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11.
目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α地中海贫血基因型的技术。方法运用SYBRGreen1和ABI7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBRQPCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cutoff值定为PCR结果阳性。将PCR产物重组到T载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBRQPCR得出标准曲线。从而定量未知标本。结果优化了3个SYBRQPCR反应的引物及其浓度,热循环条件等。检测SEA等位基因的PCR产物长800bp,Tm=82.5℃±1℃。αα等位基因的PCR产物长206bp,Tm=83.0℃±1℃。非SEA等位基因的PCR产物长436bp,Tm=84.0℃±1℃。重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上。联合运用3个SYBRQPCR反应可以为SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH病、α地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断。结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用。  相似文献   
12.
端粒酶在骨髓增生异常综合征中动态改变的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
我们用端粒酶序列重复扩增银染法:[1]检测了骨髓增生异常综合征(MDS)及转为白血病后的端粒酶活性,探讨端粒酶活性在MDS中的临床意义。 一、资料和方法 1.对象:20例均为我院1998年4月~1999年12月的住院或门诊成人患者,初发MDS12例,其中难治性贫血(RA)3例,原始细胞过多型(RAEB)6例,原始细胞过多转化型(RAEB-T)2例,慢性粒单核细胞白血病(CMML)1例,MDS转为急性白血病(MDS-AL)8例。20例中男女各10例,年龄18~76岁,平均年龄47岁,参照文献[2]而…  相似文献   
13.
目的研究新疆维吾尔族人群血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性分布情况。方法采用PCR技术,对新疆地区维吾尔族健康人群和汉族人作ACE I/D基因型检测,分类计数进行统计学分析。结果维吾尔族人群ACE基因频率DD型,D I型和D等位基因频率高于本地区汉族人群,种族内ACE基因多态性的分布与性别无关。结论维吾尔族人群ACE基因I/D多态性与本地区汉族人群和日本人群不同,与欧美人群相近。  相似文献   
14.
目的 探讨新疆汉族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性与冠心病的相关性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),检测新疆汉族82例正常个体和42例冠心病患者eNOS基因G894T多态性.结果 新疆汉族正常个体及冠心病患者的eNOS基因G894T多态性GG、GT、TT基因型频率分布分别为0.84、0.12、0.04和0.76、0.14、0.10,G和T等位基因分布频率分别为0.90、0.10和0.83、0.17,冠心病患者有GT基因型频率下降,TT基因型频率升高趋势,但差异不显著(x2=1.532 8,P>0.05).结论 eNOS基因G894T多态性,可能与新疆汉族冠心病有关.  相似文献   
15.
本工作研究了灵敏度极高的聚合酶链反应(PCR)技术在结核杆菌基因诊断中的可靠性,以及尘肺者中结核杆菌感染率,经动物标本PCR检测与尸体病理解剖结果对照研究,结核杆菌PCR诊断技术特异性可达100%,敏感性约62.5%,准确度为82.4%,97例尘肺患者痰标本PCR检测,发现结核杆菌感染率为24.7%。  相似文献   
16.
多发性骨髓瘤患者的p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
p16及p15基因是细胞周期依赖激酶 (CDK4/6 )的抑制因子 ,通过抑制pRb(视网膜母细胞基因表达产物 )的磷酸化 ,阻滞细胞进入S期。若p16及p15基因发生纯合子缺失、甲基化或点突变 ,导致其功能失活 ,CDK4/6与cyclinD1结合 ,活化pRb ,使细胞进入DNA合成期 ,肿瘤细胞进行无序增殖 ,形成克隆性疾病。在多发性骨髓瘤 (MM)的基因学研究中发现p15和p16在其发生中起重要作用[1 3] 。为此 ,我们探讨了p16及p15基因在MM中失活的发生率及临床意义。材料和方法1 研究对象 初次诊断的MM患者 31例 ,所有患者的诊断均…  相似文献   
17.
探讨P16/MTS1基因蛋白在子宫内膜癌组织及癌旁正常组织的表达及意义。采用免疫组化ABC法,对29例子宫内膜癌组织、癌旁组织中P16/MTS1基因进行检测。并用SYSTAT软件,对P16/MTS1基因表达与临床病理关系进行分析。结果:29例子宫内膜癌组织,P16/MTS1基因蛋白表达率为51.72%。高分化癌P16/MTS1基因阳性表达率高于中低分化癌(P<0.05)。结论:P16/MTS1基因与子宫内膜癌的发生有关。  相似文献   
18.
聚合酶链反应检测同源性变形链球菌   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立一种简便,快速,具有特异性检测和识别变形链球菌的方法。方法:根据葡聚糖基因设计的具有特异性针对变形链球菌的寡核苷酸引物,通过聚合酶链反应扩增一个188bp的DNA片段以检测变链菌株和从人的口腔提取的菌斑和唾液标本。结果:这种聚合酶链反应的方法检测变链菌具有特异性和敏感性。结论:葡聚糖酶聚合酶链反应适合于特异性的检测和识别变形链球菌。  相似文献   
19.
目的 探讨SYBR-Green I实时荧光PCR(SYBR-PCR)结合融解曲线分析(D.C)技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-地贫)基因诊断的价值.方法 对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--SEA、-a3.7、-α4.2及非缺失型(αα)4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断.同时运用单管多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认.结果 22个家系中6个家系检出有--SEA或-α3.7携带者,其中东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)7例,右侧缺失携带者(-α3.7/αα)3例,东南亚型缺失与右侧缺失双重杂合子(--SEA/-α3.7)1例.2例为胎儿产前诊断.其中1例为Bart's水肿胎儿(--SEA/--SEA),另1例为东南亚型缺失携带者(--SEA/αα).用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致.结论 SYBR-PCR结合D.C技术在α-地贫的基因诊断、携带者检出及产前诊断方面具有实用价值.  相似文献   
20.
稀土化合物杀伤癌细胞分子机理研究初探   总被引:1,自引:1,他引:1  
稀土化合物杀伤癌细胞分子机理研究初探纪云晶,肖白,张丽帼,吕有勇,孙梅通过对稀土在农、牧养殖业上应用的卫生毒理学安全评价,非放射性稀土化合物(下简称稀土)经口饲,未见明显毒性反应和致癌、致畸效应。近年来进一步研究证实,稀土对抗肿瘤有可喜的苗头,并有提...  相似文献   
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