅰ多态位点高特异的基因连锁分析法,并应用于血友病 A(HA)家系中孕妇携带者检测及产前基因诊断。方法用长距离 PCR 特异性扩增206个无血缘关系个体中 FⅧ基因内含子226.2 kb 片段并进行Ⅹba Ⅰ酶切,计算Ⅹba Ⅰ多态性位点的基因频率和多态信息量;用内含子22倒位检测及 FⅧ基因内Ⅹba Ⅰ,Bcl Ⅰ,Hind Ⅲ和(CA)n 二核苷酸重复序列多态性位点和 FⅧ基因外 DXS52多态性位点对20个 HA 家系进行间接基因诊断。结果ⅩbaⅠ多态性位点的基因频率和多态信息量分别是0.5475和0.4955;20个 HA 家系中,7个为内含子22倒位,13个非倒位家系中有6个家系Ⅹha Ⅰ均提供多态信息,其中2个家系只能用Ⅹba Ⅰ作出分子诊断,诊断率达46.15%;两个或两个以上连锁分析方法均提供多态信息的有8个家系。结论改进的 FⅧ基因内Ⅹba Ⅰ多态位点是一个特异性高,信息量大的分子诊断标志。联合用22内含子倒位及Ⅹba Ⅰ等5种间接检测方法大大地提高了 HA 基因诊断率,是防止患儿出生,阻断致病基因传递的有效措施。 相似文献
69.
子宫内膜癌p16/MTS1基因失活的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨p16/MTS1基因在子官内膜癌组织的表达及意义.方法:采用显微切割-聚合酶链反应方法,对29例子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中p16/MTS1基因纯合缺失进行检测.并用Fisher精确检验的方法,对p16/MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析.结果:29例子宫内膜癌组织,p16/MTS1基因纯合缺失率为24.14%.Ⅰ期纯合缺失率为24.00%,Ⅱ期纯合缺失率为33.33%.结论:p16/MTS1基因纯合缺失与子宫内膜癌的发生有关. 相似文献
70.
目的建立唐氏综合征患者永生细胞系,为唐氏综合征的基因诊断提供标准品。方法采集唐氏综合征患者外周血,采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞和加环孢霉素A抑制T淋巴细胞的技术,建立永生淋巴母细胞系。用细胞遗传学方法、实时荧光定量PCR及短串联重复序列(STR)多态性分析技术检测其建系前后的遗传特性及稳定性。结果建系成功,经过传代、冻存和复苏,建系后第10代染色体核型和DNA标志未发生改变。建系前后染色体核型均为47,XX,+21。多重荧光相对定量PCR鉴定,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株的△Ct值均在-2.55±3s范围内,与正常对照相比△Ct值范围无重叠。21号染色体上的STR基因座D21S11多态性分析表明,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株均有同样的3种基因型。结论染色体核型和DNA分析表明,唐氏综合征患者永生细胞系建立前后遗传特点一致,且稳定,可用作基因诊断试剂盒产品质量检测、质量控制的标准品。 相似文献