用竞争结合法检测HLAⅠ类分子抗原呈递能力

目的：建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHCⅠ类分子抗原呈递能力的方法，并评估其实用性。方法：pH2．7～3．1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后，即用IMDM培养液中和pH，然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的9肽及竞争肽共同孵育，FACs检测细胞表面的平均荧光强度，以达到50％抑制所需的竞争肽浓度作为衡量竞争肽与MHC分子结合能力的指标。结果：通过不同pH的柠檬酸缓冲液处理、处理后不同时间加β2微球蛋白和，或荧光素标记肽、加入不同稀释度的竞争肽等角度，对方法进行评估，结果显示本方法操作简便、结果可靠、非特异性吸附小。结论：在排除其它MHCⅠ类分子的干扰后，本方法适合在国情条件下广泛开展MHCⅠ类分子抗原呈递能力及T细胞肽表位筛选等研究。     

尿毒症和血液透析对L-选择素及细胞间黏附分子1表达的影响

L-选择素(selectin)和细胞间黏附分子(ICAM)-1能帮助白细胞发生黏附、游走、吞噬等一系列效应功能。它们在血中的可溶形式水平于某些特定的疾病状态时发生改变,可反映机体免疫力的异常[1]。尿毒症患者的免疫力低下,而血液透析(血透)时生物相容性差的透析膜能激活白细胞,加重了尿毒症患者本身的免疫力缺陷。     

初发红斑狼疮患者Thl／Th2细胞水平及药物治疗的影响

系统性红斑狼疮 (SLE)被公认为自身免疫性疾病的原型 ,其组织损伤主要由致病性自身抗体及免疫复合物介导[1] 。糖皮质激素是治疗SLE的主要药物 ,可影响细胞因子的分泌[2 ] 。本研究对 9例从未接受激素及其他免疫抑制剂治疗的初发SLE患者进行分析 ,探讨其Th1/Th2细胞水平 ,以及药物治疗对Th1/Th2细胞的影响。一、对象与方法1.研究对象 :9例患者均为我院院刚确诊的SLE患者。SLE诊断符合 1982年美国风湿病学会的SLE分类修正标准[3 ] 。 9例均为女性 ,平均年龄为 2 7.9岁。这些患者从未接受糖皮质激素或其他免疫抑制剂治疗。选择我院健…     

A RAPID ESTIMATION OF CELL CYCLE PARAMETERS：ONE HOUR COUNTINUOUS BROMODEOXYURIDINE（BrdUrd）LABELING METHOD

ＡＲＡＰＩＤＥＳＴＩＭＡＴＩＯＮＯＦＣＥＬＬＣＹＣＬＥＰＡＲＡＭＥＴＥＲＳ：ＯＮＥＨＯＵＲＣＯＵＮＴＩＮＵＯＵＳＢＲＯＭＯＤＥＯＸＹＵＲＩＤＩＮＥ（ＢｒｄＵｒｄ）ＬＡＢＥＬＩＮＧ　ＭＥＴＨＯＤＳｈｉＸｕｅｇｅｎｇ（石学耕）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢ...     

NB4细胞生物学特性与维甲到诱导分化机理研究

研究了ＮＢ４细胞多项生物学参数及三种维甲酸（ＲＡ）对ＮＢ４细胞增殖分化的影响，以探求ＲＡ诱导分化的机理。形态学观察、细胞生长曲线、ＤＮＡ含量分析、Ｂｒｄａ掺入、膜分化抗原测定、硝基蓝四唑（ＮＢＴ）试验等研究表明，ＮＢ４细胞ＤＩ＝１．７３，ＴＤ＝２４．９小时，Ｔｃ１、Ｔ５、Ｔｃ２Ｍ分别为５．１、１５．４、４．４小时，ＮＢ４细胞诱导分化过程中，前４８小时伴有明显的细胞增殖；ＲＡ诱导分化作用不表现细胞周     

抗溴化脱氧尿嘧啶核苷单克隆抗体免疫荧光细胞化学染色过程的最佳条件实验研究

抗溴化脱氧尿嘧啶核苷(BrdUrd)单克隆抗体荧光染色过程涉及到以下一些重要步骤:BrdUrd脉冲标记时间长短,核DNA部分变性处理所用盐酸的浓度与处理时间等。应以BrdUrd阳性细胞与阴性细胞之间平均荧光强度之比值,酸处理过程中细胞凝集的比例,细胞群体G_1峰DNA荧光强度及变异系数作为整个染色过程最佳条件的评价标准。在30分钟BrdUrd标记时间,2.4mol/L盐酸30分钟处理时间及抗BrdUrd单克隆抗体20℃1小时温育时间等条件下,可获得满意的染色结果,并且不需要核糖核酸酶的处理。本实验室将KF-1、KFr、HeLa、IK-90等几种培养细胞系用此方法染色均可获得满意的染色结果。     

肿瘤细胞固有活性氧水平与氧化砷促调亡易感性的关系

目的：研究肿瘤细胞株固有的活性氧(reactive oxygen species,ROS）水平与肿瘤细胞对三氧化二砷（以下简称氧化砷）促调亡的易感性之间的关系。方法：用小剂量（2umol/L）氧化砷作用于人白血病细胞和食管癌细胞各一对（NB4、U937和EC/CUHK1、EC1867）,以证实砷剂促凋亡敏感性在NB4和U937之间的差异以及在EC/CUHK1和EC1867之间的差异。然后在不加砷剂情况下,用活性氧捕获剂双氢罗丹明123（DHR123）孵育细胞（DHR123在细腻内被ROS氧化为发出荧光的罗丹明123,Rh123）,通过流式细胞仪检测细胞内Rh 123的荧光而测得细胞内固有的ROS水平。结果：2umol/L氧化在NB4和EC/CUHK1造成明显凋亡,而在U937和EC1867未造成明显凋亡。对氧化砷敏感的NB4细胞的固有活性氧水平比不敏感的U937细胞高,对氧化砷敏感的EC/CUHK1细胞的固有活性氧水平比不敏感的EC1867细胞高。结论：肿瘤细胞固有ROS水平的差异与肿瘤细胞对三氧化二砷诱导调亡的易感性有关。     

氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞(MR-2)凋亡的体外研究

目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ２为模型，用细胞生长、活力测定、形态学观察和流式细胞仪分析、四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同于ＡＴＲＡ，但ＰＭＬＲＡＲα可能是二者的共同作用靶点