多肽dhvar4的抗细菌活性和细胞毒性研究

目的研究多肽dhvar4的抗细菌活性及其细胞毒性。方法人工合成多肽dhvar4,测定不同质量浓度dhvar4作用后的细菌生长曲线,检测dhvar4抗细菌活性;用MTT法检测不同质量浓度dhvar4对L—02、ECV-304、293和3T3细胞的细胞毒性;用溶血性实验检测不同质量浓度dhvar4对血红细胞的溶血性。结果dhvar4在4μg／ml质量浓度以上对金黄色葡萄球菌BAA42和肠球菌EF36418的生长有明显的抑制作用。在150μg／ml高质量浓度条件下,哺乳动物正常细胞存活率为68％～92％,其LD50大于150μg／ml。最大检测质量浓度(180μg／ml)下,dhvar4对血红细胞几乎没有溶血作用。结论dhvar4具有抗细菌作用,无明显细胞毒性和溶血性,具有开发成为安全高效抗细菌药物的潜在价值。     

HPLC法间接测定人和猪红细胞硫嘌呤甲基转移酶活性及其差异分析

目的建立测定红细胞内6-甲基-巯基嘌呤(6-MMP)浓度的HPLC法,换算出红细胞和肝组织中硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性,探讨猪与人肝脏TPMT酶活性的差异。方法使用岛津2010C系列高效液相色谱仪,SymmetryC18(150mm×3.9mm,5μm)色谱柱。样品用乙酸乙酯萃取后进样,0.1%的乙酸∶甲醇为流动相梯度洗脱,总流速1.0mL/min,280nm波长检测,内标法定量。结果标准曲线在6.25~100nmol/mL范围内有良好线性,方法回收率为98.08%~100.05%,萃取回收率为88.1%~92.4%,批内RSD为1.0%~1.5%,批间RSD为1.0%~4.4%。测定显示人TPMT活性为(17.45±3.62)U,家猪TPMT活性为(7.65±1.35)U,版纳猪TPMT活性为(8.73±1.55)U。结论本方法适用于临床和科研中测定人和猪红细胞和肝组织TPMT活性。实验结果提示猪对嘌呤类药物的代谢能力低于人类。     

miR-146a-5p在不明原因复发性流产蜕膜组织中的表达及其意义

目的:探讨miR-146a-5p在不明原因复发性流产(URSA)蜕膜组织中的表达变化并分析其可能作用机制.方法:选取2019年1—12月在成都西囡妇科医院因URSA行清宫术患者(URSA组)及因无生育计划行人工流产术的正常妊娠者(正常妊娠组)各10例,收集2组所有对象的蜕膜组织.比较2组蜕膜组织中miR-146a-5p...     

猪内源性逆转录病毒基因在版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的整合和表达研究

目的 检测猪内源性逆转录病毒（PERV）在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法 通过提取已建立的版纳微型猪近交系（BMI）骨髓问充质干细胞（MSCs）永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT—PCR方法检测PERV前病毒gag、pol和env基因的整合和表达,并对PERV的亚型进行鉴定。结果 从原代BMI—MSCs至连续传代到150、180代的BMI—MSCs细胞基因组中都检测到了PERV前病毒DNA的整合及其mRNA的表达．PERV亚型为PERV—A、B型。结论 PERV在BMI近交过程中及猪细胞体外长期传代过程中均未消扔,PFRV基因已经整合入其天然宿主的基因组内并能稳定表达。     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响。方法SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组（TPN组）、普通肠内营养组（EN组）和生态免疫肠内营养组（EEN组）。建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达。结果（1）电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义（P〈0.05）。（3）EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组.差异有统计学意义（P〈0.05）。（4）EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位。     

胰岛移植研究进展

随着免疫学、分子生物学、遗传学等相关学科不断发展，目前胰岛移植研究取得了相当大的进展。由于细胞来源，免疫损伤的避免，免疫抑制剂应用等方面存在的障碍，胰岛移植临床应用尚待时日。本文就胰岛伯最新进展问题及其可能解决途径等作一综述。     

大鼠胰岛的分离纯化方法改进与功能鉴定

目的 通过改进胰腺消化和分离的技术条件,提高成年大鼠胰岛分离纯化产率和质量. 方法 用胶原酶Ⅺ液灌注消化成年SD大鼠胰腺,对胰岛分离纯化方法加以改进:以 4 种比重的 Euro- Ficoll (F1∶D=1.132,F2∶D=1.108,F4∶D=1.069) 和 Hank's 液(F5∶D=1.023) 不连续密度梯度离心,以离心半径 15 cm,2 000 r/min 于4℃缓慢升降离心 20 min,收集位于F1 和 F2界面的胰岛.双硫腙特异染色法鉴定胰岛纯度;二醋酸酯荧光素/碘化丙啶染色法计算胰岛成活率;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌量,计算刺激指数.将胰岛当量(islets equivalent quantity,IEQ) 为 1000 的胰岛移植于同品系糖尿病大鼠肾包膜下,9d 内隔日观察动物血糖的变化,评价胰岛功能.比较分离条件优化前后收获胰岛的产率和质量. 结果 改进纯化方法后每只大鼠胰岛收获量为(920±122) IEQ,胰岛纯度> 90%,胰岛细胞成活率为 91%±2%.胰岛细胞功能良好,在低糖和高糖刺激后培养液中胰岛素浓度分别为(18.25±0.32) mU/L 和(36.70±3.57)mU/L,刺激指数为 2.01±0.15.1000 IEQ 胰岛移植于糖尿病大鼠肾包膜下,观察期内可维持动物血糖水平正常. 结论 改进后的胶原酶灌注消化和不连续梯度离心方法提高了胰岛的产率,保证了胰岛的高纯度及高成活率.     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的 探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响.方法 SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组(TPN组)、普通肠内营养组(EN组)和生态免疫肠内营养组(EEN组).建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达.结果 (1)电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义(P<0.05).(3)EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位.     

恒河猴外周血调节性T淋巴细胞的分离纯化及鉴定

目的建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法。方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用非人灵长类Tregs分离试剂盒的生物素标记的混合抗体和磁珠标记的抗生物素抗体阴性分选,以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C(activatedprotein C,APC)和抗APC多选试剂盒中的磁珠标记的抗APC抗体阳性分选出CD4+T淋巴细胞,比较两种方法获得细胞的得率、活性及纯度;选择得率、活性和纯度较高的分选方法获得的CD4+T淋巴细胞,用磁珠标记的抗人CD25抗体进行阳性分选,获得CD4+CD25+Tregs,流式细胞仪检测纯度、活性及FoxP3表达水平,以及Tregs对刀豆蛋白(concanavalinA,ConA)刺激的自体CD4+CD25-效应性T淋巴细胞(effective T cells,Teffs)增殖的抑制功能。结果 CD4+T淋巴细胞阳性分选和阴性分选后,细胞活性均达95%左右,差异无统计学意义(P>0.05),但阳性分选后CD4+T淋巴细胞得率和纯度均显著高于阴性分选(P<0.05)。后续CD4+CD25+Tregs分选采用阳性分选法获得的CD4+T淋巴细胞。经双阳性分选收集的目的细胞中CD4+CD25+Tregs占76.2%±8.6%,活细胞比例为93.3%±4.7%,FoxP3阳性细胞比例为74.2%±6.9%。混合培养后Tregs均对ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。结论免疫磁珠双阳性分选法能有效分选出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+Tregs。     

基因芯片技术在移植器官缺血再灌注损伤研究中的应用

基因芯片技术已经成为检测不同状态下生物体基因变化的重要手段。通过基因芯片技术从基因水平上研究移植排斥相关问题是目前的新趋势。缺血再灌注损伤作为移植器官的早发事件，利用基因芯片技术研究这个病理过程，可望能够深入了解移植排斥的机理，为临床上观测和治疗器官移植后器官排斥提供有效的理论指导。