Detection of factor Ⅷ intron 1 inversion in severe haemophilia A

Objective Screening the intron 1 inversion of factor Ⅷ (FⅧ) in the population of severe haemophilia A(HA) in China and performing carrier detection and prenatal diagnosis. Methods Using LD-PCR to detect intron 22 inversions and multiple-PCR within two tubes to intron 1 inversions in sereve HA patients. Carrier detection and prenatal diagnosis were performed in affected families. Linkage analysis and DNA sequencing were used to verify these tests. Results One hundred and eighteen patients were seven diagnosed as intron 22 inversions and 7 were intron 1 inversions out of 247 severe HA patients. The prevalence of the intron 1 inversion in Chinese severe haemophilia A patients was 2. 8% (7/247). Six women from family A and 2 from family B were diagnosed as carriers. One fetus from family A was affected fetus. Conclusion Intron 1 inversion could be detected directly by multiple-PCR within two tubes. This method made the strategy more perfective in carrier and prenatal diagnosis of haemophilia A.     

谷胱甘肽S-转移酶P1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的　明确谷胱甘肽S 转移酶P1(GSTP1)基因多态性与中国人慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法　对COPD进行分子流行病学初步研究 ,采用病例对照研究设计 ,用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)分析的方法检测 10 0对年龄、性别匹配的COPD患者和健康对照者GSTP1外显子 5基因多态性 ,用Logistic回归计算比值比 (OR)和 95 %可信区间 (CI)。结果　经调整年龄、性别、体重指数和吸烟年支数 ,COPD组和对照组GSTP1基因多态性没有明显差异(P值均 >0 0 5 )。结论　GSTP1基因多态性与中国COPD的易感性可能没有明显关系。     

三氧化二砷改变多发性骨髓瘤细胞基因表达的研究

目的　研究三氧化二砷(As2O3 )对多发性骨髓瘤(MM)细胞基因表达的影响,探讨As2O3 治疗MM的分子机制。方法　将MMU266细胞分成对照组和实验组。取培养48h的2组细胞提取总RNA后分离mRNA,应用抑制性差减杂交法分离差异表达基因,并连接于pGEM TEasyVector,转化大肠杆菌JM109,构成差减cDNA文库,经蓝白斑筛选后挑选白色菌落,提取质粒,序列测定后进行同源性比较分析。结果　第1次差减分离出5个下调的基因:①氨基肽酶N;②人类肿瘤翻译控制蛋白1;③人类ATP合成酶A链;④信号识别颗粒A10; ⑤线粒体ATP合成酶/ATP酶亚单位6。第2次差减分离出4个表达上调的基因:①钙结合蛋白A10;②角质素6A;③相对分子质量为45×103 的含MIP重复成分的剪接因子;④多聚腺苷酸结合蛋白。结论　As2O3 可能通过改变上述基因的表达,发挥其抑制MM细胞增殖、促进凋亡和诱导分化的作用。     

白血病p16基因失活的研究

为探讨白血病p16基因失活的发生率及其与疾病预后的关系,对48例初发或复发的白血病进行了p16基因失活研究。首先应用多重聚合酶链反应(MPCR)方法扩增p16基因纯合子缺失,然后用限制性内切酶-PCR方法检测p16基因甲基化。研究结果表明,48例患者中有p16基因失活者10例(占20.4％),其中p16纯合子缺失者5例(2例伴有9p丢失),p16基因甲基化者5例。有p16基因失活者,病情进展迅速,治疗效果差,患者在短期内死亡。结论提示:p16基因失活在部分白血病的发生、发展中起重要作用;有p16基因失活者预后较差;p16基因失活的检测对于判断预后具有重要意义。     

多重探针连接依赖式扩增快速检测染色体非整倍体异常

目的评价多重探针连接依赖式扩增（multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA）在常见染色体非整倍体异常及其在产前诊断中的应用价值。方法收集经染色体核型分析证实的12例21三体、1例（45，X）、1例（47，XYY）患者，8名正常健康人外周血标本和4例21三体胎儿脐带血标本及1例21三体胎儿羊水、7例核型正常胎儿羊水，共计34份样本。提取外周血或脐带血基因组DNA，羊水标本蛋白酶K消化获得细胞裂解液，采用MLPA技术检测34份标本13、18、21、X和Y染色体拷贝数的变化。结果48h内即可完成样本分析。除1份离心后含大量红细胞的羊水标本经MLPA分析后提示（69，XXY）或母血污染外，其余33份外周血、脐带血或羊水标本报告均与染色体核型分析结果一致，临床符合率97．1％。正常二倍体标本Ratio值除Y染色体相对拷贝数变异略大外，其余均接近于1．0。经单因素方差分析，21三体和正常二倍体标本的Ratio均值间差异有统计学意义（F=298．906，P=0．000）。结论高灵敏度MLPA技术结合计算机辅助数据分析方法操作简便、快速、可自动化，是诊断常见染色体非整倍体异常的可靠方法。     

不同人群唾液中变形链球菌的定量检测及其意义

目的 建立定量检测唾液样本中变形链球菌和细菌总数的方法 ,比较变形链球菌和细胞总数的存在与不同人群中龋齿患病率的关系.方法 针对染色体DNA印迹法检测变形链球菌中出现的14 kb的HaeⅢ酶切片段,合成特异性引物(Sm~*),运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术定量检测变形链球菌;对单纯随机抽样方法 抽取的99份唾液标本按照龋齿牙数是否为0分为龋齿组和无龋组,龋齿组72人,无龋组27人(包括从未患过龋齿者和曾患龋齿但已经过治疗和填充的无新鲜龋齿者),分别进行变形链球菌和细菌总量的检测及统计学分析.结果引物Sm~*仅对变形链球菌有特异性,定量PCR可检测的下限为0.1 μg/L;细菌总数在龋齿组和无龋组分别为51.4×10~8个/L和221.6×10~8个/L,变形链球菌占细菌总数比值分别为0.0193和0.0059,细菌总数和变形链球菌所占比值在两组间差异有统计学意义(P=0.022).结论 引物Sm~*可用于变形链球菌的定量检测;唾液中变形链球菌与总细菌数的比值与龋齿患病率相关.     

新疆地区汉族人群血管紧张素转换酶基因多态性分析

血管紧张素转换酶（ACE）是调节心血管和泌尿过程的肾素血管紧张素系统的关键酶之一。人类ACE基因位于17号染色体长臂q23位点，长度为21kb，包括26个外显子和25个内含子，其中第16内含子存在一段287bp的DNA序列的插入（I）或缺失（D），构成ACE基因I／D多态性。这种基因多态性分布，将有助于从分子水平对心血管疾病的发病率与不同种族间的差异提供依据。国内各地关于ACE基因多态性的研究已有报道，但在新疆地区尚未见系统报道。本文旨在了解新疆地区汉族健康者ACE基因I／D多态性分布。     

肥厚型心肌病患者血管紧张素转换酶基因型分布

为探讨血管紧张素Ｉ转换酶(ＡＣＥ)基因插入/缺失(Ｉ/Ｄ)多态性与国人肥本研究受北京市医学重点学科扶植项目资助作者单位:100020北京,首都医科大学附属北京红十字朝阳医院厚型心肌病(ＨＣＭ)和高血压合并左心室肥厚(ＨＨ)的相关情况进行此研究。一、资料与方法1.ＨＣＭ组:共40例,男22例、女18例,年龄14～70(53.4±19.8)岁。诊断符合临床和超声心动图诊断标准。平均室间隔厚度2.0ｃｍ(1.4～2.5ｃｍ)。左室流出道压差为(43.2±24.7)ｍｍＨｇ(1ｍｍＨｇ=0.133ｋＰａ)。除外其它疾病所致心肌肥厚,其中梗阻型28例,非梗阻型12例。已排除Ｂ肌球蛋…     

新疆不同民族冠心病患者eNOS基因894G/T多态性研究

目的：探讨新疆不同民族冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）人群内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因多态性及相关性。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）技术对新疆地区272例不同民族冠心病患者（汉族42例、维吾尔族71例、哈萨克族73例、蒙古族86例）进行eNOS基因894G/T多态性分析。结果：eNOS基因多态性在被检新疆不同民族人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。新疆汉族、维吾尔族、哈萨克族、蒙古族冠心病患者的eNOS基因894G/T多态性GG、GT、TT基因型频率分布分别为76%、14%、10%;75%、4%、21%;59%、21%、20%;81%、7%、12%,G和T等位基因分布频率分别为83%、17%;77%、23%;69%、31%;85%、15%。汉族、蒙古族与维吾尔族、哈萨克族的TT基因型频率比较差异有统计学意义（P﹤0.05）,其余基因型频率、G和T等位基因频率比较差异均无统计学意义（P﹥0.05）。结论：eNOS基因894G/T位点的突变可能与新疆维吾尔族与哈萨克族冠心病有关,但目前还不能完全排除新疆汉族、蒙古族冠心病的发生与eNOS基因894G/T突变的相关性。     

新疆蒙古族人群血管紧张素转换酶基因多态性与冠心病的相关性研究

目的：探讨新疆蒙古族人群血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的相关性。方法：新疆奎屯地区41例蒙古族冠心病患者和82名健康人入选,应用PCR联合限制性内切酶法检测所有对象ACE基因多态性。结果：ACE基因多态性在被检测的冠心病和健康人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。蒙古族健康人群的ACE基因多态性DD、II、ID基因型频率分别为24%、49%、27%,D和I等位基因频率分别为62%和39%。冠心病患者ACE基因多态性DD、II、ID基因型频率分别为36%、44%、20%,D和I等位基因频率分别为54%和46%。两组比较差异均无统计学意义（P均〉0.05）,且男女间比较差异也无统计学意义（P均〉0.05）。结论：ACE基因多态性可能与新疆奎屯地区蒙古族人群冠心病的发生无相关性。