微囊包膜猪胰岛异种移植的实验与临床研究

目的 探讨微囊化新生猪胰岛作为临床异种胰岛移植供体来源治疗Ⅰ型糖尿病的可能性。方法 利用微囊技术包膜新生猪胰岛细胞后体外培养，比较微囊化及未微囊化新生猪胰岛细胞的胰岛素分泌能力和胰岛素刺激释放试验。采用腹腔镜技术，对３例Ⅰ型糖尿病患者进行微囊新生猪胰岛异种移植治疗，观察移植前后空腹血糖、Ｃ肽和胰岛素用量的变化。结果 微囊与未微囊化新生猪胰岛在体外培养中各项检测指标差异无显著意义，两者均具有良好的生物活性。临床移植术后，２例受体的Ｃ肽峰值较移植前分别升高１１及２３倍，其中１例胰岛素用量减少６３％，１例完全停用胰岛素，成为胰岛素不依赖者。此２例的移植胰岛在受体内保持有功能存活已达８０ｄ。结论 海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠微囊化新生猪胰岛生物活性良好，能在人体内功能存活并产生疗效，将可能是临床上异种胰岛移植的一个较好     

五指山小型猪胰岛对糖尿病大鼠的治疗作用

目的:探讨小型猪胰岛治疗糖尿病大鼠的作用和功效.方法:成年健康♂五指山小型猪和普通家猪作为胰岛供体.胰腺获取后经胶原酶消化后进行胰岛提取纯化,纯化后的胰岛通过门静脉移植到糖尿病SPF大鼠的肝内,术后每天肌注环孢菌素(20mg/kg)作为免疫抑制剂,并通过检测糖尿病大鼠的血糖变化和肝脏组织学检查来判定胰岛移植后的存活情况和纠正胰岛移植的效果.结果:五指山小型猪胰腺消化后胰岛产量为4608 IEQ/g±593 IEQ/g,纯化后为3820 IEQ/g±718 IEQ/g,纯度为85%,取自屠宰场猪胰岛产量为纯化前为3500 IEQ/g±625 IEQ/g,纯化后为2720 IEQ/g±435 IEQ/g,纯度为80%.两组84.6%糖尿病大鼠在移植术后第1天,血糖降至正常.维持时间:小型猪胰岛术后存活时间为3-5d(中位存活时间:4.5d),普通家猪胰岛存活时间为2-4d(中位存活时间:3.7d).经Kaplan-Meier分析,两组胰岛存活时间无差别.结论:封闭群五指山小型猪分离纯化后的胰岛产量高,功能良好,可以纠正糖尿病大鼠的高血糖,适合作为异种胰岛移植的理想供体.     

乳腺癌辅助化疗致闭经相关因素分析

目的：分析绝经前乳腺癌患者化疗致闭经（ CIA）的相关因素。方法回顾性分析79例绝经前乳腺癌行化疗患者（化疗次数≥4次）,随访化疗后患者月经情况,分析年龄、病理分期、ER、PR、HER2状态、化疗方案、内分泌药物运用对绝经前乳腺癌化疗患者CIA的影响。结果79例乳腺癌患者中61例（77．2％）发生CIA,18例（22．8％）未发生CIA。单因素分析结果显示：年龄与 CIA 发生相关,AUC 0．693（P＝0.013,95％ CI：0.552～0.833）,年龄影响CIA的最佳临界值为38岁。 CIA 发生与病理分期、ER、PR、Her2状态、化疗方案无关（P＞0.05）,与是否接受内分泌治疗可能相关（P＝0.047）。多因素分析结果显示：年龄与CIA的发生明显相关（P＝0.012,OR＝6.036,95％CI：1.489～24.469）,与其他各因素无明显相关（P＞0.05）。结论年龄≥38岁是绝经前乳腺癌化疗患者发生CIA的独立危险因素。     

微囊化新生猪胰岛细胞体外培养的研究

海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠生物微胶囊(简称APA微胶囊),具有生物半透膜性,葡萄糖与胰岛素能通过该膜,而抗体与淋巴细胞则不能,避免了机体对移植物的排异反应,使移植物体内生存时间延长。此项技术是目前最具前景的免疫隔离技术。本文利用胶元酶消化和体外培养的方法制备新生猪胰岛细胞,用微囊包膜技术,将胰岛细胞包裹,体外培养。放射免疫法测定培养液中胰岛素的含量,比较微囊化及未微囊化新生猪胰岛细胞胰岛素分泌能力和胰岛素刺激释放试验、组织学检查。证实二者差异不显著,均具有良好的生物活性。胰岛细胞团在微囊内分化发育良好,并不断分泌胰岛素,囊内外均未见纤维细胞生长。APA微囊及其制备技术对胰岛细胞活性和分泌功能无明显影响。微囊包膜后胰岛细胞的活性和分泌功能良好,微囊包膜新生猪将为临床异种移植提供良好的供体来源。     

免疫隔离微囊与胰岛异种移植

胰岛是人体内一个专门负责调节营养物质储存和动员的器官。它分泌多种激素,其中最重要的是胰岛素(INSULIN)。胰岛素是人体内唯一的促进营养物质,特别是糖类物质储存的激素。简单地说,胰岛素能降低血糖。人体每天食入粮食,如米、面等,均含有丰富的淀粉等糖类物质,糖类物质经消化     

利用QQ群的PBL教学法在普外科临床实习中的应用

利用QQ群网络平台在普外临床实习中进行PBL教学是一种全新而先进的理念。可以无限延展有限课堂;培养学生表达能力,加强师生互动交流,达到教学资料交流共享,培养学生个性,加强团队创新协作,改进我国普通外科医学人才的培养模式。利用QQ网络平台的PBL教学方式较传统教学法具有一定的优势。     

成年猪胰岛细胞的分离纯化及其微囊包裹

目的:探索成年猪胰岛细胞分离纯化的有效方法,获取具有免疫隔离作用的小微囊化胰岛细胞。方法:①用胶原酶灌注,人工、静态的方法分离成年猪胰腺;用Ficoll400不连续密度梯度离心纯化猪胰岛,从形态和功能学(体外培养)鉴别分离细胞的活力。②用自制的静电微囊发生装置、采用纯化的海藻酸钠和多聚赖氨酸材料制备小微囊化胰岛细胞,并鉴别微囊胰岛的活力和微囊膜的通透性。结果:①每只猪胰腺可获得(292647±79909)个胰岛,纯化前胰岛产量为(5360±1779)IEQ/g胰腺组织,纯化后产量(3239±1116)IEQ/g胰腺组织,胰岛纯度为90%。胰岛组织学结构完整,体外培养胰岛素分泌良好,葡萄糖刺激释放反应明显,显示了良好的细胞活力。②微囊化胰岛细胞圆形,直径315-350μm,表面光滑,大小相对均一,其内可见1-2个胰岛团。微囊胰岛也具良好活力,微囊膜通透性良好。结论:①本方法分离成年猪胰岛能获得较高数量和具有良好活力的猪胰岛细胞。②自制的静电微囊发生装置能制成具有生物活性的大小相对均一,圆形,表面光滑的小APA微囊化胰岛细胞(直径315-350μm),为进行肝内微囊化胰岛移植提供了可能。     

内源性miR103A通过抑制RGS2的表达从而影响乳腺癌的转移

目的 探索内源性miR-103A通过作用于抑癌基因RGS2启动子进而抑制其表达从而影响乳腺癌的转移。方法 将从乳腺癌及正常乳腺组织中提取的RNA进行小分子RNA的深度测序检测乳腺癌中小分子RNA的表达,通过生物信息学分析miR103A的目标基因以及其作用位点,用miRNA103A的mimics转染乳腺癌细胞后用QPCR及Western-Blot检测受到影响的肿瘤相关基因,QPCR检测miR103A以及RGS2在乳腺癌及正常癌组织中的差异表达。结果 小分子RNA深度测序发现miR103A在乳腺癌及乳腺组织有明显的差异表达且在乳腺癌中高表达,miR103A被发现在伴有淋巴结转移以及HER2+的乳腺癌组织中高表达;生物信息学分析发现miR103A序列能与RGS2的启动子区匹配,且miR103A下调了RGS2 mRNA及蛋白水平;miR103A还上调肿瘤转移相关的MMP9、VGEF、snail、Vimentin的表达,下调了E-cadherin的表达;27例成对临床样本检测发现RGS2在乳腺癌低表达。结论 miR103A通过作用于抑癌基因RGS2的启动子从而下调其表达影响乳腺癌的转移。     

ER β1基因及其剪切变异体真核表达载体的构建与鉴定

目的应用基因克隆技术构建雌激素受体B1（ERβ1）及其5-8外显子缺失变异体ERβ△5-8（文中简称ERβ△）,为ERβ功能的研究奠定基础。方法组织中提取总RNA,RT—PCR法扩增基因ERp1及ERβ△,限制性酶切并克隆于以带EGFP绿色荧光基因及Myc报告基因的非融合真核细胞表达质粒IRES2-EGFP,菌群转化扩增后琼脂糖凝胶电泳,限制性酶切后行DNA测序鉴定。结果PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功。测序表明ERβ1长度为1593bp,ERβ△长度为972bp,与GeneBank上公布的蛋白编码区序列一致。结论成功构建ERβ1基因及其剪切变异体ERBA真核表达载体。     

Mammotome旋切术在乳腺良性疾病中的应用

目的 探讨超声引导下的Mammotome旋切系统在乳腺良性疾病治疗中的应用价值.方法 回顾性分析2004年8月～2005年8月41例临床诊断为乳腺良性病灶,在超声引导下经Mammotome旋切治疗后的疗效.结果 37例为乳腺纤维腺瘤,4例为乳腺腺病.手术时间20～45min.无1例操作失败.41例随访,10天随访除2例有轻度皮下淤血、局部轻度凹陷外,均无感染;1年随访切口瘢痕均不明显,较好地保持了原有的乳房外形.结论 Mammotome旋切手术治疗乳腺良性疾病具有切除完整、创伤小,复发低等优点,并较好地保持了原有的乳房外形,临床效果可靠.