交感神经在兔椎动脉被膜节段性分布的实验研究

目的旨在利用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）逆行示踪技术对新西兰免进行实验，以明确交感神经纤维在椎动脉被膜上的分布规律，为临床颈性眩晕的分型提供实验依据，有助于对颈性眩晕的评估和治疗。方法选用20只新西兰兔，C2、C5左右侧各5只。将30％HRP5μl注于椎动脉外膜表面．48h后灌注处死，切取颈上神经节（SCG）、颈下神经节（ICG）（或星状神经节），TMB法成色反应，观察HRP标记细胞分市情况。结果实验侧同水平节段交感神经节发现以中、小细胞为主的HRP标记细胞。结论椎动脉被膜的交感神经分布具有节段性及同侧性的分布特点。     

PCR对弓形虫感染家兔血液中虫体DNA的动态检测

目的了解弓形虫感染家兔血液中是否有虫体存在,探明虫体在血液中动态变化情况。方法用不同剂量的RH株弓形虫速殖子经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用普通PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA。结果5只家兔在感染后的6~14d死亡,仅1只家兔在感染后的6~72d,用PCR检测手段在血液中均可检测到弓形虫DNA。结论弓形虫感染雄兔血液中有虫体存在。     

NF-κB在EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤保护效应中作用的研究

目的观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的保护效应及其与预处理过程中NF-κB的关系.方法采用培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,细胞分组为:对照组,EPO预处理组(EPO组)(EPO 10 U/ml),EPO 吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理组(EPO PDTC组)(EPO 10 U/ml PDTC 5 μg/ml),PDTC预处理组(PDTC组)(PDTC 5 μg /ml),共4组,分别于缺氧/复氧损伤前后,检测培养液LDH含量,MTT比色法观察细胞活力及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡.采用EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性.结果 EPO预处理显著降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞培养液LDH含量,提高细胞存活率,并降低心肌细胞凋亡率,预处理过程中同时加入NF-κB阻断剂PDTC使EPO预处理的以上心肌保护效应显著减弱或消失.EMSA显示EPO预处理使H/R前心肌细胞NF-κB活性较对照组、EPO PDTC组、PDTC组显著升高(P<0.05),EPO PDTC组心肌细胞NF-κB活性与PDTC组和对照组无显著差异(P>0.05).缺氧复氧损伤后各组心肌细胞NF-κB活性较正常对照组显著升高(P<0.01),但EPO组的NF-κB活性低于其余各组(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05).结论 EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护效应,这一作用与EPO预处理过程中NF-κB的活化有关,NF-κB的活化可能通过其负反馈调节机制抑制H/R后心肌细胞NF-κB活性的升高.     

Ferumoxide标记Flk1＋＋CD31＋-CD34-人骨髓间充质干细胞及其在食蟹猴脑内移植示踪观察

目的探讨Ferumoxide-PLL标记Flk1 CD31-CD34-人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的方法及其在食蟹猴脑实质内移植活体示踪的可行性。方法采用Ferumoxide-PLL标记hBMSC,台盼蓝染色、普鲁士蓝染色和透射电镜扫描鉴定标记效率及细胞活力。体外磁共振成像(MRI)分别扫描标记和未标记细胞,计算T2*的弛豫时间和弛豫率(R2*)变化。通过立体定向手术将标记的hBMSC移植入食蟹猴右侧基底节区,采用MRI扫描活体示踪细胞。采用免疫组织化学、普鲁士蓝和HE染色对脑组织切片进行干细胞存活、分化及病理学研究。结果Ferumoxide-PLL标记hBMSC效率为96%,普鲁士蓝染色、电镜可显示标记hBMSC细胞质内铁颗粒。1×106和5×105两组Ferumoxide-PLL标记细胞的T2*的弛豫时间分别为68.86和79.88ms,而未标记细胞分别为12.71和15.24ms。标记细胞的R2*分别为78.68和65.61/s,分别是未标记细胞(14.52和12.52/s)的5.4和5.2倍。移植后3周MRI扫描T2WI仍可发现hBMSC呈明显的低信号。病理及免疫荧光结果显示hBMSCs在移植区大量存活,移植区有大量新生血管,但未见hBMSC向神经细胞分化。结论Ferumoxide-PLL可高效标记hBMSC,能显著增加其MRI图像对比度。MRI可活体示踪干细胞。移植入食蟹猴脑内的hBMSC可大量存活并促进新生血管形成。     

促红细胞生成素预处理对心肌缺氧复氧损伤心脏血流动力学的影响

目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤中对其心脏血流动力学的影响,并研究其可能机制.方法 将Wistar成年雄性大鼠60只用随机数字表法分为对照组及EPO预处理组(EPO组),每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5 000 U/kg重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, RHuEPO),对照组注射同体积生理盐水.两组中的各15只大鼠于给药24 h后检测各指标,其余各15只大鼠置于常压缺氧环境中(O2的体积分数为7%)12 h后,移至常压常氧环境中2 h.采集血及心肌标本,通过全自动生化分析仪检测血清心肌酶活性,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡效应酶caspase-3蛋白表达水平,并分别于复氧30、60、120 min后观察心脏血流动力学指标,包括 dp/dtmax、-dp/dtmax、LVSP、LVEDP、HR.结果 损伤前两组大鼠血清心肌酶活性、心肌细胞凋亡率以及心脏血流动力学各指标无显著差异(P>0 05),损伤后EPO组大鼠血清心肌酶活性、心肌细胞凋亡率及caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组(P<0 05,P<0 01),复氧后30、60、120 min EPO组的±dp/dtmax显著高于对照组(P<0 05),复氧30、60 min EPO组的LVSP显著高于对照组(P<0 05).结论 EPO预处理能促进心肌缺氧复氧损伤后心脏舒缩功能的维持及恢复,这一作用可能与其抗凋亡心肌保护效应有关.     

组织原位杂交法检测肺炎支原体方法的建立

本文建立了用原位杂交法检测实验动物肺炎支原体感染的方法。采用地高辛标记的DNA探针,在病理检查确诊为肺炎支原体感染的标本中出现杂交阳性信号。阴性及特异性对照中未出现阳性信号。肺炎支原体原位杂交的最佳变性温度为80℃。合理的清洗对杂交结果很重要。     

改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁的卵黄抗体

目的探索有效的纯化大雁卵黄抗体及高效价二抗的方法。方法应用了PEG沉淀,阴离子交换柱,硫酸铵分级沉淀纯化,免疫制备二抗,免疫电泳和免疫双扩散法及western blotting进行效价的测定。结果改良后的硫酸铵沉淀法的纯度远远高于PEG沉淀,相对于离子交换法而言更加简单方便,经济省时。从免疫电泳看已达到了电泳纯,大雁卵黄IgY的相对分子质量为180×103,重链约为66×103,轻链约为24×103。免疫获得的二抗有较强的免疫活性。结论用改良的硫酸铵沉淀法纯化大雁卵黄抗体,效率和纯度显著提高,值得推广。本实验为大雁卵黄抗体及其二抗的应用奠定了基础,也为雁形目其他种类卵黄抗体的纯化提供了参考。     

脑组织特异表达胆囊收缩素转基因小鼠的建立

目的建立在脑内特异表达胆囊收缩素(CCK)转基因小鼠,研究CCK表达在中枢对饮食行为和代谢的影响。方法构建PDGF-CCK表达载体,利用显微注射法将目的片断注射到受精卵的雄原核中,建立CCK转基因小鼠。通过PCR的方法鉴定转基因鼠的基因型。采用Western Blotting方法鉴定CCK在脑内的表达。用试剂盒测定小鼠血脂并进行统计学分析。结果得到了3个CCK转基因品系,其中2个转基因品系脑内CCK表达量比野生鼠明显增加。高表达CCK的转基因小鼠在正常饲养的情况下体重低于阴性鼠,但血脂未发现显著差异。结论脑内高表达CCK可在一定程度上导致小鼠体重减轻。     

黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。     

黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化,得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16。结论证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG和Protein G具有很高的亲和性,Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清。