角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉

目的 观察自体角膜缘干细胞移植联合丝裂霉素C治疗复发件翼状胬肉的疗效.方法 将58例(62眼)复发性翼状胬肉患者随机分为2组,治疗组(32例,35跟)采用角膜缘于细胞移植联合应用丝裂霉素C;对照组(26例,27眼)单纯采用角膜缘干细胞移植术治疗.术后随访6～30个月并比较疗效.结果 治疗组1眼冉复发,再复发率2.86%;对照组5眼再复发,再复发率18.52%,两组差异具有统计学意义(P<0.05).治疗组角膜创面上皮平均愈合时间为(8.34 ±2.38)d,对照组为(7.21±2.55)d,差异无统计学意义(P>0.05).两组均未发现严重并发症.结论 角膜缘干细胞移植联合应用丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉再复发率低,并发症少,为复发性翼状胬肉安全和有效的治疗方法 .     

人乳头状瘤病毒11型E7抗原HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的功能鉴定

目的 筛选和鉴定人乳头状瘤病毒11型E7抗原(HPVllE7)HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位.方法 预测HPVllE7抗原HLA-A*0201限制性CTL表位并合成相对应的表位多肽和四聚体(tetramer),即HPVllE7 7-15(TLKDIVLDL)、15-23(LQPPDPVGL)、47-55(PLTQHYQIL)、81-89(DLLLGTLNI)和82-90(LLLGTLNIV).从健康HLA-A*0201成人外周血单一核细胞诱导树突状细胞(DC)并负载上述表位多肽,流式细胞技术检测DC成熟分化标记及ELISA法检测DC分泌的IL-12;成熟DC负载各组多肽后观察DC激活T淋巴细胞的效应,ELISA法检测T细胞分泌的IFN-γ;四聚体检测抗原特异性CD8+ T细胞及乳酸脱氢酶(LDH)释放法评价DC诱导的CTL对靶细胞的特异性体外杀伤效应.结果 预测的5条HPVllE7表位多肽均能诱导DC的成熟分化;E7 7-15、82-90和15-23多肽负载的DC能激活T淋巴细胞分泌高水平IFN-γ;E7 7-15多肽负载的DC能刺激特异性tetramer+CD8+细胞增殖且其诱导的CTL对HPVllE7/293细胞产生高效率的特异性杀伤作用(P<0.05).结论 筛选并鉴定出1条HPVllE7HLA-A*0201限制性CTL表位E7 7-15(TLKDIVLDL),负载该表位肽的DC体外可诱导高效、特异性的CTL效应,抗原性较强,有可能作为HPV感染治疗用肽疫苗的候选表位.     

氯化铵裂解法与非裂解法提取人脂肪干细胞生物学特性的差异

文题释义： 氯化铵红细胞裂解液：含有氯化铵成分的红细胞裂解液,此种裂解液被广泛应用于骨髓干细胞及脂肪干细胞的提取,其目的是去除组织内的红细胞,使目的细胞群进一步纯化。其作用机制为：红细胞内有大量碳酸酐酶,可自发将NH₃转化为NH₄⁺,CO₂转化为HCO₃^-,促使胞外NH₃和CO₂连续内流造成细胞裂解。 基质血管成分：脂肪组织中除了含有成熟脂肪细胞外,还包含一组混杂的细胞群,即基质血管成分。基质血管成分包括血管内皮细胞、脂肪祖细胞、成纤维细胞、周细胞、脂肪干细胞,造血干细胞、红细胞等,其具有多向分化潜能及促进组织血管再生等功能,在组织及器官的再生、修复中具有极大的应用前景。 背景：脂肪干细胞的提取及纯化流程尚未建立统一标准。最常用的纯化脂肪干细胞的方法是利用红细胞裂解液处理基质血管成分。但这一步骤是否对脂肪干细胞存在不良影响仍缺乏证据,是否有利于未来临床应用仍有待探讨。 目的：比较氯化铵红细胞裂解液法和非裂解法提取脂肪干细胞的效率,并进一步比较两种方法提取脂肪干细胞的生物学特性。 方法：收集吸脂手术患者脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化后,利用或不用氯化铵红细胞裂解液对基质血管成分进行纯化,Muse^TM细胞状态分析仪对活细胞计数及活细胞比例评估;将基质血管成分接种后培养人脂肪干细胞至第2代,光学显微镜观察脂肪干细胞形态,流式细胞学分析脂肪干细胞表型,CCK-8法绘制细胞增殖曲线,成脂及成骨培养基诱导后油红O及茜素红染色法分别评估成脂、成骨分化能力。该实验经中国医学科学院整形外科医院伦理委员会批准,并与患者签署相关知情同意书。 结果与结论：①与裂解组相比,非裂解组提取即刻的基质血管成分中非红活细胞数更多,活细胞百分比更大;②两组脂肪干细胞均呈梭形、鱼群状排列;③两组细胞均高表达CD90、CD73、CD105等细胞表面抗原,低表达或不表达CD11b、CD34、CD19、CD45、HLA-DR等细胞表面抗原;④非裂解组细胞增殖速度更快,成脂及成骨能力两组间无明显区别;⑤结果表明,利用氯化铵红细胞裂解液法提取基质血管成分降低了脂肪干细胞提取效率,抑制了脂肪干细胞增殖能力。非裂解过程不影响脂肪干细胞表型及成脂、成骨分化能力。因此不建议在人脂肪干细胞提取过程中进行氯化铵法红细胞裂解。 ORCID: 0000-0002-8958-4975(李梓菲) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

混合性神经内分泌-非神经内分泌肿瘤的基因改变和靶向治疗的研究进展

混合性神经内分泌-非神经内分泌肿瘤(mixed neuroendocrine-non-neuroendocrine neoplasm, MiNEN)属于罕见肿瘤,包含至少30%的神经内分泌成分和非神经内分泌成分。在过去的30年里,人们提出了不同的术语来定义MiNEN,但均不能准确描述该疾病。此外,有关MiNEN的基础研究和管理方案已经取得一些成果,但是MiNEN的分子特征和组织分类仍然不十分清楚,这显著影响了肿瘤的治疗方案的确定。为此,该文总结归纳相关文献,对这类肿瘤的基因改变和治疗靶点进行综述。     

尖锐湿疣患者外周血Thl/Th2及Tc1/Tc2亚群的检测及意义

Objective To investigate the role of T-helper (Th) and cytotoxic T (Tc) lymphocyte polarization in the pathogenesis of condyloma acuminatum (CA) and its correlation with recurrence. Methods Three-colour immunofluorescent flow cytometry was used to detect the proportion of CD3+ CD8-/IFN-γ+ (Th1),CD3+CD8-/IL-4+ (Th2), CD3+ CD8+/IFN-γ+ (Tel) and CD3+ CD8+/IL-4+ (Tc2) cells in the peripheral blood of CA patients and health controls. Results Compared to health controls, CA patients showed a decreased number of Thl (P < 0.01) and Tcl cells (P < 0.05), as well as a decreased Th1/Th2 and Tc1/Tc2 ratio (P <0.05). Furthermore, in 15 recurrent CA patients the ratio of Th1/Th2 was remarkably decreased (P < 0.01),while the ratio of Tc1/Tc2 had no significant change in comparison with health controls. Conclusion The decrease of Th1 and Tc1 subsets results in relative Th2 and Tc2 predominance, and this tendency is more significant in recurrent CA patients. The Th1 to Th2 and Te1 to Tc2 shifts in CA patients could be responsible for the fact that human papilloma virus (HPV) is hard to be eliminated.     

脊髓N-myc下游调节基因2对奥沙利铂诱导神经病理性疼痛及星形胶质细胞分化影响

目的 探讨星形胶质细胞N-myc下游调节基因2(NDRG2)是否参与奥沙利珀诱导的神经病理性疼痛(OINP),并探索其对脊髓星形胶质细胞表型分化的影响。方法 选取清洁级(SPF级)雄性SD大鼠32只。实验分为两部分,第一部分,将16只雄性大鼠随机分为Vehicle组(腹腔注射5%葡萄糖溶液,n=8)和Oxaliplatin组(腹腔注射奥沙利铂溶液,n=8);第二部分,将16只雄性大鼠随机分为对照腺病毒+OINP组(AD-control+OINP组,鞘内注射AD-control,腹腔注射奥沙利铂溶液,n=8)和Ndrg2干扰腺病毒+OINP组(AD-Ndrg2-RNAi+OINP组,鞘内注射AD-Ndrg2-RNAi,腹腔注射奥沙利铂溶液,n=8)。行为学检测各组大鼠机械缩足阈值(MWT)、热缩足潜伏期(TWL)。蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测星形胶质细胞标记物GFAP、A1型星形胶质细胞标记物C3、A2型星形胶质细胞标记物S100A10及NDRG2的蛋白及mRNA表达,免疫荧光检测GFAP和C3、NDRG2的荧光表达。结果 腹腔注射奥沙利铂7、11、18、25 d, Veh...     

永生化人前软骨干细胞株的构建

背景：前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。 目的：以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。 方法：采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。 结果与结论：贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P < 0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P < 0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性, 成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400 bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560 bp处有一特异形扩增条带, 未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。     

p-Akt在恶性黑素瘤中的表达及意义探讨

目的 探讨p-Akt（Ser-473）表达水平与恶性黑素瘤的临床和病理学参数的关系。方法 应用免疫组化方法检测21例恶性黑素瘤患者手术切除的肿瘤标本中p-Akt的表达,以21例色素痣作对照,分析其与恶性黑素瘤的临床特征及预后的关系。结果 p-Akt在转移性黑素瘤的表达阳性率（67%）高于原发性黑素瘤（56%）,而在色素痣中表达阴性,三组间的表达阳性率差异有统计学意义（P < 0.05）。肿瘤浸润深度及年龄与p-Akt表达率呈显著正相关（r值分别为0.41和0.53,P均 < 0.05）。p-Akt的强表达与恶性黑素瘤患者的5年生存率显著相关（r = 0.41,P < 0.05）,而高危黑素瘤（浸润厚度 > 1.5 mm）患者中p-Akt的强表达与生存率的相关性更为显著（OR = 2.586,95%可信区间为0.906 ～ 7.382,P < 0.05）。结论 p-Akt的表达随着恶性黑素瘤的浸润程度和进展显著提高,并与患者的5年生存率密切相关。此外,p-Akt可能有利于判断高危黑素瘤患者的预后。     

井穴放血对中风72小时内患者临床症状的影响

目的观察手十二井穴刺络放血对中风发病72小时内患者的临床症状及神经功能恢复的影响。方法以50例中风发病72小时内的患者为观察对象,随机分为刺络组与对照组,两组均进行正常治疗,刺络组另加十二井穴刺络放血。结果治疗组和对照组的临床症状及功能的恢复总有效率分别96%和84%,并且有显著性差异（P〈0.05）。结论十二井穴刺络放血对中风发病72小时内患者的临床症状及神经功能恢复有明显作用。     

雷公藤内酯醇对人Th17细胞分化的调节作用

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的人Th17细胞分化的调节作用.方法:在体外将不同浓度雷公藤内酯醇作用于人外周血单一核细胞、纯化的CD4+T细胞和CD4+CD45RA-记忆性T细胞,采用MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞术分析单个细胞内表达IL-17和IFN-γ的频数,ELISA法测定细胞分泌IL-17和IFN-γ的水平.结果:雷公藤内酯醇以剂量依赖的方式抑制淋巴细胞增殖、细胞内IL-17的表达频数和细胞产生IL-17的水平.此外,雷公藤内酯醇对细胞内IFN-γ的表达和产生也有抑制作用.结论:雷公藤内酯醇可抑制人TH17细胞的分化,这可能是雷公藤内酯醇免疫抑制和抗炎作用的机制之一.