中国内江猪头孢唑啉血药浓度及蛋白结合率的研究

目的 :研究中国内江猪肾脏排泄的药代动力学特点及头孢唑啉 (CEZ)血浆蛋白结合率。方法 :选择主要经肾脏排泄的CEZ为模型药 ,采用高效毛细管电泳法测定其血药浓度 ,并计算药代动力学参数 ;采用平衡透析法测定其血浆蛋白结合率。结果 :中国内江猪静注CEZ后 ,其代谢符合二室开放模型。血浆清除率 (Cls)为 8 3 5ml/kg·min 1,消除半衰期 (t1/ 2 β)为 2 7 3 5min。中国内江猪血浆白蛋白浓度为 45 5 4± 1 7 44μmol·L 1,CEZ蛋白结合率为 80 5 9%～ 5 8 2 2 % ,解离常数为 1 6 1 0± 2 67μmol·L 1。结论 :与正常人实验药动学参考值相比较 ,内江猪对CEZ的消除与人具有相似的规律 ,但清除率明显大于人。侧面提示肾脏排泄功能可能较人强。内江猪血浆白蛋白浓度、CEZ蛋白结合率较人低 ,而解离常数较人高 ,表明CEZ与中国内江猪血浆蛋白结合的动态平衡中 ,结合物稳定性差 ,处于游离状态的CEZ较多 ,更易于消除     

Alpha—Gal异种移植抗原在猪骨中的分布研究

目的通过观察α-Gal抗原在猪骨组织中的分布,为进一步寻找去除α-Gal抗原的方法提供理论依据。方法皮质骨和松质骨标本分别取自猪肋骨和股骨髁部,将标本分别制成0．5cm×0．5cm×0．5cm大小,分别用甲醛和甲基丙烯酸甲酯固定,以M86为特异性抗体,免疫组化和免疫荧光方法分别检测α-Gal抗原在猪骨组织中的分布。结果α-Gal免疫组化和免疫荧光阳性表达于骨细胞和Haversian管表面,骨细胞外基质未见α-Gal阳性表达。结论异种移植α-Gal抗原主要表达于猪骨细胞表面,异种骨移植时应破坏骨细胞减少α-Gal的表达,以避免猪骨移植时的异种免疫排斥反应。     

免疫抑制剂依维莫司对大鼠胰岛细胞的毒性作用

目的 观察依维莫司等免疫抑制剂对大鼠胰岛瘤细胞(INS-1)和SD大鼠正常胰岛细胞代谢活性和功能的影响,旨在探讨依维莫司在胰岛移植免疫抑制治疗中的安全性和可行性.方法 不同浓度梯度免疫抑制剂依维莫司、西罗莫司、环胞霉素A和霉酚酸酯处理INS-1和正常胰岛细胞,用MTT法检测细胞的代谢活性;用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验检测胰岛细胞的胰岛素分泌功能.结果 临床血药浓度以上的依维莫司和西罗莫司高浓度组胰岛细胞增殖抑制率低于环胞霉素A和霉酚酸酯(P＜0.05);依维莫司在临床血药浓度范围和其它免疫抑制剂一样可以抑制胰岛细胞的胰岛素分泌功能,各组间的刺激指数差异无统计学意义.结论 依维莫司和西罗莫司对INS-1细胞及SD大鼠胰岛的毒性作用较小,环胞霉素A和霉酚酸酯对INS-1和SD大鼠胰岛具有较为明显的毒性作用,依维莫司有望作为新型免疫抑制剂应用于临床胰岛移植.     

添加特需营养素的营养支持对手术创伤后肠黏膜形态和屏障功能的影响

目的 探讨补充益生菌等特需营养素对手术应激后机体肠道屏障功能、上皮紧密连接及微生态的影响.方法 SD大鼠70只随机分成对照组、全肠外营养组(TPN组)、普通肠内营养组(EN组)和生态免疫肠内营养组(EEN组).建立创伤应激模型,接受等氮、等能量营养支持后光镜和电镜下观察肠黏膜形态和紧密连接,比较肠道细菌脏器易位率、肠道菌群数量及肠黏膜occludin蛋白免疫组织化学表达.结果 (1)电镜下观察,TPN组肠上皮损伤程度较严重,而EN组和EEN损伤程度较轻,肠上皮紧密连接、微绒毛较完整;光镜下chiu分级,TPN组和EN及EEN组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)EEN组和EN组肠道跨膜结合蛋白表达明显优于TPN组,且EEN和EN组间差异也有统计学意义(P<0.05).(3)EEN组和EN组肝、肺和肠系膜淋巴结的肠道细菌易位率低于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)EEN组和EN组肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌数量均高于TPN组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 联合益生菌、肠道黏膜营养素、免疫营养素的营养支持能明显改善肠道微生态环境,维持肠道黏膜屏障和紧密连接,从而防止肠道菌群易位.     

BMSCs对猪胰岛缺氧再给氧损伤的保护作用北大核心CSCD

目的研究恒河猴BMSCs在缺氧再给氧环境下对新生猪胰岛活性和功能的保护作用。方法取健康成年恒河猴5只,体重6～10 kg,取骨髓采用骨髓单核细胞贴壁培养法筛选获得BMSCs;取3～5日龄新生长白猪5只,取胰腺以Ⅴ型胶原酶消化制备新生猪胰岛。将实验分为胰岛正常组(A组)、胰岛加BMSCs正常组(B组)、胰岛缺氧再给氧组(C组)、胰岛加BMSCs缺氧再给氧组(D组),观察比较常规培养和缺氧(1%O2)12 h再给氧24 h或48 h条件下,胰岛的功能活性变化:二乙酸荧光素/碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色计算胰岛成活率;细胞计数试剂盒8法检测新生猪胰岛的代谢活性;膜联蛋白V-FITC/PI标记后流式细胞仪检测胰岛凋亡率;葡萄糖刺激法分析胰岛功能糖刺激指数(stimulation index,SI)。结果 C组较A、B组胰岛团更为分散,死亡细胞增多;D组较C组胰岛团完整,成活率更高。A、B、C、D组胰岛成活率分别为90.2%±9.1%、88.3%±5.9%、52.3%±12.1%、71.4%±11.5%,C、D组显著低于A、B组(P<0.05),D组显著高于C组(P<0.05)。D组BMSCs以1∶10和1∶20比例与胰岛缺氧再给氧共培养后,代谢活性显著高于C组(P<0.05)。A、B、C、D组胰岛凋亡率分别为27.1%±3.2%、24.0%±1.0%、64.3%±1.8%、46.2%±1.4%,C、D组显著高于A、B组(P<0.05),但D组显著低于C组(P<0.05)。各时间点A、B组SI比较差异均无统计学意义(P>0.05),C组显著低于A、B组(P<0.05),在24 h和72 h时D组显著高于C组(P<0.05)。结论 BMSCs对缺氧再给氧诱导的新生猪胰岛活性和功能损伤具有保护作用。     

大肠杆菌表达的人源性抗CTLA4单链抗体三种复性方法比较

比较表达于大肠杆菌中的人源性抗细胞毒性T淋巴细胞抗原4单链抗体(A n ti-CTLA 4 scFv)的三种体外复性方法的复性效率。稀释、透析和亲和柱上三种复性方式复性A n ti-CTLA 4 scFv,采用B rad ford法分析蛋白复性得率,采用间接细胞EL ISA法检测所得蛋白的活性。透析复性蛋白得率最高,稀释复性蛋白得率其次,亲和柱上复性蛋白得率最低;透析复性所得蛋白结合活性是稀释复性的1.95倍,是亲和柱上复性所得蛋白活性的4.13倍(无谷胱甘肽氧化还原对G SH/G SSH)及3.63倍(有G SH/G SSH)。结论:采用含0.15 m o l/L N aC、l1 mm o l/L G SSH和3 mm o l/L G SH的50 mm o l/L T ris-HC l(pH 8.0)缓冲液作为A n ti-CTLA 4 scFv的复性液,4℃下透析复性48 h,可获得较高复性得率和结合活性。     

酶组织化学方法在HA/TCP体内外生物相容性评价中的初步应用

通过研究材料与细胞 /组织相互作用后胞内酶活性的变化与材料生物相容性之间的关系 ,探讨酶组织化学法应用于材料生物相容性评价的可行性。结果发现 ,与 HA/ TCP和钛合金复合培养的成骨细胞形态学上无明显差异。但 HA/ TCP与兔成骨细胞复合培养初期可导致细胞 NADH、SDH、L DH和 CCO酶活性的一过性下降 ,而钛合金对复合培养细胞的酶活性没有明显影响 ,提示 HA/ TCP材料溶出物对细胞有轻微的损伤。两种材料体内植入后引起的组织学变化过程相似 ,主要表现为损伤引起的急性炎症过程。酶组织化学检测发现 ,术后 10 d内植入体周围组织四种酶活性均明显下降 ,15 - 30 d内逐渐恢复正常。但 HA/ TCP组酶活性的恢复略滞后于钛合金组 ,也表明材料溶出物对细胞有一定损伤。体内外实验均发现酶学指标能更灵敏地反映材料对细胞的作用 ,酶组织化学法可望应用于材料生物相容性评价。     

不同力学环境影响同种异体皮质骨板移植生物学转归的实验研究

16只山羊造成右侧股骨骨折,双侧股骨分别进行同种异体皮质骨板移植,右侧移植骨板承受生理应力,左侧不承受应力。分别在术后3、6、12、24周处死动物取材,通过组织学检查以及血管墨汁灌注率、孔隙率、四环素荧光标记和新骨形成积分光密度值图像分析,对移植骨板修复进行检测。结果显示,未承受应力侧术后3周,承受应力侧术后6周移植骨板出现再血管化。术后3~6周,不承受应力侧移植骨板血管面积比率、孔隙率、四环素荧光标记和新骨形成积分光密度值大于承受应力侧(P<0.05);而6周以后则承受应力侧大于未承受应力侧(P<0.05)。结果表明,同种异体皮质骨板移植术后早期承受应力延缓了移植骨板再血管化;患肢术后制动6周,待骨折端骨痂连接、移植骨板再血管化以及部分骨板与宿主骨发生骨性连接后,患肢承受生理载荷有利于移植骨板新骨形成和内部改建。     

恒河猴凝血因子Ⅶ的体外表达初探

[目的]探索恒河猴凝血因子Ⅶ的体外原核蛋白表达方法.[方法]利用已得到的恒河猴凝血因子Ⅶ cDNA序列,构建了带有6His表达标签的大肠杆菌原核表达重组质粒pET-DsbA-MCFⅦ,再转入大肠杆菌中进行诱导表达,并使用SDS-PAGE蛋白质电泳和Western Blot法检测蛋白表达情况.[结果]目的蛋白主要以包涵体形式表达,但是在菌液上清和菌体裂解液中也能检测到可溶形式的目的蛋白.[结论]恒河猴凝血因子Ⅶ在大肠杆菌中能够以可溶形式表达.     

版纳微型猪近交系外周血淋巴细胞cDNA文库的构建

[目的]构建版纳微型猪近交系(BMI)外周血淋巴细胞中cDNA文库.[方法]取新鲜BMI外周血,分离淋巴细胞,并进行体外诱导培养,提取总RNA,纯化mRNA.按照SMART cDNA library construction kit提供的方法构建BMI外周血淋巴细胞cDNA初始文库,进行滴度测定及文库扩增.[结果]初始文库和扩增文库的滴度分别为1.1×106 pfu/ml和2.5×109 pfu/ml,重组率分别为98.2%和89.1%,插入片段平均长度大于1200bp.[结论]成功地构建了BMI外周血淋巴细胞cDNA文库.