玻璃化冷冻保存组织工程肌腱植入大鼠体内的组织学变化◆

背景:应用玻璃化冷冻方法保存组织工程肌腱具有可行性和应用前景,有待进一步研究.目的:探讨应用玻璃化冷冻保存组织工程肌腱体内植入对大鼠跟腱缺损修复的影响.方法:选用成年SD大鼠64只,于大鼠跟腱中段制备5 mm肌腱缺损模型,随机摸球法均分为2组,分别植入玻璃化冷冻保存组织工程肌腱和新鲜非冷冻保存组织工程肌腱.植入后2,4,6,8周,观察植入肌腱材料及周围组织的大体形态和组织学变化.结果与结论:两组肌腱材料体内植入后的大体形态和组织学反应无明显差异.植入后2,4周,植入的肌腱材料发生降解,材料中间及周围有大量炎性细胞浸润和纤维结缔组织增生.植入后6,8周,大量新生胶原纤维组织长入并替代降解的植入材料,形态和排列方式趋近于正常肌腱组织,大鼠跟腱缺损基本修复.结果表明玻璃化冷冻保存组织工程肌腱体内植入可修复大鼠跟腱缺损.     

巨大肩袖撕裂的治疗及研究进展

目的总结巨大肩袖撕裂的治疗及研究进展。方法查阅巨大肩袖撕裂临床治疗及实验研究的相关文献,并进行综合分析。结果巨大肩袖撕裂的治疗方法主要有非手术治疗、清创减压术、直接修复术、肌腱转移术以及各种材料修复,其疗效各异。近年来,出现了许多有关巨大肩袖撕裂治疗的实验研究,如基因治疗、细胞治疗和组织工程技术,有望为临床医生提供新的治疗策略。结论巨大肩袖撕裂的治疗对临床医生是一个挑战,治疗方案的选择需要从多方面考虑;传统手术方法修复断裂肩袖效果有限,巨大肩袖撕裂的研究和治疗技术尚需进行深入研究。     

培养软骨移植修复生长板陈旧性缺损矫正肢体畸形的可能性研究

目的将培养软骨移植修复生长板陈旧性缺损，防止肢体畸形发生，减轻畸形程度。方法分离1月龄兔软骨细胞，经离心管内培养形成软骨。在6周龄兔右侧胫骨上端生长板造成缺损，4周后再次手术切除缺损内组织，植入培养2周软骨。左侧胫骨经相同处理，但无植入物，为自身对照。结果移植培养软骨4、8、12周时右侧胫骨畸形增加程度显著低于左侧。左侧胫骨畸形加重，生长板缺损区内骨桥形成，提前闭合。结论培养软骨移植生长板陈旧性缺损，可以明显减轻肢体畸形程度，但不能纠正已发生畸形。     

培养软骨同生长板的比较研究

目的：探讨培养软骨用作生长板移植替代物的可行性。方法：自1月龄兔分离软骨细胞、离心管培养2周形成软骨。切取6周龄兔胫骨生长板，与培养软骨进行组织学、胰岛素样生长因子I型受体α链（IGF－I Ra)免疫组织化学、^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR)掺入率检测和电镜观察。结果：培养软骨具有一定的骺软骨组织学结构，缺乏典型的生长板软骨细胞柱状排列。培养软骨和生长板IGF－IRa免疫组织化学染色均为阳性。培养软骨^3H-TdR掺入率显著高于生长板（P＜0．01）。培养软骨中细胞外基质结构疏松，5％软骨细胞呈现凋亡。结论：培养软骨具有一些与生长板相似的性质，可能成为生长板的移植替代物。     

以部分脱钙冻干骨材料为支架组织工程骨移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化

背景：骨衍生材料中冻干骨异抗原去除不充分，免疫原性强烈；脱蛋白骨和完全脱钙骨基质抗原性较弱，但前者无成骨诱导能力，后者生物力学性能很差，临床应用受到限制。 目的：观察以部分脱钙冻干骨材料为支架的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化及移植组织的组织学变化。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察，于2006-06/2007-06在四川大学华西医院，生物治疗国家重点实验室与干细胞与组织工程研究室完成。 材料：组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞，经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体骨为支架材料于体外构建。 方法：将48只兔按随机数字表法分为4组，每组12只。分别用部分脱钙冻干骨、组织工程骨、自体骨、同种异体骨植入兔桡骨1 cm节段性缺损处。 主要观察指标：流式细胞仪检测4组植入前及植入后1，2，4周移植早期外周血Ｔ淋巴细胞亚群变化，并通过组织学检测观察植入后2，4，8，12周时4种材料的成骨作用。 结果：①部分脱钙冻干骨组、组织工程骨组植入后1，2周外周血CD4+和CD8+ T细胞较植入前明显升高(P < 0.05)。植入后4周CD4+ T细胞较植入前偏高不显著(P > 0.05)。自体骨组植入后CD4+和CD8+ T细胞升高不明显(P > 0.05)。同种异体骨组植入后1，2，4周外周血CD4+和CD8+ T细胞较植入前及其他各组同期均明显增高(P < 0.05)。②组织工程骨组植入后2周与材料孔隙内有成骨细胞和成软骨细胞，可见骨及软骨混合性新生物形成，周边分布有破骨细胞，部分网架呈蚕食状被破坏吸收。植入后4周，形成的新生骨过渡为编织骨。植入后8周，形成板层骨，部分脱钙冻干骨支架材料已被完全降解﹑吸收。植入后12周，植入物均已完全被板层样骨所替代，髓腔再通。 结论：部分脱钙冻干骨为支架材料构建的细胞-材料复合体移植后外周血T淋巴细胞增高，但不影响其良好的修复骨缺损能力。     

ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖特性及端粒酶活性分析

目的 分析体外长期传代ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖能力及端粒酶活性。方法 选用连续传代培养的第40代、第70代、第75代转化人胚腱细胞,免疫组化染色观察细胞分泌胶原类型,比较细胞生长曲线,并行染色体核型分析,流式细胞术检测细胞增殖周期,提取细胞总RNA,RT－PCR二步法检测细胞我端粒酶逆转录酶mRNA表达。结果 转化人胚腱细胞传代至70代以后,细胞形态发生改变,出现复制哀老现象。细胞具有正常分泌Ⅰ型胶原的能力,转化人胚腱细胞染色体呈异倍性（2n=94）。转化人胚腱细胞无人端粒酶逆转录酶mRNA特异扩增带,无端粒酶活性表达。结论 单纯SV40转染不能使人胚腱细胞永生化,同时也说明转化人胚腱细胞无恶性转化倾向。     

组织工程肌腱细胞研究模型的构建:SD大鼠尾腱细胞可行吗?

背景:目前常用的动物肌腱研究模型(比如兔,罗曼鸡等)的培养方法存在周期长,细胞获取量少等不足,往往成为制约肌腱组织工程实验研究进程的瓶颈.目的:希望建立SD大鼠鼠尾肌腱细胞培养流程,以期用较短时间获取大量种子细胞,为更高的工程化肌腱构造研究创造模型构建条件.设计、时间及地点:对比观察,于2006-02/11在四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成.材料:7～10dSD大鼠2只用于获取鼠尾腱细胞;第4代人包皮成纤维细胞由四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室提供.方法:选用SD乳鼠,无菌条件下抽取尾腱,体积分数为10%的小牛血清+DF培养基悬浮组织块培养法获得鼠尾肌腱原代细胞,将第3代细胞与人包皮成纤维细胞为对照,行Ⅰ,Ⅲ型胶原免疫细胞化学染色,染色结果用image-pro plus 5.02行吸光度测量,并做统计分析.主要观察指标:SD大鼠尾腱细胞免疫细胞化学染色结果及染色吸光度测量结果.结果:第2代SD大鼠尾腱细胞Ⅰ型胶原染色呈阳性,Ⅲ型胶原染色呈阴性;人成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学皆呈阳性.尾腱细胞和人成纤维细胞Ⅰ型胶原表达吸光度值均明显高于Ⅲ型胶原(P＜0.05).两种细胞Ⅲ型胶原表达吸光度值与空白对照之间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:SD乳鼠尾腱源细胞符合肌腱细胞的生物学特性.采用组织块悬浮培养可以在短期内大量获取原代或传代尾腱细胞.     

力竭游泳运动对大鼠血液生理生化学的影响

力竭游泳运动对大鼠血液生理生化学的影响秦廷武，杨瑞芳，蒋稼欢，蒋绍皙，吴云鹏重庆大学生物工程研究院（重庆４０００４４）选取１６只Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，鼠龄１４～１６周，体重２００～３００克，自由进食和饮水。经适应性游泳３天后随机分成对照组和力竭运动组...     

一种用于应变场三维细胞培养的组织工程支架

我们从组织工程化组织构建的角度 ,提出了一种可用于应变场细胞三维培养的组织工程支架。采用表面化学和材料力学方法 ,探讨了支架的组成、结构、表面特性、力学性质及细胞相容性。利用生物医用聚乙烯醇(PVA)耐水泡沫 ,表面裱衬生物可降解聚乳酸羟基乙酸共聚物 (PL GA)后 ,具有良好的表面特性和适宜的孔隙率 ,既能产生一定的弹性回缩 ,又具有良好的细胞相容性。结果表明 ,PVA耐水泡沫表面裱衬 PL GA为组织工程研究应变对细胞三维培养的影响提供了一种良好的三维支架。     

组织工程化肌腱修复鸡趾屈肌腱缺损的生物力学特性研究

组织工程化肌腱植入体内修复的肌腱其抗拉强度达不到正常肌腱的数值。为探讨这一问题的原因，我们选择罗曼雏鸡足趾屈肌腱细胞与可降解聚羟基乙酸筛网体外复合培养构建组织工程化肌腱。用此工程化肌腱修复20只罗曼鸡第二趾深屈肌腱0．5～0．8cm缺损。术后第2、4、6、8周取材，测定样品中材料的重量、羟脯氨酸含量及抗拉强度等力学特性指标。结果显示，植入2、4、6、8周，支架材料重量下降很快，至第8周基本降解；修复的肌腱中代表胶原合成总量的羟脯氨酸含量随时间增加，但变化不明显；修复的肌腱断裂能量和抗拉强度均随时间呈一先降低后逐渐增大的变化，抗拉强度在第8周才达到正常肌腱的23％。结果提示，植入的组织工程化肌腱在其材料迅速降解的同时，胶原生成量并不多，二者出现明显的不匹配，导致修复的肌腱抗拉强度低。