原代心房肌细胞培养及快速起搏细胞模型的建立

目的:利用原代培养的心房肌细胞建立快速起搏模型,对心房颤动(房颤)早期的重构现象进行初步研究。方法:原代培养大鼠心房肌细胞,并建立快速电场刺激起搏细胞模型,利用全细胞膜片钳技术记录刺激前后心房肌细胞的动作电位周期,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:培养至第4天,细胞生长密度可以达到瓶底70%左右,数目可达(2~3)×109/L,经免疫细胞化学鉴定,90%以上培养细胞α-肌动蛋白抗体染色阳性;全细胞膜片钳记录了培养心房肌细胞及经电场刺激(600次/min,1·5V/cm)24h后的心房肌细胞的动作电位周期,动作电位周期分别为(64·2±4·6)ms和(56·6±4·1)ms,刺激前后差异有统计学意义(P<0·05)。透射电镜观察到刺激后心房肌细胞超微结构发生去分化改变。结论:经快速起搏24h后,心房肌细胞发生了电及结构重构;利用原代培养的心房肌细胞建立快速起搏的房颤模型,可以对房颤早期的重构机制进行研究。     

miR-620通过靶向ING4调控乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性

目的：探讨miR-620对乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响及其机制。方法：收集2017年3月至2018年3月在海南省儋州市人民医院手术切除的21例乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞MCF-7、BCaP-37和乳腺上皮细胞HBL-100,采用qPCR法检测癌组织和细胞中miR-620和生长抑制因子4(ING4)mRNA的表达。利用脂质体转染技术,分别将miR-620抑制剂（anti-miR-620）和抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）、anti-miR-620和ING4小干扰RNA(si-ING4)、anti-miR-620和小干扰RNA阴性对照序列（si-NC）转染至MCF-7细胞,经放射处理后（依次记为IR+anti-miR-620组、IR+anti-miR-NC组、IR+antimiR-620+si-ING4组、IR+anti-miR-620+si-NC组）,利用克隆形成实验、MTT法和FCM分别检测细胞放射敏感性、细胞增殖活力、细胞周期分布和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验和WB法验证miR-620和ING4的靶向关系。结果：与癌旁组织和HBL-100细胞比较,...     

超声引导腹横肌平面右美托咪定复合罗哌卡因阻滞对下腹部手术患者镇痛效果的临床观察

目的探讨盐酸右美托咪定（dexmedetomidine hydrochloride）复合罗哌卡因（ropivacaine）应用于超声引导腹横肌平面（transversus abdominal plane,TAP）阻滞对下腹部手术患者的镇痛效果。方法选择下腹部手术患者60例,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,随机分为3组（n=20）：0．75％罗哌卡因20ml＋生理盐水20ml（R组）、0．75％罗哌卡因20ml＋右美托咪定20μg＋生理盐水20ml（R＋D20组）、0．75％罗哌卡因20ml＋右美托咪定40μg＋生理盐水20ml（R＋D40组）。术后在麻醉恢复室内实施双侧TAP阻滞,每侧20ml。持续监测无创血压、心电图、呼吸、脉搏血氧饱和度。记录术后Ramsay评分、VAS评分、术后额外镇痛药使用情况及不良反应发生情况。结果各组间心率、血压、脉搏氧饱和度和Ramsay评分无明显差异（P〉0．05）,R＋D20组和R＋D40组的VAS评分和额外镇痛药使用次数低于R组（P〈0．05）;3组间不良反应（恶心、呕吐、皮肤瘙痒及呼吸抑制等）无明显差别（P〉0．05）。结论右美托咪定复合罗哌卡因TAP阻滞对下腹部手术患者镇痛效果好,且右美托咪定能延长罗哌卡因镇痛时间。     

雷帕霉素靶蛋白反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的构建雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的反义RNA真核表达载体，观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）功能的影响。方法提取人VSMC总RNA，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）扩增mTOR基因cDNA序列，经pGEM-T载体克隆后双酶切，将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1，转染VSMC，Westernblot法检测反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经RT-PCR获得664bp产物，T载体克隆后，酶切确定该片段为mTOR基因cDNA，进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR，测序证明序列正确后转染VSMC，证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达，转染72h的mTOR蛋白产物表达抑制率达82％，S期细胞由15％降低为7％，凋亡细胞增至9％。VSMC增殖过程在Gx／Go期→S期受阻。结论成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体。     

保心合剂治疗扩张性心肌病疗效分析

目的:研究保心合剂治疗扩张性心肌病心力衰竭的临床疗效。方法:扩张型心肌病心功能Ⅱ～Ⅳ级者给予保心合剂,与西药对照观察对临床证候、心功能、左室容积、射血功能、TNF及IL-6的影响。结果:保心合剂能改善临床证候、心功能、左室容积、射血功能,亦使TNF-α、IL-6水平降低。结论:保心合剂治疗对扩张性心肌病心力衰竭者有较好的治疗作用。     

亚健康新思维与中医学"治未病"思想之契合

"亚健康"新思维与中医"治未病"的预防医学思想不谋而合."防患未然"是中医干预亚健康之要旨,对亚健康思维与中医"治未病"预防医学思想的契合点进行了探讨.     

红细胞裂解液对CD34+细胞相对计数的影响及其原因初步探讨

目的：研究红细胞（red blood cell,RBC）裂解液对CD34+细胞相对计数的影响。方法：收集101份外周血干细胞采集物,CD34-PE及CD45-FITC双色免疫荧光染色后,分别用FACS裂解液（FACSTM lysing solution,FACS）、Optilyse C裂解液（optilyse C lysing solution,Optilyse C）及自配裂解液溶解红细胞,采用洗涤程序和运用ISHAGE设门策略,检测CD34+细胞、淋巴、粒、单核细胞相对数,CD45+ 细胞占全部收集信号百分比及各类细胞前向散射光（forward scatter,FSC）及侧向散射光（side scatter,SSC）信号。结果：比较3种裂解液处理后样本的CD34+ 细胞百分比,FACS裂解液处理的样本CD34+ 细胞百分比最低,自配裂解液最高（FACS vs. Optilyse C vs. 自配=0.49±0.43 vs. 0.67±0.50 vs. 0.73±0.66,P=0.000）。FACS裂解后样本CD45+细胞百分比远高于Optilyse C及自配裂解液（t=142.500,P=0.000）。3种裂解液对淋巴细胞百分比结果（F=35.340,P=0.000）具有统计学差异;而粒细胞百分比（F=0.610,P=0.540）、单核细胞百分比（F=1.590,P=0.210）差异无统计学意义。FACS裂解液处理后,CD34+ 细胞、淋巴细胞的FSC和SSC信号强度均弱于Optilyse C裂解液及自配的裂解液;而粒、单核细胞的SSC信号,FACS裂解液处理后最强,Optilyse C裂解液处理后最弱。另外,动员后的白细胞数多少与CD34+ 细胞百分比不存在相关性（r=0.108,P=0.312）。结论：红细胞裂解液导致CD34+细胞相对计数差异的原因可能与CD45+细胞比例有关,即获取的有效细胞数;裂解液对细胞形态的影响与造成淋巴细胞比例有显著性差异有关。鉴于不同红细胞裂解液对CD34等抗原阳性细胞的相对计数确实有不良影响,因此在应用流式细胞术检测或计数时应慎重选择。     

重庆地区血红蛋白病的患病率及其基因型和血液学表型分析

目的：分析重庆地区血红蛋白病的携带率、基因型构成及血液学特征,为血红蛋白病筛查及诊断方法的合理选择提供依据。方法：对49 551例进行血红蛋白病筛查的患者外周血样本,采用多重PCR-导流杂交或测序等方法检测地中海贫血常见23种基因位点及血红蛋白变异体(hemoglobin variants,HbVs)相关突变位点;再对确诊血红蛋白病患者的血常规和血红蛋白电泳结果进行回顾分析,评估血常规、血红蛋白电泳二者联合检查在血红蛋白病筛查诊断中的价值。结果：共检出3 511例血红蛋白病(7.09%),其中α地贫携带者1 840例,以--^SEA/αα、-α^3.7/αα和-α^4.2/αα为主;β地贫携带者1 540例,以CD17、IVS-Ⅱ-654、CD41-42为主;异常血红蛋白病65例,β链变异体为主;复合血红蛋白病64例,α地贫复合β地贫携带者57例,地贫复合异常血红蛋白病7例。血红蛋白病患者的血红蛋白、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量指标降低与α或β链合成的减少程度呈正相关,而血红蛋白A2(adult hemoglobin ...     

栝楼桂枝汤对脑缺血/再灌注损伤大鼠小胶质细胞极化的影响

目的观察栝楼桂枝汤(GLGZD)对脑缺血/再灌注损伤大鼠缺血侧大脑皮层小胶质细胞极化的影响。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、GLGZD组,另设一组假手术组,GLGZD组按GLGZD药液14.4 g/(kg·d),其余各组按蒸馏水0.1 m L/(kg·d)连续灌胃7 d。采用免疫荧光法检测缺血侧大脑皮层白细胞分化抗原86/离子钙结合衔接分子1(CD86/Iba1)及精氨酸酶-1/离子钙结合衔接分子1(Arg1/Iba1)阳性细胞率,免疫组化法检测白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-4(IL-4)蛋白的表达,Western blot检测核因子κBp65(NF-κBp65)蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,模型组CD86/Iba1阳性细胞率、IL-6的蛋白表达、NF-κBp65蛋白表达明显升高(P<0.01),Arg1/Iba1阳性细胞率、IL-4的蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,GLGZD组CD86/Iba1阳性细胞率、IL-6的蛋白表达、NF-κBp65蛋白表达明显降低(P<0.01),Arg1/Iba1...