CXCR4基因修饰对骨髓间充质干细胞向急性肾损伤微环境定向迁移的放大效应及机制

目的:低氧/复氧预处理肾小管上皮细胞(HR-RTECs)体外模拟急性肾损伤(AKI),与CXCR4基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养,观察该共培养环境下CXCR4基因修饰对BMSCs定向迁移力的影响,探讨其可能机制,并以动物模型进一步验证. 方法:Gateway技术构建含CXCR4目的基因的质粒[绿色荧光蛋白(eGFP)为示踪基因)],同时构建仅含eGFP的对照载体,以携带上述质粒的慢病毒为载体转染BMSCs合成CXCR4-BMSCs和null-BMSCs,检测转染细胞活力、分化潜能及CXCR4在转染细胞中的表达.RTECs于HR环境中各培养12h获得HR-RETCs.实验共分四组,将BMSCs、CXCR4-BMSCs、null-BMSCs分别与HR-RTECs共培养,BMSCs与RTECs共培养作为对照.培养48h后检测各组BMSCs的定向迁移能力,ELISA检测RTECs培养上清中基质细胞衍生因子1(SDF-1)浓度,Western印迹检测BMSCs内pAKT、pMAPK水平.构建AKI小鼠模型,随机分为BMSCs移植组、CXCR4-BMSCs移植组和null-BMSCs移植组,移植细胞均采用5溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记,移植7d后处死,免疫组化法检测移植细胞在肾组织的分布. 结果:成功转染的BMSCs活力及分化潜能均无变化,CXCR4表达在CXCR4-BMSCs中明显增加.HR-RTECs模拟的AKI共培养环境可增强BMSCs的迁移能力,空载体转染对BMSCs的迁移能力并无额外影响,但CXCR4修饰的BMSCs向AKI微环境的迁移细胞数进一步显著增加.HR-RTECs培养上清中的SDF-1浓度增加,与其共培养的三种BMSCs内的pAKT、pMAPK水平也均增加,且以CXCR4-BMSCs的pAKT、pMAPK水平最强.CXCR4基因修饰可显著增加AKI肾组织中BrdU+细胞(BMSCs)的比例. 结论:AKI微环境对BMSCs有明显趋化作用,CXCR4基因修饰可进一步增强BMSCs的定向迁移能力,SDF-1/CXCR4轴为发挥作用的主要趋化因子/受体,其下游的AKT和MAPK通路为发挥作用的可能信号机制.CXCR4-BMSCs移植有望成为修复AKI的一种新的有效方法.     

116例急性肾衰竭病因和预后分析

目的总结我院收治的急性肾衰竭（ARF）患者的临床特点。方法回顾性分析。结果ARF116例,年龄5～91岁,平均（64．5±19）岁;65岁以上占55．2％;80岁以上占20．7％。病因：肾前性32例（27．6％）;梗阻性肾病26例（22．4％）;多脏器功能不全12例;药物肾毒性10例;急性间质性肾炎4例;造影剂肾病5例;肾炎8例;严重感染9例;横纹肌溶解3例;尿酸性肾病和酒精中毒各1例;5例原因不明。合并感染者42例（36．2％）;肿瘤患者25例（21．6％）。预后：死亡40例,占34．5％;痊愈42例,占36．2％;好转23例,占19．8％;维持性透析4例;转院3例。结论ARF是住院患者常见并发症;尽早解除梗阻是治疗肾后性ARF的最佳选择。     

交锁髓内钉治疗肱骨干骨折17例分析

肱骨干骨折是常见的上肢骨折,以往采取的钢板内固定往往伴有创伤大、易损伤桡神经、骨折延迟愈合和不愈合等缺点.我院自2004年11月～2006年10月采用肱骨交锁髓内钉治疗肱骨干骨折17例,临床疗效满意,现报道如下.     

促红细胞生成素对骨髓间充质干细胞移植修复小鼠急性肾损伤的作用机制

目的:构建缺血再灌注(I/R)诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠模型,经尾静脉注射行骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植,观察外源性促红细胞生成素(EPO)对BM-MSCs移植修复AKI效应的调控,并探讨基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXCR4轴在调控中的作用. 方法:C57BI/6小鼠100只,随机分为正常对照组、模型组(AKI组)、BM-MSCs移植组、EPO干预组、EPO干预+BM-MSCs移植组,移植BM-MSCs采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记.建模后Id、3d、7d、14d处死部分小鼠,检测血清尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)水平,观察肾组织病理变化,行急性肾小管损伤程度评分(ATN评分),免疫组织化学观察移植后其BM-MSCs在小鼠肾组织的分布,Western印迹法检测损伤肾组织中SDF-1水平. 结果:与BM-MSCs移植组及EPO干预组比较,EPO干预+BM-MSCs移植组小鼠BUN、SCr及ATN评分降低幅度更大,至移植后第14d小鼠的BUN、SCr水平甚至接近正常对照组.免疫组化显示BM-MSCs移植组小鼠肾脏中可检出BrdU+细胞分布,以术后第7天最多(11.32％±1.38％),在此基础上联合EPO干预可增加肾组织中BrdU+阳性细胞比例.AKI建模后肾组织SDF-1水平升高,建模后7d达高峰,EPO干预可显著增加SDF-1的表达. 结论:EPO干预可增加BM-MSCs移植后受损肾组织中移植细胞数量,增强AKI的修复作用,其中肾脏中促干细胞归巢因子SDF-1表达增加为其可能机制之一.     

三枚螺纹钉经皮穿刺交叉内固定治疗股骨颈骨折

我院自 1990～ 1999年先后采用人工股骨头置换术或全髋置换术及三枚螺纹钉经皮穿刺内固定治疗股骨颈骨折 139例 ,两种方法各有特点 ,适应症各有不同 ,对此我们进行了对比分析。1　临床资料1.1　病例资料 :本组病人 139例 ,男 87例 ,女 52例。78例接受三枚螺纹钉经皮穿刺内固定治疗 (以下简称内固定组 ) ,61例接受人工股骨头置换或全髋置换 (以下简称置换组 )。一般资料见表 1。表 1　临床分型及其治疗方法n 平均年龄 (岁 ) 男女 分型 (Ganden s) 随访时间 (月 )内固定组 7859.2 4 92 9392 1 1 3 5 1 4 .1置换组 61 70 .0 382 3 2 3 1 0 …     

促红细胞生成素对横纹肌溶解大鼠急性肾衰竭的肾脏保护作用

目的：观察促红细胞生成素（EPO）能否减轻横纹肌溶解引起的急性肾衰竭（ARF）大鼠肾损伤程度并探讨机制。方法：重200g左右SD大鼠48只,禁水14h后分4组,正常对照组：两后腿肌肉注射生理盐水10ml/kg;ARF组：两后腿肌肉内注射50%甘油（10ml/kg）;EPO立即干预组：肌肉注射50%甘油的同时腹腔注射EPO2000μg/kg,12h后重复1次;EPO延迟干预组：在肌肉注射甘油6h后注射EPO2000μg/kg,12h重复1次。观察各组尿量、肾功能和肾组织病理变化。结果：与ARF组相比,EPO立即干预组和延迟干预组血尿素氮、血肌酐浓度均明显降低,ATN评分下降（P〈0.05）。肌肉注射甘油的3组大鼠24h肾组织中均存在明显的小管细胞凋亡,EPO干预组凋亡情况减轻;肌肉注射甘油的大鼠肾组织抗凋亡因子Bcl-XL的蛋白质表达比正常对照组增加,EPO立即干预和延迟干预组增加更加明显。结论：立即注射和延迟6h注射EPO均可减轻甘油诱导的横纹肌溶解性大鼠急性肾损伤。     

骨髓间充质干细胞干预对急性肾损伤鼠肾脏中细胞因子的影响

目的：建立缺血再灌注（I/R）诱导的急性肾损伤小鼠模型,探讨外源性地给予骨髓间充质干细胞（MSCs）干预对模型小鼠肾损伤微环境中细胞因子水平的影响,并探讨其在肾损害修复中的作用。方法：采用Percoll密度梯度离心法分离出C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞（mMSCs）。雄性C57BL/6小鼠45只,分为正常对照组（15只）、I/R组（15只、夹闭双侧肾蒂30min开放）、I/R＋mMSCs组（15只、夹闭双侧肾蒂30min开放的同时尾静脉注射mMSCs）。于建模后1d、2d、3d、7d、14d分别处死部分小鼠（每次每组均处死3只）,留取动脉血及肾组织,检测血尿素氮（BUN）及肌酐（Scr）水平,制作肾组织切片行HE染色,观察肾组织病理变化,行肾小管坏死程度评分（ATN评分）。ELISA法检测肾组织匀浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-10（IL-10）、肝细胞生长因子（HGF）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的水平。结果：I/R组小鼠的BUN及Scr均显著高于正常对照组,肾小管损伤严重;而I/R＋mMSCs组小鼠的BUN及Scr水平较I/R组为低,以术后第7天差异最为显著（P〈0.01）,肾小管损伤病理明显减轻,ATN评分也有着显著降低。ELISA结果显示单纯I/R组各时间点肾组织匀浆中TNF-α、IL-1β、MCP-1的水平显著升高（P〈0.01或P〈0.05）,而IL-10、HGF、BMP-7的水平却有着显著降低（P〈0.01或P〈0.05）。但同时给予MSCs干预的I/R小鼠肾组织匀浆中前述细胞因子的水平却向着相反方向改变。结论：MSCs对I/R肾组织中细胞因子的分泌具有调控作用,而这些调控了的细胞因子进而可通过旁分泌作用发挥促进肾损害的修复作用。     

锁定钢板治疗老年肱骨近端粉碎性骨折

老年肱骨近端骨折由于其骨折类型复杂,同时伴有骨质疏松治疗难度大,我们采用肱骨近端锁定钢板治疗上述骨折,疗效满意。     

慢性肾功能衰竭患者与胆囊结石相关性因素的研究

目的探讨慢性肾功能衰竭患者胆囊结石的发病率及其相关因素。方法通过对273例慢性肾功能衰竭者常规胆系B型超声检查,同时检查血清总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-TCH)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-TCH)、血磷(P),另选择同期年龄、性别匹配的正常人230例作为对照组。结果273例肾病组中患胆囊结石人数为62例(占22.70%),对照组230例中患胆囊结石人数为22例(占9.57%),结石组与无结石组中年龄、血清总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、血磷(P)有显著差异,结石组高于无结石组。结论慢性肾功能衰竭患者应常规行B型超声检查胆系,血清TCH、TG、P增高是胆囊结石的高发因素。     

骨髓间充质干细胞向急性肾损伤小鼠的肾脏归巢现象及功能探讨

目的:观察在缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模拟急性肾损伤的小鼠模型中,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)能否向损伤的肾小管迁移并促进其修复. 方法:Percoll密度梯度离心结合贴壁培养法有效分离纯化出C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞(mMSCs),5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记并采用免疫组化法鉴定.雄性C57BL/6小鼠45只,分为正常埘照组(15只)、I/R组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放)、I/R+BrdU-mMSCs组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放的同时尾静脉注射经BrdU标记的mMSCs).于建模后1d、2d、3d、7d、14d分别处死部分小鼠(每次每组均处死3只),留取动脉血及肾组织,检测血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平,观察肾组织病理变化,荧光组织化学及免疫组织化学观察MSCs在受体小鼠肾组织的分布并对其进行鉴定. 结果:经免疫组化证实BrdU标记mMSCs的阳性率可达(98.71±0.32)%.I/R组、I/R+Brdu-mMSCs组小鼠的BUN及SCr均显著高于正常对照组,但I/R+BrdU-mMSCs组小鼠的BUN及SCr水平却较同一时间点的I/R组为低,肾小管损伤程度评分也有着显著降低.免疫组化检测显示I/R+BrdU-mMSCs组小鼠肾脏中可检测到BrdU~+细胞的分布,以术后第3天最多[(19.36±6.94)%].经荧光组织化学及激光共聚焦显微镜观察证实该BrdU~+细胞定位于小鼠的肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)处,且表达RTECs特异性的标志物角蛋白18(cytokertain-18,CK18). 结论:小鼠发生I/R诱导的急性肾损伤后可诱导MSCs向损伤的肾小管上皮迁移并转化,参与RTECs的更新,促进肾损伤的修复.