骨髓间充质干细胞干预对缺血再灌注致小鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)干预对缺血再灌注(I/R)诱导的急性肾损伤小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)自身修复的影响.方法 Percoll密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化出C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞(mMSCs),5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记.雄性C57BL/6小鼠45只,分为正常对照组(15只)、I/R组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放)、I/R+Brdu-mMSCs组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放的同时尾静脉注射BrdU标记的mMSCs).留取动脉血及肾组织,检测血尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平,制作肾组织切片行苏木素-伊红(HE)染色,荧光组织化学观察mMSCs在受体小鼠肾组织的分布,免疫组织化学观察RTECs增强细胞核抗原(PCNA)的表达,TUNEL法检测RTECs凋亡,Western blot检测建模后第2天肾小管组织中Caspase-3、bcl-2蛋白的表达.结果 BrdU标记mMSCs的阳性率可达(98.71±0.32)%.I/R+BrdU-mMSCs组小鼠的BUN及Scr水平较I/R组为低,肾小管损伤病理明显减轻,且小鼠的肾脏中可检测到BrdU+细胞的分布.mMSCs干预后,RTECs细胞核PCNA阳性表达明显增多(P＜0.05或P＜0.01),而细胞凋亡的水平却较I/R组明显减少(P＜0.05或P＜0.01).Western blot进一步显示:I/R+BrdU-mMSCs组小鼠的肾组织中Caspase-3蛋白水平明显下降[(1.16±0.33)比(1.64±0.27),P＜0.01],而bcl-2水平却明显增高[(0.94±0.27)比(0.68 ±0.15),P＜0.01].结论 小鼠发生I/R诱导的急性肾损伤后可诱导移植的MSCs向损伤肾组织归巢,锚定在肾脏的MSCs可促进损伤RTECs的再生,抑制其凋亡,从而有助于RTECs的自身修复,延缓肾损害进展.

Abstract：

Objective To observe the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on self-repair of renal tubular epithelial cells ( RTECs) in mice under ischemia/reperfusion ( IR). Methods MSCs in C57BL/6 mice were successfully isolated by Percoll density gradient centrifugation and adherence cultivation, then marked with BrdU. Forty-five healthy male C57BL/6 mice were assigned to control group (n =15 ) , I/R group (n = 15 , clamping bilateral renal pedicles and then reopening after 30 min) , I/R + BrdU-MSCs group (n = 15 , clamping bilateral renal pedicles and then reopening after 30 min, meanwhile, BrdU-marked MSCs were injected through caudal vein into the body of model mice). One, 2,3,7 and 14 days later, the mice were killed (n = 3/each group) , and blood and kidneys were obtained. Serum creatinine (Scr) and urea nitrogen (BUN) were determined, and mice kidneys were stained with Hematoxylin and Eosin ( HE) to observe their pathological changes. The distribution of MSCs in mice was observed by using fluorescence histochemistry. The expression of proliferating cell nuclear antigen ( PCNA) in RTECs was assessed by using immunohistological staining. The apoptosis of RTECs was detected by using TUNEL. The protein levels of Caspase-3 and bcl-2 in renal tubules on the day 2 after establishing the model were detected by using Western blotting. Results The positive BrdU marking ratio was (98. 71 ±0. 32) % in MSCs.As compared with I/R group, the levels of BUN and Scr in I/R + BrdU-MSCs group were significantly reduced, and pathological changes in renal tubules were alleviated significantly. BrdU-marked MSCs desposited in the kidneys of I/R + BrdU-MSCs group. The positive PCNA expression of RTECs was increased significantly after intervention of BrdU-MSCs (P ＜0. 05 or P ＜0. 01) , while the apoptosis relieved significantly. Western blotting analysis revealed: as compared with I/R group, the level of Caspase-3 in I/R + BrdU-MSCs group was decreased notably [(1.16±0.33) vs (1.64±0.27), P＜0.01], while the level of bcl-2 increased significantly [(0.94±0.27) vs (0.68±0.15), P＜0.01). Conclusion Acute renal injury by I/R can induce MSCs homing to injured kidney and anchoring here. The anchored MSCs can contribute to RTECs' self-repair of mice under ischemia/reperfusion, inhibit their apoptosis, which is helpful to the RTECs' self-repair and can delay the progression of renal injury.     

α促黑素细胞激素对横纹肌溶解所致急性肾衰竭大鼠肾的保护作用

目的探讨α促黑素细胞激素（α—MSH）是否能减轻甘油诱导横纹肌溶解所致急性。肾衰竭（ARF）大鼠。肾组织中炎性反应和对。肾损害的保护作用。方法48只SD大鼠随机分4组：健康对照组：肌注生理盐水10ml／kg；ARF组;肌注50％甘油10ml／kg；α-MSH立即干预组：肌注50％甘油的同时腹腔注射α—MSH200μg／kg，12h后重复1次；α-MSH延迟干预组：肌注50％甘油6h后腹腔注射α—MSH200μg／kg，12h后重复1次。24h后处死大鼠，测Scr、BUN、肌酸激酶水平。。肾组织PAS染色光镜下行。肾小管坏死半定量评分。免疫组化ED-1染色半定量计数。实时定量PCR测。肾组织中单核细胞趋化因子（MCP）-1mRNA表达水平。结果与对照组相比，ARF组大鼠。肾组织内ED．1染色阳性细胞数（16．8±7．0比1．46＋1．24）、MCP-1的mRNA表达量（11．0±3．8比7．8±1．9）均显著增加（P均〈0．05）。α-MSH立即干预组ED-1染色阳性细胞数（9．5±8．2）和MCP．1的mRNA表达量（8．7±5．1）与ARF组相比均显著减少（P〈0．05）。α—MSH立即干预组Scr、BUN和。肾小管坏死评分均低于ARF组【分别为（152±76）比（333±60）μmol／L、（23．8±9．3）比（56．0±10．0）mmol／L和1．7±0．4比2．7±0．4，P均〈0．05]。而α-MSH延迟干预组与ARF组间各指标及各组间血IL．6和TNF—α差异均无统计学意义。结论甘油所致急性。肾衰竭大鼠。肾组织中巨噬细胞浸润及MCP-1表达增加，即刻注射α-MSH有一定的抑制。肾组织炎性反应、减轻。肾损害作用。     

交锁髓内钉治疗肱骨干骨折17例分析

肱骨干骨折是常见的上肢骨折，以往采取的钢板内固定往往伴有创伤大、易损伤桡神经、骨折延迟愈合和不愈合等缺点。我院自2004年11月～2006年10月采用肱骨交锁髓内钉治疗肱骨干骨折17例，临床疗效满意，现报道如下。     

锁定钢板治疗老年肱骨近端粉碎性骨折

老年肱骨近端骨折由于其骨折类型复杂,同时伴有骨质疏松治疗难度大,我们采用肱骨近端锁定钢板治疗上述骨折,疗效满意。     

住院患者慢性肾脏病的危险因素分析

目的：回顾性分析慢性肾脏病（CKD）住院患者肾功能进展的危险因素。方法：收集2001年1月1日～2008年12月31日,在我院肾内科首次住院,未接受替代治疗16岁以上CKD患者655例,分析患者的性别、年龄、血压、原发病、肾穿病理、Hb、Alb、PA、UA、Ca2＋、P3-、TC、TG、LDL、HDL及肾功能进展的危险因素。结果：（1）起病较集中在31岁～60岁,占CKD的53.9%。（2）原发性肾小球疾病、糖尿病、高血压（69.5%、8.9%、8.9%）是导致CKD的主要病因。（3）58.2%患者行肾脏穿刺,病理结果以IgA肾病、系膜增生性肾炎、局灶节段性肾小球硬化、微小病变（31.2%、23.6%、11.3%、10.2%）为主。（4）各期患者血尿存在明显统计学差异（P〈0.01）;蛋白尿差异无统计学意义。与CKD1期比较,除PA、TG外,各期SBP、DBP、Hb、Alb、UA、Ca2＋、P3-、TC、LDL、HDL差异均有统计学意义（P〈0.05）。（5）多元相关回归分析显示eGFR与Hb呈正相关（P〈0.05）,与年龄、血压、UA呈负相关（P〈0.05）。多元Logistic回归分析显示年龄、贫血、高尿酸血症、高血压是CKD肾功能进展的危险因素（P〈0.05）。结论：原发性肾小球肾炎、糖尿病、高血压是主要病因。年龄、贫血、高尿酸血症、高血压为CKD进展的危险因素。     

IgA肾病患者尿足细胞排泄与临床病理相关性分析

目的观察原发性IgA肾病患者尿足细胞排泄、肾小球足细胞病变,分析其与临床病理之间的关系。方法50例经肾活检明确诊断的IgA肾病患者和10名健康志愿者,利用podocalyxin（PCX）作为标记蛋白,标记尿液和肾组织足细胞,收集患者肾活检时临床资料,各项病理指标和肾组织足细胞PCX荧光表达采用不同的半定量积分法进行评分,电镜检测肾小球外周袢的足突宽度。结果①IgA肾病患者中尿足细胞染色阳性为32例（64％）,较健康对照者有统计学差异。②IgA肾病伴尿足细胞阳性患者尿蛋白水平、血肌酐（SCr）、平均动脉压（MAP）较尿足细胞阴性患者增高,血浆白蛋白（Alb）、肾小球滤过率（GFR）降低（P〈0．05）。③光镜示IgA肾病伴尿足细胞阳性患者肾小球硬化程度、新月体发生率较尿足细胞阴性患者明显增高（P〈0．05）,但小管间质病变与肾组织足细胞PCX表达阳性指数,2组比较无统计学差异。④电镜结果提示IgA肾病患者尿足细胞阳性足突宽度明显增宽（P〈0．05）。结论足细胞尿是反映肾脏疾病轻重的一个指标,足细胞尿与肾脏病理类型有一定关系,IgA肾病患者尿足细胞排泄指标是否能够独立预测患者的预后还有待证实。     

丹参对马兜铃酸肾损害大鼠肾组织病理学改变及ACE、ACE2表达的影响

目的：观察丹参对马兜铃酸诱导的大鼠肾组织病理改变、血管紧张素转化酶（ACE）7L其同源物AC1、2以及细胞因子表达的影响。方法：建立马兜铃酸肾损害大鼠模型,并灌服不同剂量丹参水溶液（5、10、15g·kg^-1·d^-1）,于实验第12、16、20、24周留取肾组织标本,HE、P／kS、Masson观察肾组织病理改变,免疫印迹检测肾组织ACE、ACE2的蛋白表达量,RT—PCR检测AngⅡ、TGF—β1、PAI-1mRNA水平。结果：第12周开始,模型大鼠出现肾小管结构损伤,表现为刷状缘消失、细胞空泡变性、脱落,并出现裸膜,伴炎细胞浸润,实验后期出现局部动脉管壁增厚及轻度纤维化表现。模型大鼠肾组织ACE的表达升高,并随实验进展而明显;第16周开始艘的表达降低。AngⅡ、TGF—β1、PAI-1mRNA表达上调,以AngⅡ mRNA上调明显。丹参干预后肾组织病变有所减轻,未出现纤维化表现;丹参可降低肾组织ACE的表达,并下调AngⅡ mRNA水平。结论：丹参可能通过降低ACE的表达、促进ACE2的合成,抑制了AngⅡ的活性,并下调TGF-β1、PAI-1的过高表达,从而减轻马兜铃酸诱导的肾小管间质病变的发生发展。     

腰椎退行性病变行TLIF术后融合器下沉情况及影响因素Logistic回归分析

目的研究腰椎退行性病变行TLIF术后融合器下沉情况并进行影响因素Logistic回归分析。方法纳入2014年2月~2016年4月行经椎间孔腰椎椎体间融合术(transforaminal lumbar interbody fusion,TLIF)的144例腰椎退行性病变患者,随访24~48个月,平均(30.21±4.23)个月,将术后责任椎间隙高度丢失≥2 mm定义为融合器下沉,设为下沉组,共40例;2 mm设为正常组,共104例。调查两组患者一般情况及手术相关资料,经Logistic回归分析探讨TLIF术后融合器下沉的独立危险因素。结果144例患者行TLIF术后融合器下沉40例,下沉率27.78%;单因素分析显示,术前和术后椎间隙高度、术后节段性前凸角、责任椎间隙、合并骨质疏松、年龄、性别等资料的差异有统计学意义(P0.05);Logistic回归分析显示,术前椎间隙高度(OR=2.452)、术后椎间隙高度(OR=2.498)、术后节段性前凸角(OR=2.611)、责任椎间隙L5-S1(OR=2.351)、合并骨质疏松(OR=2.176),均是腰椎退行性病变TLIF术后融合器下沉的独立危险因素。结论腰椎退行性病变TLIF术后融合器下沉率较高,前、术后椎间隙高度、术后节段性前凸角、责任椎间隙L5-S1、合并骨质疏松均为其独立危险因素。     

锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位的短期疗效观察

目的探讨锁骨钩钢板(Clavicular Hook Plate,CHP)治疗肩锁关节脱位的疗效。方法 2005年6月～2008年12月,应用CHP治疗69例TossyⅢ型肩锁关节脱位患者。结果术后69例患者获得随访,随访时间平均18个月。按肩锁关节脱位评分系统,优56例,良12例,差1例,优良率98.5%。结论锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位,符合生物力学要求,操作简单,关节功能恢复快。