TRPM7在膀胱癌细胞增殖与凋亡中的调控作用

目的 探讨薄荷醇受体7（transient receptorpotential melastatin 7,TRPM7）在膀胱癌细胞株T24细胞增殖与凋亡中的调控作用及分子机制.方法 采用RT-PCR及Western blot检测T24细胞株中TRPM7 mRNA及蛋白的表达;分别采用通道阻滞剂及基因沉默的方法阻断TRPM7离子通道的功能,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率,Western blot检测Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达.结果 RT-PCR及Western blot证实T24细胞株中存在TRPM7 mRNA及蛋白的表达;采用基因沉默及通道阻滞剂阻断TRPM7的功能后,T24细胞存活率分别下降了56.48％和54.87％,处于G0/G1期的细胞随阻滞剂浓度增加而显著增加,细胞凋亡率亦随之增加并呈浓度依赖性,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.Western blot显示阻断TRPM7后,T24细胞Cdk4、Cdk6的表达减少,而Cyto C的表达增加.结论 TRPM7可促进T24细胞增殖,抑制细胞凋亡.这一过程可能通过调节Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达来实现.阻断TRPM7的功能,能够抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,可能为临床治疗膀胱癌提供新的靶点.     

膀胱癌组织中 uPA 和 MMP-9 表达与肿瘤微血管生成关系的研究

目的 研究膀胱癌组织中尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活剂(uPA)和基质金属蛋白酶 9(MMP-9)表达及与肿瘤微血管生成之间的关系.方法 运用免疫组化 S-P 法检测 66 例膀胱癌组织和 19 例膀胱良性病变组织(对照组)中 uPA 和 MMP-9 的表达,同时分析不同 uPA 和 MMP-9 表达状态下,膀胱癌组织微血管密度(MVD)的变化.结果 膀胱癌组织中 uPA 和 MMP-9 的表达率分别为 72.7%(48/66)和 75.8%(50/66),高于对照组中 uPA 和 MMP-9 的表达率(分别为 26.3%,5/19;和 4.21%,8/19),差异有统计学意义(P 值分别为＜0.001 和 0.005);浸润性癌中 uPA 和 MMP-9 的表达均强于浅表性癌,差异有统计学意义(P 值分别为 0.046 和 0.004);低中分化癌中 uPA 的表达强于高分化癌,差异有统计学意义(P=0.003),MMP-9 的表达与肿瘤病理分级无关;uPA 表达与 MMP-9 表达呈显著正相关关系(rs=0.269,P=0.029).将膀胱癌分为 3 组,A 组为 uPA/MMP-9 两者均为弱表达(n=14),B 组为 uPA/MMP-9 两者之一为弱表达(n=19),C 组为 uPA/MMP-9 两者均为弱表达(n=33). 3 组 MVD 计数分别为 89.9±23.8,71.8±22.0 和 62.6±31.9 ,A 组 MVD 计数高于 C 组,差异有统计学意义(P=0.003).结论 uPA 和 MMP-9 的表达与膀胱癌的浸润和肿瘤微血管生成密切相关,VPA 和 MMP-9 的表达具有协同性,二者的联合检测可作为判断膀胱癌预后的分子标记.     

体外构建尿路上皮细胞-胶原膜的组织工程复合物

目的：将培养扩增的猪膀胱移行上皮细胞接种到聚乙烯醇改良的牛Ⅰ型胶原膜上，观察体外构建用于新膀胱黏膜移行上皮化改造的组织工程复合物的可行性。 方法：实验于2005-03／05在广东省人民医院医学研究中心完成。①猪膀胱移行上皮细胞的原代及传代培养。②测定膀胱移行上皮细胞在胶原膜浸提液中增殖率：取第2，3代细胞用角化细胞无血清培养基将细胞制成悬液，分为对照组（正常角化细胞无血清培养基）和实验组（浸提液）进行培养，分别于第1，3，7天，采用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增值率（实验组A490值／对照组A490值&;#215;100％），并参照美国药典中细胞相对增殖率与细胞毒性分级的关系对材料进行毒性评级。③通过组织学观察和扫描电镜观察，了解细胞在胶原膜支架上的黏附和生长情况。 结果：①猪膀胱移行上皮细胞可在体外培养至第9代。②第1，3，7天实验组细胞相对增殖率分别为：94．59％，100．95％和82．42％，与对照组（100％）比较差异无显著性（P〉0．05）。胶原膜细胞毒性为Ⅰ级（无细胞毒性）。③细胞在胶原膜上黏附、生长和增殖良好。 结论：该方法可成功培养扩增猪膀胱移行上皮细胞，胶原膜与膀胱移行上皮细胞生物相容性良好。该细胞可与胶原膜复合构建成可移植的组织工程膀胱黏膜替代物，有望用于新膀胱的移行上皮改造。     

提高等离子经尿道前列腺电切手术安全性的技术要领(附光盘)

与传统经尿道前列腺电切术(TURP)相比,等离子TURP,即经尿道等离子双极电切术(PKRP)具有多方面的优势,已经对传统TURP手术的"金标准"地位形成挑战。为了使初学者尽快提高PKRP手术水平,本文作者结合自己多年的临床实践,从适应证的把握、手术的技巧及并发症的预防处理等方面详述了提高PKRP手术安全性的技术要领。     

以纤维蛋白凝胶为支架构建组织工程胃新膀胱的研究

目的探讨以纤维蛋白凝胶为支架，通过组织工程技术以胃．重建膀胱的可行性。方法从实验动物获取膀胱黏膜，体外培养并扩增移行上皮细胞。分别通过纤维蛋白凝胶（实验组）和keratinocyte-SFM（对照组）将单个细胞悬液移植于带血管蒂的去黏膜胃片，将胃片缝成囊状（新膀胱），固定于腹壁。于术后2、4、6、8周取胃片进行组织学及免疫组化分析。结果实验组术后随时间延长新膀胱有不同程度挛缩；HE染色提示胃囊腔面有上皮样细胞覆盖，2周时细胞覆盖率约50％，4—8周时约70％。这些细胞分布不均匀，分层不明显；上皮样细胞AE1／AE3染色和CK7染色均阳性。对照组各标本均严重挛缩，腔隙消失，无上皮覆盖。结论将体外培养扩增的尿路上皮细胞通过纤维蛋白凝胶移植至去黏膜胃片，可以使去黏膜胃片移行上皮化，从而重建膀胱。     

三种PDE5抑制剂的药代动力学、起效时间和维持时间

勃起功能障碍（Erectile dysfunction，ED）是指不能达到或维持勃起足以进行满意的性生活^[1]。ED的治疗目前仍主要应用口服药物治疗。西地那非（Sildenafil）、伐地那非（Vardenafil）和他达拉非（Tadalafil）是其中研究较多的3种。西地那非由美国辉瑞（Pfizer）公司研制生产的一种磷酸二脂酶5（phosphodiesterase5，PDE5）抑制剂，     

瞬时感受电位基因家族成员TRPV4在大鼠睾丸组织中的表达

背景：瞬时感受电位(transient receptor potential，TRP)通道在人体遍布多种组织和细胞，并参与人体几乎所有的生理功能和许多病理变化。 目的：观察瞬时感受电位基因亚家族成员TRPV4 在大鼠睾丸组织中的表达。 设计、时间及地点：单一样本观察。实验于2007-03/2008-04在广东省人民医院医学研究中心完成。 材料：SD 大鼠5只；TRPV4 引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。 方法：选用SD 大鼠，取20 mg睾丸组织，用RNAprep_动物组织/细菌总RNA提取试剂盒提取总RNA，取1 μg总RNA，用于合成cDNA。 主要观察指标：用常规反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学染色检测TRPV4 在大鼠睾丸组织中的表达。 结果：常规反转录-聚合酶链反应方法检测到在TRPV4 的泳道中可见一条带，大小与期望长度符合；免疫组织化学染色可见TRPV4 阳性片中较成熟的生精细胞和支持细胞为黄褐色。 结论：TRPV4 在睾丸组织上有表达，主要表达在较成熟的生精细胞和支持细胞上。     

尿膀胱癌抗原、透明质酸和存活素联合应用对膀胱癌的诊断价值

目的评价联合运用尿膀胱癌抗原(UBC)、透明质酸(HA)和存活素诊断膀胱癌的临床应用价值。方法64例膀胱癌患者、20例泌尿系良性疾病患者在膀胱镜检查前留尿,分别进行UBC、HA、存活素和脱落细胞学检测,比较4种方法诊断膀胱癌的价值。膀胱癌患者肿瘤分级G_1 11例,G_2 38例,G_3 15例；病理分期pT_(is) 2例,pT_1 36例,pT_1 16例,≥pT_2 10例。结果UBC、HA和存活素诊断膀胱癌的敏感性分别为85.9%(55/64)、89.1%(57/64)、93.8%(60/64),与脱落细胞学(40.6%)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),4种方法诊断膀胱癌的特异性分别为85.0%(17/20)、80.0%(16/20)、95.0%(19/20)和95.0%(19/20)。各分级和分期UBC、HA和存活素诊断膀胱癌的敏感性均高于尿脱落细胞学检查；UBC值各分级和分期比较差异无统计学意义(P＞0.05)。HA检测值G_2、G_3组均明显高于G_1组(P＜0.01),但G_2、G_3组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)；各分期之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。存活素检测各分级和分期之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。而对尿细胞学来说,肿瘤分级越高,敏感性越高(P＜0.01),各分期之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。联合应用UBC、HA和存活素诊断膀胱癌的敏感性和特异性均达到100%。结论尿中UBC、HA和存活素是早期诊断膀胱癌的较好肿瘤标记物,3项检测联合能提高诊断的敏感性和特异性。     

浅表性膀胱癌术后早期膀胱内灌注吡柔比星预防复发疗效观察

目的评价浅表性膀胱癌术后早期膀胱内灌注吡柔比星(THP)预防肿瘤复发的疗效和安全性。方法对18例浅表性膀胱癌患者行TUR-Bt或膀胱部分切除术,术后一周内开始30mgTHP/50ml蒸馏水膀胱内灌注,药物于膀胱内保留30分钟,每周一次,连续八周,以后每月一次,连续八个月。结果随访6～12个月,无一例复发,其中10例出现短时期的膀胱激惹症状,4例TUR-Bt术的患者创面修复延迟,其余病例均愈合良好。结论浅表性膀胱癌术后早期予THP膀胱内灌注预防肿瘤复发疗效肯定、安全可靠、对手术创面愈合影响不大。     

人类肾切除术后早期血清促肾生长因子及EGF活性测定

为阐明人类肾切除术后促肾生长因子与EGF的关系，对30例肾切除病人术前及术后血清，分别用3H－TDR掺入法测定促肾生长因子活性，用放射受体法测定EGF活性。结果表明肾切除术后第2、5天血清促肾生长因子活性较术前明显增高，而EGF活性术前、后无明显差异。提示EGF不是促肾生长因子，二者可能是通过不同环节参与肾代偿性生长的机制。