大鼠蛋白激酶Cγ基因小发卡RNA慢病毒载体的构建及其干扰效率的鉴定

目的：研究指出蛋白激酶Cγ（PKCγ）在脊髓水平上参与了伤害性信号的传递,文中拟构建大鼠PKCγ基因的小发卡RNA（shRNA）慢病毒载体,并在细胞水平鉴定其干扰效率。方法：根据PKCγ-mRNA序列,选择3条19nt的靶序列,设计并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入到pLVTHM载体的H1启动子后获得重组质粒,同时构建一个非特异性对照质粒。将所构建的质粒与pMDLg-pRRE、pR sv-REV、pMD2G共转染293T细胞,包装产生慢病毒后,分别感染C6细胞,经免疫印迹技术（W estern b lot）检测PKCγ基因的蛋白表达水平以评价慢病毒载体的抑制效率。结果：测序证实成功构建了3个大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,分别感染C6细胞后pLV-PKC2和pLV-PKC3可明显降低PKCγ蛋白的表达,其中以pLV-PKC2（靶向位点：＋1913＋1931）的慢病毒抑制效率最高。结论：成功构建了大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,且慢病毒载体pLV-PKC2能特异、高效地抑制PKCγ基因的表达。     

氯普鲁卡因腰麻或腰-硬联合麻醉的临床研究

目的 探讨国产氯普鲁卡因用于腰麻或腰一硬联合麻醉的效果和安全性.方法 回顾性分析10 000例下腹部以下手术患者采用国产氯普鲁卡因冻干粉(生理盐水稀释成2.5%或3%溶液)腰麻或腰-硬联合麻醉.结果 腰麻平均起效时间24 s,平面固定时间7.7 min.最高阻滞平面平均为T_5.下肢运动阻滞3级者超过94%.腰麻效果平均满意率99.8%,硬膜外辅助麻醉后满意率提高到99.9%.单次腰麻完全消失平均72 min.产科患者腰麻后低血压和恶性呕吐发生率较高(分别为34%和43%).未见明显神经系统并发症和其他不良反应.结论 国产氯普鲁卡因冻干粉溶解后用于腰麻或腰一硬联合麻醉安全、有效.     

川芎嗪对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察川芎嗪对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 24只家兔随机分为3组:组Ⅰ(假手术组);组Ⅱ缺血再灌注组);组Ⅲ(川芎嗪组).观察在急性心肌缺血再灌注状态下血浆及心肌组织中磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化.结果 缺血及再灌注后,组Ⅱ血浆CPK、LDH活性、MDA含量进行性升高,SOD活性进行性下降;再灌注后组Ⅲ血浆LDH活性低于组Ⅱ.组Ⅱ各项指标在缺血区和非缺血区均有显著差异;与组Ⅱ相比,组Ⅲ缺血区心肌组织CPK、SOD活性升高,MDA含量降低.结论 川芎嗪对心肌缺血再灌注损伤有保护作用.     

鞘内注射芬太尼对糖尿病周围神经病变大鼠脊髓TNF-α表达的影响

目的 观察芬太尼对糖尿病周围神经病变模型大鼠脊髓肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响,以及其脊髓保护作用,探讨其镇痛机制。方法 成年雌性Wistar大鼠70只,随机取10只设为正常对照组（A组）,腹腔注射0.9%氯化钠溶液3 mL•kg 1•d 1;其余大鼠腹腔注射链脲菌素（STZ）建立糖尿病模型,得48只糖尿病模型大鼠。对照组和糖尿病模型大鼠实施鞘内置管,分别成功8只和32只。A组8只鞘内各注射0.9%氯化钠注射液10 μL;将糖尿病大鼠随机等分为2组,糖尿病对照组（B组）16只鞘内注射与A组等体积0.9%氯化钠注射液;芬太尼治疗组（C组）16只鞘内注射芬太尼0.5 μg•（10 μL）^-1;于给药后第1,2,3,4周分别进行行为学测定,记录机械缩足阈值;取脊髓切片,用尼氏染色法观察脊髓的病理形态学改变;应用免疫组化方法和图象分析系统检测脊髓背角TNF-α的表达。结果 与A组比较,B、C组大鼠机械缩足阈值降低（均P＜0.05）,脊髓背角组织中TNF-α表达显著升高（均P＜0.01）;与B组比较,C组机械缩足阈值升高 （P＜0.05）,TNF-α表达显著降低（P＜0.01）。尼氏染色显示,B组大鼠脊髓尼氏小体呈现破碎和溶解性改变,鞘内注射芬太尼可改善尼氏小体的变化。结论 糖尿病大鼠周围神经病变引起的神经痛与脊髓背角促炎性细胞因子TNF-α有关。鞘内注射芬太尼对脊髓有保护作用,并可明显抑制脊髓背角TNF-α的表达,减轻糖尿病神经痛。     

反义蛋白激酶Cγ寡核苷酸对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶Cγ mRNA表达与皮质和海马神经元增殖及神经突起生长的影响

目的:观察阳离子脂质体Lipofectamine介导的蛋白激酶CγAsODN对原代培养大鼠脑神经元蛋白激酶CγmRNA表达及生长的影响。方法:实验于2004-03/08在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成。①实验分组:取新生50只SD乳鼠大脑皮质及海马神经元进行原代培养,分为正常对照组,空脂质体转染组,300nmol/L Lipofectamine-SODN转染组,100nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,300nmol/L Lipofectamine-AsODN转染组,每组10瓶。②实验方法:培养第4￣5天采用脂质体或脂质体包裹的不同浓度的AsODN或SODN蛋白激酶Cγ转染培养神经元。③实验评估:采用倒置显微镜对神经元的生长进行动态观察;免疫组化ABC法进行蛋白激酶Cγ阳性神经元的鉴定;MTT法检测神经元的增殖率;RT-PCR方法检测转染后神经元的蛋白激酶CγmRNA的表达变化。结果:①蛋白激酶Cγ阳性神经元呈胞浆内棕褐色染色,胞核不显色。②蛋白激酶CγAsODN转染早期呈现促进神经元突起生长,胞体分化的作用。随着反义浓度增加,相对生长指数值升高。而在转染晚期,ASODN蛋白激酶Cγ转染组凋亡率均明显增加。③AsODN蛋白激酶Cγ可降低神经元蛋白激酶CγmRNA的表达。结论:蛋白激酶CγAsODN可减少神经元蛋白激酶CγmRNA的表达,并刺激皮质及海马神经元的增殖及神经突起的生长,这可能与蛋白激酶Cγ对神经元的生长起负性调控作用有关。     

不同统计学指标评价体外循环心内直视术后患者早期认知功能障碍的比较

目的 通过神经心理测验观察体外循环心内直视术前、术后患者认知功能的变化，比较不同统计学指标评价体外循环心内直视术后早期认知功能障碍的发生率，为临床应用提供参考。方法 择期体外循环心内直视术患者47例，ASAⅡ或Ⅲ级，年龄15～45岁。分别在术前第1天和术后第7天行神经心理测验。另选取健康志愿者40名，间隔7d行神经心理测验2次，作为对照，采用标准差指数（SDI）、可信改变指数（RCI）和改良可信改变指数（MRCI）评价各项测验中认知功能损害的发生率及总认知功能障碍的发生率。结果 采用SDI、RCI和MRCI判断的总认知功能障碍发生率分别为14．9％、8．5％、19．1％，差异有统计学意义（P〈0．05）。与SDI比较，视觉再生测验中RCI和MRCI评价的认知功能损害发生率降低，数字符号测验中MRCI评价的认知功能损害发生率升高（P〈0．05）；与MRCI比较，数字符号测验中SDI、RCI评价的认知功能损害发生率降低（P〈0．05）。结论 对体外循环心内直视术患者，MRCI是分析术后早期认知功能较合理的统计学指标。     

颅内注射罗哌卡因对大鼠胃癌痛阈的影响

目的 观察颅内注射局麻药罗哌卡因对大鼠骨癌痛阈的影响,探讨骨癌痛的机制. 方法 建立大鼠骨癌痛模型后,立体定位引导下在大鼠脑干延髓头端腹内侧区（rostral ventromedial medulla,RVM）置管,通过von Frey filaments, Pin Prick test, Ambulatory pain三种方法检测骨癌痛大鼠在RVM内给予罗哌卡因后痛阈的改变. 结果 构建骨癌痛模型后,大鼠痛阈呈现进行性下降趋势. 颅内微注射0.5%罗哌卡因后,骨癌痛大鼠的机械性痛觉超敏,机械性痛觉过敏,移动触诱发痛3种不同性质的疼痛痛阈均显著升高,痛觉行为显著改善. 结论 RVM区内注射局麻药罗哌卡因可以起到显著的镇痛效果,提示脑干RVM区在骨癌痛的形成和维持中起重要作用.     

连续小剂量吗啡腹腔注射对CCI大鼠抗伤害效应的实验研究

目的　观察坐骨神经慢性收缩损伤(CCI) 后小剂量吗啡连续腹腔注射对大鼠痛敏的影响, 以及脊髓背角c -fos基因及TrkA受体表达, 探讨吗啡耐受的可能机制。方法　选择雌性SD大鼠40只, 随机分为4组, A组: 假手术组, B组: CCI组, C组: CCI 生理盐水组, D组: CCI 吗啡组[5 mg/ (kg·d)], 分别于术前2 d, 术后7、14d进行热痛阈测试, 免疫组织化学方法检测术后7、14 d c fos基因及TrkA受体的表达。结果　A组术后术侧热痛阈轻度下降, 与术前相比差异无显著性意义。B、C、D组术后术侧呈现不同程度热痛阈下降, 以术后14 d为著, B、C组与A组相比, 差异均有极显著性意义(均P<0. 01), D组与A组相比, 差异有显著性意义(P<0. 05)。CCI术后14 d脊髓c fos基因、TrkA受体的表达较术后7 d明显增加, c fos基因的表达主要集中于脊髓背角表层Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ层的中间内侧部, TrkA受体分布于Ⅱ~Ⅴ层。c -fos基因、TrkA受体的表达在B、C、D 3 组与A组相比, 差异具有显著性意义(P<0 .05); D组与B组相比, 差异无显著性意义(P>0. 05)。结论　小剂量吗啡连续腹腔注射不能有效抑制坐骨神经损伤后热痛觉过敏及脊髓背角c -fos基因、TrkA受体的表达, 可能与长时间使用吗啡导致脊髓背角神经元兴奋性进一步升高, 发生中枢可塑性改     

Immortalized Rat Astrocyte Strain Genetically Modified by Rat Preprogalanin Gene

Galanin is a neuropeptide consisting of 29 or30 (in humans) amino acids which is widely dis tributed in the central and peripheral nerve systemand is involved in a variety of physiological andpathophysiological activities, including pain signa ling. It has been proposed to play a central role inthe inhibition of neuropathic pain. More recently,the strategy of transgenic cell grafts as“biologicalminipumps” to deliver anti nociceptive moleculesnear the pain processing cen…     

听觉诱发电位和脑电双频指数用于预先镇痛后全子宫切除术后全麻恢复期意识恢复程度的比较

目的:脑电双频指数(B IS)和听觉诱发电位(AEP)监测预先镇痛后全子宫切除术后全麻恢复期意识程度的比较。方法:选择40例ASA I~Ⅲ级行全子宫切除术的病人,随机分为对照组(n=20)和预先镇痛组(n=20),所有病人均在静-吸复合麻醉下完成手术。预先镇痛组在手术开始前使用曲马多1.5 mg/kg。术后推入苏醒室,记录B IS、AEP、VAS镇痛评分和术后寒颤和躁动的发生率。结果:①VAS,预先镇痛组优于对照组(P<0.05);②OAA/S评分、B IS和AEP,OAA/S评分和B IS在5 m in和10 m in两个时间点,预先镇痛组低于对照组(P<0.05),而AEP在各个时间点,预先镇痛组均低于对照组(P<0.05);③术后寒颤和躁动的发生率,预先镇痛组明显低于对照组。结论:AEP和B IS均能够良好地反映患者的意识恢复程度,但B IS主要反映患者镇静程度,而AEP更能够综合反映患者镇静、镇痛程度。