同种异体皮质骨板移植重建股骨骨折的实验研究

目的 研究深低温冷冻与环氧乙烷处理同种异体皮质骨板移植重建山羊股骨骨折的治疗效果。方法 将16只山羊造成右侧股骨骨折．双侧股骨分别进行深低温冷冻与环氧乙烷处理同种异体皮质骨板移植,在术后3、6、12、24周处死动物取材,通过X线片,血管墨汁灌注．四环素荧光标记,组织学检查观察骨折愈合以及骨板存活情况。结果 未骨折一侧术后3周,骨折一侧术后6周移植骨板出现再血管化。术后3～6周,骨折一侧移植骨板四环素荧光标记比未骨折一侧弱;而6周以后骨折一侧明显增强。术后12周骨折愈合,移植骨板与宿主骨骨性连接。术后24周移植骨板和宿主骨融为一体．骨折一侧移植骨板再塑性能力强,股骨皮质厚度增加明显。结论 同种异体皮质骨板移植具有促进骨折愈合作用,移植骨板与宿主骨整合后能增加局部骨量储备,增强股骨强度。     

版纳猪骨髓间充质干细胞体外培养最佳条件探索

目的探索近交系版纳微型猪(BannaMinipigInbred-line,BMI)骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的最佳培养温度及血清种类。方法原代培养和永生化两种BMI-MSC细胞,96孔板中选用胎牛、猪、小牛三种不同血清;于37℃,38℃,39℃,40℃四种不同温度下进行培养,测定生长曲线。最终根据生长曲线确定最佳培养条件。结果10%胎牛血清较猪血清和小牛血清条件下生长速度快,差异具有统计学意义;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度条件下生长速度无明显差异,差异不具有统计学意义。结论10%胎牛血清为BMI-MSC的最佳培养血清;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度均适宜BMI-MSC细胞的生长。     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的 探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响.方法 SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组(TPN组)、普通肠内营养组(EN组)和生态免疫肠内营养组(EEN组).建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达.结果 (1)电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义(P<0.05).(3)EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位.     

中国近交系猪的氟烷基因型研究

目的 选育猪到人异种移植的供器官猪种和医药实验研究大动物用猪种,首先应筛查其是否易患猪应激综合征（ＰＳＳ）。方法 采用酶合酶链反应结合限制性内切酶技术（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）研究版纳小耳猪近交系（ＢＭＩ）和近交培育之中的五指山猪（ＷＺＳＰ）的氟烷基因型,筛查其是否有易患猪应激综合征的可能。结果 ５０头版纳小耳猪近交系和１５头五指山猪氟烷基因型均为阴性纯合子。结论 这两种猪种可望成为猪到人异种移植和医药     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响。方法SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组（TPN组）、普通肠内营养组（EN组）和生态免疫肠内营养组（EEN组）。建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达。结果（1）电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义（P〈0.05）。（3）EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组.差异有统计学意义（P〈0.05）。（4）EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位。     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的 探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响.方法 SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组(TPN组)、普通肠内营养组(EN组)和生态免疫肠内营养组(EEN组).建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达.结果 (1)电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义(P<0.05).(3)EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位.     

大鼠胰岛的分离纯化方法改进与功能鉴定

目的 通过改进胰腺消化和分离的技术条件,提高成年大鼠胰岛分离纯化产率和质量. 方法 用胶原酶Ⅺ液灌注消化成年SD大鼠胰腺,对胰岛分离纯化方法加以改进:以 4 种比重的 Euro- Ficoll (F1∶D=1.132,F2∶D=1.108,F4∶D=1.069) 和 Hank's 液(F5∶D=1.023) 不连续密度梯度离心,以离心半径 15 cm,2 000 r/min 于4℃缓慢升降离心 20 min,收集位于F1 和 F2界面的胰岛.双硫腙特异染色法鉴定胰岛纯度;二醋酸酯荧光素/碘化丙啶染色法计算胰岛成活率;放射免疫分析法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌量,计算刺激指数.将胰岛当量(islets equivalent quantity,IEQ) 为 1000 的胰岛移植于同品系糖尿病大鼠肾包膜下,9d 内隔日观察动物血糖的变化,评价胰岛功能.比较分离条件优化前后收获胰岛的产率和质量. 结果 改进纯化方法后每只大鼠胰岛收获量为(920±122) IEQ,胰岛纯度> 90%,胰岛细胞成活率为 91%±2%.胰岛细胞功能良好,在低糖和高糖刺激后培养液中胰岛素浓度分别为(18.25±0.32) mU/L 和(36.70±3.57)mU/L,刺激指数为 2.01±0.15.1000 IEQ 胰岛移植于糖尿病大鼠肾包膜下,观察期内可维持动物血糖水平正常. 结论 改进后的胶原酶灌注消化和不连续梯度离心方法提高了胰岛的产率,保证了胰岛的高纯度及高成活率.     

HPLC法间接测定人和猪红细胞硫嘌呤甲基转移酶活性及其差异分析

目的建立测定红细胞内6-甲基-巯基嘌呤(6-MMP)浓度的HPLC法,换算出红细胞和肝组织中硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性,探讨猪与人肝脏TPMT酶活性的差异。方法使用岛津2010C系列高效液相色谱仪,SymmetryC18(150mm×3.9mm,5μm)色谱柱。样品用乙酸乙酯萃取后进样,0.1%的乙酸∶甲醇为流动相梯度洗脱,总流速1.0mL/min,280nm波长检测,内标法定量。结果标准曲线在6.25~100nmol/mL范围内有良好线性,方法回收率为98.08%~100.05%,萃取回收率为88.1%~92.4%,批内RSD为1.0%~1.5%,批间RSD为1.0%~4.4%。测定显示人TPMT活性为(17.45±3.62)U,家猪TPMT活性为(7.65±1.35)U,版纳猪TPMT活性为(8.73±1.55)U。结论本方法适用于临床和科研中测定人和猪红细胞和肝组织TPMT活性。实验结果提示猪对嘌呤类药物的代谢能力低于人类。     

中国内江猪与中国人肌注头孢唑啉药代动力学的比较研究

比较研究中国内江猪与中国正常人对药物吸收,分布及肾排泄的药代动力学特点。方法选择可肌注吸收并迅速分布于各组织器官,主要经肾排泄的头孢唑啉为模型为,用ＨＰＬＣ测定ＣＥＺ血药浓度,并计算药代动力学参烤。结果在一次肌注ＣＥＺ１６ｍｇ／ｋｇ后,中国内江猪与中国正常人对ＣＥＺ的处置均属二室开放模型;     

恒河猴外周血调节性T淋巴细胞的分离纯化及鉴定

目的建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法。方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用非人灵长类Tregs分离试剂盒的生物素标记的混合抗体和磁珠标记的抗生物素抗体阴性分选,以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C(activatedprotein C,APC)和抗APC多选试剂盒中的磁珠标记的抗APC抗体阳性分选出CD4+T淋巴细胞,比较两种方法获得细胞的得率、活性及纯度;选择得率、活性和纯度较高的分选方法获得的CD4+T淋巴细胞,用磁珠标记的抗人CD25抗体进行阳性分选,获得CD4+CD25+Tregs,流式细胞仪检测纯度、活性及FoxP3表达水平,以及Tregs对刀豆蛋白(concanavalinA,ConA)刺激的自体CD4+CD25-效应性T淋巴细胞(effective T cells,Teffs)增殖的抑制功能。结果 CD4+T淋巴细胞阳性分选和阴性分选后,细胞活性均达95%左右,差异无统计学意义(P>0.05),但阳性分选后CD4+T淋巴细胞得率和纯度均显著高于阴性分选(P<0.05)。后续CD4+CD25+Tregs分选采用阳性分选法获得的CD4+T淋巴细胞。经双阳性分选收集的目的细胞中CD4+CD25+Tregs占76.2%±8.6%,活细胞比例为93.3%±4.7%,FoxP3阳性细胞比例为74.2%±6.9%。混合培养后Tregs均对ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。结论免疫磁珠双阳性分选法能有效分选出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+Tregs。